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一种饲用复合小肽的制备方法

  • 专利名称
    一种饲用复合小肽的制备方法
  • 发明者
    潘军, 张伟强, 王瑞平, 苏全, 马春平
  • 公开日
    2012年12月19日
  • 申请日期
    2012年8月2日
  • 优先权日
    2012年8月2日
  • 申请人
    广州市博善生物饲料有限公司
  • 文档编号
    A23K1/16GK102823731SQ20121027294
  • 关键字
  • 权利要求
    1.一种饲用复合小肽的制备方法,包括如下步骤 1)将蛋白原料、碳源和水配制成培养液,灭菌; 2)将芽孢菌接种到灭菌后的培养液中,30 37°C下振荡培养18 30h后,加入蛋白酶,35 50°C,pH6. O 7. 5,继续酶解6 12h,得到小肽发酵液;或者是往培养液中加入蛋白酶,35 50°C,pH6. O 7. 5,酶解6 12h后,接种芽孢菌,30 37°C下继续振荡培养18 30h,得到小肽发酵液; 3)将小肽发酵液干燥,得到饲用复合小肽2.根据权利要求I所述的饲用复合小肽的制备方法,其特征在于所述蛋白原料为豆柏、大米蛋白粉、小麦蛋白粉、玉米蛋白粉、棉柏、花生柏、马铃薯蛋白、菜柏、大豆浓缩蛋白中的至少一种3.根据权利要求I所述的饲用复合小肽的制备方法,其特征在于所述碳源为葡萄糖、蔗糖、淀粉中的至少一种4.根据权利要求I所述的饲用复合小肽的制备方法,其特征在于每IOOml培养液中,含有蛋白原料20 30g、碳源O. I lg5.根据权利要求I所述的饲用复合小肽的制备方法,其特征在于所述芽孢菌为地衣芽抱杆菌(Baci I Ius Iicheniformi S、或/和枯草芽抱杆菌iBcillus subtil is)或/和纳豆芽抱杆菌natto)6.根据权利要求I所述的饲用复合小肽的制备方法,其特征在于所述芽孢菌的接种浓度为5 X IO7 IOX 107cfu/ml培养液7.根据权利要求I所述的饲用复合小肽的制备方法,其特征在于所述蛋白酶为中性蛋白酶8.根据权利要求I或7所述的饲用复合小肽的制备方法,其特征在于所述蛋白酶的加入量为400 700U/g蛋白原料
  • 技术领域
    本发明涉及一种饲用复合小肽的制备方法
  • 背景技术
  • 具体实施例方式
    下面结合实施例对本发明作进一步的说明,但并不仅限于此以下实施例中所用到的菌液按以下方法制备
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:一种饲用复合小肽的制备方法小肽(P印tides)是由两个以上的氨基酸组成,有二肽到多肽之分。小肽作为蛋白质的主要消化产物,在氨基酸消化、吸收以及动物营养代谢中起着重要的作用。研究表明,小肽和氨基酸的混合物在人体的吸收率和吸收速度都比单纯氨基酸佳,不仅如此,小肽还能在肠道内保护易被破坏的氨基酸。此外,单纯的氨基酸在体内根据需要新组成肽和蛋白质,而小肽和氨基酸的混合物可省去一部分重新组合的过程,因此,它的生物效价更高。小肽可促进动物对矿物元素的吸收利用,其促进作用主要来源于酪蛋白肽的水解产物,由酶解酪多聚谷蛋白获得的肽可结合和运输二价矿物离子。小肽的氨基酸残基可与金属离子螯合,可以避免肠腔中颉颃因子及其他影响因子对矿物元素的沉淀或吸附作用,直接到达小肠刷状缘,并在吸收位点处发生水解,从而增加矿物质元素的吸收。小肽具有生理调节作用。它可以通过诱导小肠中一些酶活性的提高,而使小肠消化功能发育提前,促进动物体对营养物质的消化吸收,从而提高动物体的免疫机能和生产性能。
本发明的目的在于提供一种饲用复合小肽的制备方法。本发明所采用的技术方案是 一种饲用复合小肽的制备方法,包括如下步骤 1)将蛋白原料、碳源和水配制成培养液,灭菌; 2)将芽孢菌接种到灭菌后的培养液中,30 37°C下振荡培养18 30h后,加入蛋白酶,35 50°C,pH6. O 7. 5,继续酶解6 12h,得到小肽发酵液;或者是往培养液中加入蛋白酶,35 50°C,pH6. O 7. 5,酶解6 12h后,接种芽孢菌,30 37°C下继续振荡培养18 30h,得到小肽发酵液; 3)将小肽发酵液干燥,得到饲用复合小肽。蛋白原料为豆柏、大米蛋白粉、小麦蛋白粉、玉米蛋白粉、棉柏、花生柏、马铃薯蛋白、菜柏、大豆浓缩蛋白中的至少一种或几种组合。碳源为葡萄糖、蔗糖、淀粉中的至少一种。以上原料均可在原料市场购得。每IOOml培养液中,含有蛋白原料20 30g、碳源O. I lg。 芽孢菌为地衣芽孢杆菌QBaciIlus Iicheniformis)或/和枯草芽孢杆菌{BeilIus subtilis、或 I 和纳豆芽抱杆菌Cfeci77w5· natto、。芽孢菌的接种浓度为5 X IO7 IOX 107cfu/ml培养液。蛋白酶为中性蛋白酶。蛋白酶的加入量为400 700U/g蛋白原料。本发明的有益效果在于
本发明方法制备得到的复合小肽分子量主要集中在238 568Da,约2 5肽,小肽得率占蛋白质含量的35%以上。复合小肽风味独特、口感好,可用作饲料添加剂,提高动物动物体的生产性能。


图I是蛋白含量与吸光度值标准曲线 图2是标准蛋白的分子量和出峰时间曲线3是小肽发酵液凝胶G-15洗脱图谱。

从斜面试管培养基中刮取一环地衣芽孢杆菌Iicheniformis)或枯草芽孢杆菌iBcillus或纳豆芽孢杆菌{Bacillus菌种加入到液体培养基中,摇
瓶培养。摇瓶种子培养基与培养条件为葡萄糖1%、酵母膏O. 5%、蛋白胨O. 5%、牛肉膏O. 5%、食盐O. 05%、磷酸二氢钾O. 1%,ρΗ=7. 0-7. 2、121°C灭菌18分钟。于32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h,得到菌种液。以上三个菌种购自广东省微生物菌种保藏中心,地衣芽孢杆菌(McilliisIi cheni formi s )和枯草芽抱杆菌 C5ci77w5· subtil is、的编号分别为 GIM1. 8=AS1. 518,GIM1. 19=AS1. 210。以下实施例中所用到的中性蛋白酶购自肇东市日成酶制剂有限公司,商品型号为AS. 1398,酶活力为 50000U/g。实施例I
小肽复合物的制备方法1,包括如下步骤
O培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg鹿糖,4kg葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的地衣芽孢杆菌菌种液接入上述灭菌后的1000L培养液中,使培养液中菌体浓度约为5X107cfu/ml,30°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为7.0,加入3kg中性蛋白酶(500U/g蛋白原料),45°C继续酶解10h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过40目筛,得饲用复合小肽。实施例2
小肽复合物的制备方法2,包括如下步骤
