含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品的制作方法 10059 20141126 [0002] 脂肪肝，是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。脂肪性肝病正 严重威胁国人的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公认为隐蔽性肝硬化的 常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象，而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状， 重者病情凶猛。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。 [0003] 脂肪肝包括酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝两大类。酒精性脂肪肝一般不需特殊 治疗，大多在戒酒和治疗1个月左右，肝内脂肪减少，轻者数月后消失，重者一到两年消失。 非酒精性脂肪肝的诊断需符合以下3项条件：①无饮酒史或饮酒折合乙醇量小于140g / 周（女性<70g /周）；②除外病毒性肝炎、药物性肝病、全胃肠外营养、肝豆状核变性、自 身免疫性肝病等可导致脂肪肝的特定疾病；③肝活检组织学改变符合脂肪性肝病的病理学 诊断标准。在中医学中并无此病名，但根据其临床表现，众多学者认为其当归属于中医学的 "胁痛"、"肥气"、"肝着"、"痰浊"、"积聚"等范畴。 [0004] 目前本病治疗的目标是延缓疾病进展及并发症的发生。主要方法包括基础治疗和 药物治疗，极少数患者需肝移植。基础治疗方法如控制饮食、增加有氧运动、减肥等。西药 尚无防治脂肪肝的有效药物，如维生素 B、C、E，卵磷脂、熊去氧胆酸、水飞蓟素、肌苷、辅酶 A、还原型谷胱甘肽、牛磺酸、肉毒碱乳清酸盐、肝泰乐，以及某些降脂药物等。中医药治疗本 病多是针对湿痰瘀阻互结，痹阻肝络的基本病机，采用疏肝理气、活血化瘀、健脾祛痰、清热 利湿和补益肝肾等治法，临床上确有疗效。 [0005] 由于任何药物进入体内都要经过肝脏解毒，在选用药物时更要慎重，谨防药物的 毒副作用，特别对肝脏有损害的药物绝对不能用，避免进一步加重肝脏的损害。
[0006] 本发明所涉及的中药材均可见记载于《中华本草》。
[0007] 现代的人体及动物实验证明活的乳酸菌具有确切的降胆固醇作用。但是由于人体 肠道内是含有胆盐的酸性环境，所以常见的乳酸菌在人体消化道内难以存活，以至于应用 乳酸菌实现降低胆固醇的发现难以在临床有效实施。



[0008] 本发明的目的在于提供一种含有一种副干酪乳杆菌与中药材提取物复合配方的 保健食品。
[0009] 本发明是通过如下技术方案实现的： 含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品，其特征在于，采用保藏编号为 CGMCC No. 10059的副干酪乳杆菌ZPYOl与中药材提取物组成的复合配方，该配方中含副干 酪乳杆菌ZPYOl冻干粉的重量百分比为20%?50%，其余为中药提取物； 所述中药材提取物为下列重量配比的中药材：蒲公英15份、马齿笕25份、白术6份、白 芍8份、茉莉花6份、桃仁8份、藏红花1份，加水煎煮所得的提取物。
[0010] 所述的副干酪乳杆菌ZPYOl按照以下步骤进行发酵培养：（1)制备脱脂乳培养基： IOOOml蒸馏水中加入IOOg脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，121°C条件下灭菌15min，备用； (2)菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37°C恒温培养；反复接种培养，直至活化 到凝乳时间为4~5h，得发酵液； 所述副干酪乳杆菌ZPYOl冻干粉的制备方法：将上述发酵液离心分离菌体得到菌泥， 向菌泥中加入1倍重量的海藻糖，乳化冻干，即得到所述的副干酪乳杆菌ZPYOl冻干粉。
