专利名称：一种番茄种质烟粉虱抗性的鉴定方法烟粉虱(Bemisia tabaci)起源于热带和亚热带地区，目前已经遍布全世界(Barro et al.，1998)，是全球大田和园艺作物生产上最为严重的虫害之一(Gerling and Mayer, 1996)。烟粉虱为杂食性昆虫，取食的植物高达900多种(Brown et al.，1995)。番茄是世界上重要的蔬菜作物。前人报道番茄的普通栽培品种对烟粉虱的抗性很低(Freitas et al.，2002)。烟粉虱可以直接取食番茄韧皮部的汁液导致植株生长发育不良；在番茄的果实和叶片上分泌蜜露，导致番茄的非正常成熟和霉污病(Schuster et al., 1995)；最为严重的是烟粉虱虱可以传播多种植物病毒，其中的番茄黄化曲叶病毒给番茄生产造成巨大的损失(Polston and Anderson，1997)。每年要花费巨大的人力和物力用于烟粉虱的生物学防治和化学防治，但是烟粉虱危害依然造成番茄生产的巨大损失((De Ponti et al. , 1975 ；Bas et al. , 1992 ；Sanchez- Pena et al.，2006)，所以市场上对于抗烟粉虱的番茄品种需求紧迫。番茄对烟粉虱的抗性由多基因控制，易受到多种条件的影响，如烟粉虱群体变化和环境条件的改变等都会导致抗性的改变(De Ponti et al. , 1975 ；Bas et al.，1992)。此外番茄抗烟粉虱的育种和研究过程中，大量番茄群体的抗性鉴定在所难免。 所以规范、简单、高效的抗烟粉虱鉴定方法对于番茄抗虫育种和研究至关重要。目前在番茄抗烟粉虱研究和育种中，对烟粉虱抗性鉴定的方法多种多样。有些研究人员在温室或者大田利用烟粉虱自然侵染或者人工接虫侵染，一般在一个月以后调查番茄特定叶位上烟粉虱的产卵率、成虫成活率、若虫羽化率等指标，衡量不同番茄材料的抗性 (Muigai et al. ,2002 ；Muigai et al.，2003)。很多研究人员利用该种方法有效的区分出不同番茄材料对烟粉虱抗性的强弱。但是这种方法占地面积大，环境条件不易控制，持续时间长，工作量大，最为不利的是烟粉虱对番茄整株侵染，对植株造成损伤，易感染番茄黄化曲叶病毒，不利于得到后代的种子。有些研究人员将微虫笼固定在番茄特定叶位的小叶上，在微虫笼中放入特定数量的烟粉虱(Berlinger and de Ponti，1981 ；Romanow et al.， 1991)，一个月或者更长时间后，统计叶片上的虫卵量、若虫羽化率和成虫成活率等(Bas et al.，1992，；Bonierbale et al.，1994 ；Maliepaard et al.，1995)。也有的研究人员在烟粉虱侵染M小时后，统计烟粉虱的成虫死亡率和产卵量做为番茄抗性的鉴定指标(Momotaz et al.，2010)。目前为止大部分育种家和研究人员采用该种方法进行抗虫性鉴定。但是这种方法也存在一些缺点，用于侵染的烟粉虱必须是相同龄期和一定的雌雄比例，烟粉虱的前期收集繁琐复杂；微虫笼空间狭小，影响烟粉虱的自由活动；有的番茄小叶面积较小，无法承受微虫笼的重量，烟粉虱容易逃脱；占地面积比较大，工作量大，不适合用于群体的抗虫性鉴定。