I)培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,8kg蔗糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液PH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小妝发酵液制备将在32C恒温摇床中,200r/min振汤培养24h后的枯早牙抱杆囷菌种液接入上述灭菌后的IOOOL培养液中,使培养液中菌体浓度约为5X 107cfu/ml,30°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为6. 8,加入2. 4kg中性蛋白酶(400U/g蛋白原料),43°C继续酶解12h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例3
小肽复合物的制备方法3,包括如下步骤
1)培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米 蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,6kg葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液PH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的纳豆芽孢杆MiMcilliis aaiio)菌种液接入上述灭菌后的1000L培养液中,使培养液中菌体浓度约为5X107cfu/ml,32°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为6. 8,加入
3.6kg中性蛋白酶(600U/g蛋白原料),43°C继续酶解12h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例4
小肽复合物的制备方法4,包括如下步骤
I)培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg蔗糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的地衣芽孢杆菌菌种液和枯草芽孢杆菌菌种液接入上述灭菌后的1000L培养液中,使培养液中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,32°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为6. 8,然后加入4. 2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),40°C继续酶解12h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例5
小肽复合物的制备方法5,包括如下步骤
1)培养液的制备50kg粗蛋白含量为46%的豆柏,20kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉,30kg粗蛋白含量为35%菜柏,20kg粗蛋白含量为48%的花生柏,60kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,20kg粗蛋白含量为80%的小麦蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg蔗糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121。。灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备将于32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h的地衣芽孢杆菌菌种液接入上述灭菌后的1000L培养液中,使培养液中菌体浓度约为5X 107cfu/ml,35°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为7. O,加入3kg中性蛋白酶(500U/g蛋白原料),45°C继续酶解10h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过40目筛,得饲用复合小肽。实施例6
小肽复合物的制备方法6,包括如下步骤
1)培养液的制备50kg粗蛋白含量为46%的豆柏,20kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉、15kg粗蛋白含量为35%菜柏、20kg粗蛋白含量为48%的花生柏,95kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,8kg淀粉,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C 灭菌18分钟;
2)小妝发酵液制备将在32C恒温摇床中,200r/min振汤培养24h后的枯早牙抱杆菌菌种液接入上述灭菌后的1000L培养液中,使培养液中菌体浓度约为5 10X107cfu/ml,37°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为6. 8,加入2. 4kg中性蛋白酶(400U/g蛋白原料),43°C继续酶解12h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例7
小肽复合物的制备方法7,包括如下步骤
1)培养液的制备50kg粗蛋白含量为46%的豆柏,20kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉,15kg粗蛋白含量为35%菜柏,20kg粗蛋白含量为48%的花生柏,95kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg鹿糖,4kg葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的纳豆芽孢杆MiMcilliis aaiio)菌种液接入上述灭菌后的1000L培养液中,使培养液中菌体浓度约为5X107cfu/ml,32°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为6. 8,加入2. 4kg中性蛋白酶(400U/g蛋白原料),43°C继续酶解12h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例8
小肽复合物的制备方法8,包括如下步骤