[0011] 所述中药材提取物的提取方法为：称取所述重量配比的药材，加8倍量水，煎煮 1. 5小时，过滤；滤渣加6倍量水，煎煮1小时，过滤；合并滤液，浓缩，干燥。
[0012] 所述的含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品，应用于预防和治疗 非酒精性脂肪肝。
[0013] 发明人认为，肝脏是脂质代谢的中心，参与脂蛋白的合成和分解。非酒精性脂肪肝 以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征，以肝细胞脂肪变性和脂肪贮积为病理特征。因 此，降血脂和护肝是治疗本病的根本。
[0014] 本发明所采用的保藏编号为CGMCC No. 10059的副干酪乳杆菌ZPYOl为发明人新 近提纯的新菌种，该菌种具有较强的耐酸性，在PH2. 5的酸性条件下可以保持4h活性；对胆 盐的抗性也比较明显，能耐受0. 40%牛胆酸钠。能够实现在人体消化道长时间存活并发挥 降低胆固醇的功效。
[0015] 非酒精性脂肪肝的病机主要为肝失疏泄，脾失健运，湿热内蕴、痰湿内生、瘀血阻 滞，而最终形成痰瘀互结。本发明方中重用马齿笕、蒲公英入肝经，清热解毒，利湿化浊；茉 莉花行气化痰；白术健脾益气；白芍养血柔肝；桃仁以及少量藏红花活血化淤；诸药合用， 共奏清热解毒、利湿化浊、健脾柔肝、活血化瘀之功效。
[0016] 本发明采用副干酪乳杆菌ZPYOl与传统中药结合，从而实现从根本调理病根的同 时迅速降低胆固醇的功效，标本兼治。
[0017] 本发明所选用的原料药食两用，安全性高，适于长期服用。
[0018] 下面结合实验数据说明副干酪乳杆菌ZPYOl的特性： 一、实验材料与方法 (一)、材料 1、菌种 实验菌种来自臧牧民自制牦牛酸奶中，对其进行筛选分离后，参照伯杰氏细菌鉴定手 册(第八版）和《乳酸菌一生物学基础及应用》，对其进行生理生化鉴定。形态观察和生 理生化鉴定结果表明：分离菌为副干酪乳杆菌，命名为副干酪乳杆菌ZPY01，实验编号为： Lp一ZPYOl ;对照菌株Lactobacillus paracasei为公知常见菌株，来自鲁东大学生命科学 学院发酵室，实验编号为：Lp - CK。
[0019] 2、培养基 MRS培养基；胆固醇培养基：在MRS培养基中添加0. 3mg/ml的胆固醇；脱脂乳培养基： 新西兰恒天然脱脂奶粉，121°C灭菌lOmin。
[0020] 3、试剂 牛胆酸钠；胆固醇。
[0021] 4、仪器与设备 722光栅分光光度计，恒温水浴锅、电热蒸汽灭菌锅、生化培养箱、pH计、超净工作台 等。
[0022] (二)、方法 1、脱脂乳培养基 10%脱脂乳培养基：IOOOml蒸馏水中加入IOOg脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，每支分 装10ml，121°C、15min灭菌后备用。
[0023] 2、菌种的活化 将菌种接种至IOml已灭菌的脱脂牛奶中，37°C恒温培养。反复接种培养，直至活化到 凝乳时间为4~5h。
[0024] 3、菌株抗酸性测定 用I. Omol/L的HCl将MRS培养基调至ρΗ3· 5、ρΗ2· 5。将活化好的菌液以L 0%的接种 量分别接种于MRS液体培养基中，37°C恒温培养4. Oh后，重新接入新鲜培养基中（接种量 1. 〇%)，每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。绘制菌株的生长曲线，检测菌株对酸的 耐受性，实验重复3次，取其平均值。
[0025] 4、菌株抗胆盐测定 在MRS培养基中分别加入牛胆酸钠，使胆盐浓度分别为0. 3%和0. 4%。将活化好的菌以 1. 〇%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。 绘制菌株的生长曲线，比较菌株生长与胆盐含量的关系，实验重复3次，取其平均值。
[0026] 5、胆固醇测定方法的建立 将活化好的菌液以1. 〇%的接种量分别接种于胆固醇培养基中，37°c恒温培养72h，以 未接菌的培养基为空白对照。胆固醇含量的测定参照GB/T15206-1994食品中胆固醇的测 定方法：直接离心铁矾比色法。用可见分光光度计在波长560nm处测定其光密度。胆固醇 清除率按下式计算：