本发明的目的在于提供一种番茄种质对烟粉虱抗性的鉴定方法。本发明提供的番茄对烟粉虱抗性的鉴定方法，其为分别以相同苗龄的已知抗烟粉虱种质、已知感烟粉虱种质和待鉴定种质生长点向下第2和/或第3片完全展开叶为离体接卵的材料，在接虫笼内接种烟粉虱成虫，4小时 3天后，根据叶片背面的烟粉虱虫卵量确定对烟粉虱的抗性。其中，所述苗龄优选为幼苗期，更优选为6周苗龄。其中，烟粉虱成虫的接种量优选为20 200头烟粉虱成虫/叶，更优选为100头烟粉虱成虫/叶。本发明优选的一个实施方案中，所述的鉴定方法为分别将相同六周苗龄的已知抗烟粉虱种质、已知感烟粉虱种质和待鉴定种质生长点向下第2和/或第3片完全展开叶插入到装满清水的三角瓶内，用海绵条固定叶片，在接虫笼内接种烟粉虱成虫，接种量为100 头烟粉虱成虫/叶，8个小时后，根据叶片背面的烟粉虱虫卵量确定对烟粉虱的抗性。本发明中，通过上述方法确定叶片背面的烟粉虱虫卵量后，如果待测种质与已知抗烟粉虱种质的叶片背面的烟粉虱虫卵量无显著性差异，且与已知感烟粉虱种质叶片背面的烟粉虱虫卵量存在显著性差异，该待测种质为抗烟粉虱；如果待测种质与已知抗烟粉虱种质的叶片背面的烟粉虱虫卵量存在显著性差异，且与已知感烟粉虱种质叶片背面的烟粉虱虫卵量无显著性差异，该待测种质为感烟粉虱；如果待测种质与已知抗烟粉虱种质的叶片背面的烟粉虱虫卵量无显著性差异，且与已知感烟粉虱种质叶片背面的烟粉虱虫卵量无显著性差异，该待测种质为中抗烟粉虱。本发明还提供一种筛选抗烟粉虱的番茄种质的方法，其为以六周苗龄的番茄植株生长点向下第2和/或第3片完全展开叶为离体接卵的材料，在接虫笼内接种烟粉虱成虫， 8个小时后，统计叶片背面的烟粉虱虫卵量。本发明中，现有的已知抗烟粉虱种质可为野生多毛番茄和潘那利番茄，如野生多毛番茄LA1777和PI134417。现有的番茄栽培品种均为感烟粉虱，如早粉2号、9706或 Moneymaker 等。本发明还提供上述的鉴定方法在筛选抗烟粉虱番茄种质中的应用。本发明的离体鉴定方法相对于现有的抗性鉴定方法更加准确、占地少、省时、省力，容易控制环境条件，更适合用于大量群体的抗虫性鉴定。对于临时性群体(如BC1, F2 等)可以进行抗虫性鉴定的重复，而不会影响植株的生长，更有利于得到后代种子。离体鉴定时所有的叶片处于同一高度，可以避免叶片位置对烟粉虱产卵量的影响。离体鉴定可以在苗期进行，鉴定完成后，植株可以定植到大田或者温室，不影响番茄植株的后期生长发育，对于得到抗虫性材料更加有利。图1所示为番茄离体和活体烟粉虱抗性的鉴定。其中，A为关闭的接虫笼；B为打开的接虫笼；C为用于离体鉴定的叶片；D为用于活体生物学鉴定的植株；E为离体生物学鉴定；F为活体生物学鉴定。图2所示为本发明的离体生物学鉴定和现有的活体生物学鉴定中烟粉虱虫卵量的变异系数比较。

本发明提供一种番茄对烟粉虱抗性的鉴定方法，其为分别以相同苗龄的已知抗烟粉虱种质、已知感烟粉虱种质和待鉴定种质生长点向下第2和/或第3片完全展开叶为离体接卵的材料，在接虫笼内接种烟粉虱成虫，4小时～3天后，根据叶片背面的烟粉虱虫卵量确定对烟粉虱的抗性。本发明的方法可以有效区分不同番茄材料之间对烟粉虱抗性的强弱。相对于利用番茄植株活体叶片进行抗虫性鉴定，该方法更为准确、省时、省工，更适合于大量筛选抗烟粉虱的番茄种质材料。