40kg粗蛋白含量为46%的豆柏,15kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉,15kg粗蛋白含量为35%菜柏,20kg粗蛋白含量为48%的花生柏,95kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,15kg粗蛋白含量42%的棉柏,6kg葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的地衣芽孢杆菌菌种液和枯草芽孢杆菌菌种液接入上述灭菌后的1000L培养液中,使培养液中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,32°C培养24小时后,加入盐酸或氢氧化钠调节培养基pH值为6. 8,然后加入4. 2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),40°C继续酶解12h,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例9
小肽复合物的制备方法9,包括如下步骤 I)培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉、IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,8kg蔗糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液PH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备灭菌结束,温度降到45 °C后,加入4. 2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),45°C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的地衣芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,使酶解中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5 10X107cfu/ml,35°C培养24小时后,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过40目筛,得饲用复合小肽。实施例10
小肽复合物的制备方法10,包括如下步骤
1)培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg蔗糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备灭菌结束,培养液温度降到45°C后,加入4.2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),45°C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32 °C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的枯草芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,32°C培养24小时后得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例11
小肽复合物的制备方法11,包括如下步骤
1)培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg蔗糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备灭菌结束,培养液温度降到45°C后,加入4.2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),45°C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的纳豆芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,使酶解中纳豆芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,32°C培养24小时后,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例12
小肽复合物的制备方法12,包括如下步骤
I)培养液的制备将IOOkg粗蛋白含量为46%的豆柏,IOOkg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg蔗糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液PH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备灭菌结束,培养液温度降到45°C后,加入2.4kg中性蛋白酶(400U/g蛋白原料),45°C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32 °C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的地衣芽孢杆菌菌种液和枯草芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,使酶解中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,32°C培养24小时后,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例13
小肽复合物的制备方法13,包括如下步骤
1)培养液的制备50kg粗蛋白含量为46%的豆柏,25kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉、15kg粗蛋白含量为35%菜柏、20kg粗蛋白含量为48%的花生柏、65kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,25kg粗蛋白含量72%的马铃薯蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg蔗糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121。。灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备灭菌结束,培养液温度降到45°C后,加入4.2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),45 °C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32 °C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h的地衣芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,使酶解中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,32°C培养24小时后,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过40目筛,得饲用复合小肽。实施例14
小肽复合物的制备方法14,包括如下步骤
1)培养液的制备50kg粗蛋白含量为46%的豆柏,20kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉,15kg粗蛋白含量为35%菜柏,20kg粗蛋白含量为48%的花生柏,95kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg鹿糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备灭菌结束,培养液温度降到45°C后,加入4.2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),45°C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的枯草芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,使酶解中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,32°C培养24小时后,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例15
小肽复合物的制备方法15,包括如下步骤
I)培养液的制备50kg粗蛋白含量为46%的豆柏,20kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉,15kg粗蛋白含量为35%菜柏,20kg粗蛋白含量为48%的花生柏,95kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg鹿糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备灭菌结束,温度降到45°C后,加入4.2kg中性蛋白酶(700U/g蛋白原料),45°C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h后的纳豆芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,使酶解中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5 X IO7Cfu/ml,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,36°C培养24小时后,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。实施例16
小肽复合物的制备方法16,包括如下步骤
1)培养液的制备50kg粗蛋白含量为46%的豆柏,20kg粗蛋白含量为50%的玉米蛋白粉、15kg粗蛋白含量为35%菜柏、20kg粗蛋白含量为48%的花生柏、95kg粗蛋白含量为60%的大米蛋白粉,IOOkg粗蛋白含量为65%的大豆浓缩蛋白,4kg鹿糖,4g葡萄糖,用水定容到1000L,用盐酸或氢氧化钠调整反应液pH值到6. 8,121°C灭菌18分钟;
2)小肽发酵液制备.人BaciIIusIicheniformis):灭菌结束,温度降到45°C后,加入2. 4kg中性蛋白酶(400U/g蛋白原料),45°C酶解12h,得到小肽酶解液;将在32°C恒温摇床中,200r/min振荡培养24h的地衣芽孢杆菌菌种液和枯草芽孢杆菌菌种液接入小肽酶解液中,使酶解中地衣芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,枯草芽孢杆菌菌体浓度约为5X 107cfu/ml,33°C培养24小时后,得到小肽发酵液;
3)将小肽发酵液置于80°C烘箱烘干至水分低于10%,粉碎,过60目筛,得饲用复合小肽。一、饲用复合小肽样品的水解度测定
I原理蛋白质的水解度(Degree of hydrolysis, Z)//)的基本定义代表蛋白质在水解过程中,肽键被裂解的程度或百分比,j//=(被水解的肽键数/原料中的总肽键数)X 100%。假设蛋白饲料中蛋白质分子未被水解时肽链长度(即肽中的氨基酸平均数目)为PCL0,则肽键总数目PCL0-1,当被蛋白酶切断η-i个肽键而水解成η个肽时,则蛋白质的水解度DH与肽键总数PCL0-1和切开肽键数(η-i)关系表示如以下公式DH=(n — I)/(PCLO 一 1)X100%因为=PCLO = ηXPCL (水解后小肽平均链长度)DH= (PCLO/ PCL — I)/ (PCL0 — 1)X100%=(I/ PCL - I/ PCLO)/ (1-1/ PCL0)X100%。由于豆柏、玉米蛋白粉、麸皮中蛋白质分子量都较大,水解程度较高,这时可以认为PCLO C ,那么,水解度繼转化为:/^=1/PCLX 100%小肽的平均链长即肽链的平均氨基酸残基数。根据李培骏等(2006)研究总结,小肽的平均链长 I/DH X 100%
2制作标准曲线
2. I完全水解蛋白液的制备取菜籽蛋白100 mg,放入特制的反应瓶,加入100 ml 6mo I盐酸,拧紧瓶盖,放入130°C烘箱中水解24 h,冷却,过滤,滤液真空浓缩至O. 5 ml左右,加蒸馏水90 ml,用I molNaOH中和至中性(pH6),定容至100 ml (参考郭兴凤,蛋白质水解度的测定)。2. 2吸光度值测定取完全水解液0. I πιΓ . O ml于25 ml比色管中,蒸馏水稀释至 4. O ml,加 pH=8 的 PBS 缓冲溶液(O. 2 M Na2HPO4,94. 7 ml 与 O. 2M NaH2PO4, 5. 3ml 合并,混勻)1. O ml,却三酮溶液I. O ml,混勻,沸水浴加热15 min,冷却,蒸懼水稀释至25 ml,570 nm测光密度(水作参比)。另取100 mg蛋白,加水100 mL,振荡均匀后过滤,取相应体积的滤液,按上述方法测光密度值。相同体积样品的光密度之差与蛋白质量做工作曲线,取线性部分做标准曲线,获得已水解的蛋白质的质量(X,mg)对所测溶液的吸光度值(yi)的标准曲线(见表I和图I ),求得回归方程Y1=O. 0003x+0. 0048,R2=O. 9990 ;蛋白质水解度(DH)=已水解的蛋白质的质量/总蛋白质量X 100% ;小肽的平均链长 I/DHX 100%。


本发明公开了一种饲用复合小肽的制备方法,包括如下步骤1)将蛋白原料、碳源和水配制成培养液,灭菌;2)将芽孢菌和蛋白酶接到灭菌后的培养液中,酶解发酵或发酵酶解,得到小肽发酵液;3)将小肽发酵液干燥,得到饲用复合小肽。本发明方法制备得到的复合小肽分子量主要集中在238~568Da,约2~5肽。小肽得率占蛋白质含量的35%以上。复合小肽风味独特、口感好,可用作饲料添加剂,提高动物动物体的生产性能。



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