治疗血小板减少症的药物及其在治疗辐射病中的应用制作方法

徐平声, 谭桂山, 唐果成, 李新中

2002年1月16日

2000年7月3日

2000年7月3日

湖南医科大学附属湘雅医院

A61P43/00GK1330938SQ0011352

治疗 血小板 药物 减少

1.治疗血小板减少症的药物，它是由西蒙，经乙醇提取，并浓缩、干燥后得到的2.根据权利要求1所述的治疗血小板减少症的药物，其特征在于所使用乙醇浓度为50--95％，用量为原料药的5--15倍，回流提取时间为1--4小时，提取温度为25--75℃3.根据权利要求2所述的治疗血小板减少症的药物，其特征在于所使用乙醇浓度为70％，用量为原料药的8倍，回流提取时间为2小时4.根据权利要求2所述的治疗血小板减少症的药物，其特征在于浓缩过程在减压、温度为50--80℃条件下进行5.根据权利要求4所述的治疗血小板减少症的药物，其特征在于干燥过程采用喷雾干燥方法，其中进口温度200-260℃，出口温度100--160℃6.权利要求1、2、3、4或5所述治疗血小板减少症的药物在治疗辐射病中的应用

本发明涉及治疗血小板减少症的药物，以及治疗辐射病的药物血小板减少是血液病临床中常见的症状现有的治疗血小板减少症的药物主要是糖皮质激素，如强的松，效果较好口服大剂量此类药物可使血小板增多，并提高纤维蛋白原浓度，缩短凝血时间但是，大剂量或长期应用本类药物，可引起肥胖、多毛、痤疮、血糖升高、高血压等副作用，并且由于本类药物对病原微生物并无抑制作用，且由于其能抑制炎症反应和免疫反应，降低机体防御功能，反而有可能使潜在的感染病灶活动和扩散在妊娠期间特别是妊娠早期使用可能影响胎儿发育，有的可导致多发性畸形次为长春新碱等免疫抑制剂，但疗效低，且毒副反应很大为克服上述药物的缺陷，本申请人曾提出用从巴西引进的药用白甘薯(Ipomoea batatas(Linn.)Lam.，又名西蒙)叶制备治疗血小板减少症的药物详细见《临床血液学杂志》1992年第5卷第1期第8--10页其制备方法是将白甘薯叶干燥，粉碎成粉状后，压片即得用该白甘薯叶片剂治疗血小板减少症，取得了较好的疗效但是，该药物却存在如下缺点1、由于不知道其中的有效部位，未进行提取，因而药物中的有效成分含量低，病人服药量大；2、由于服药量大，而且药物中纤维含量高，往往造成病人肠胃不适除上述现有技术外，中国专利ZL92103783.X公开了一种从甘薯叶提取有效成分的方法其具体做法是以京薯2号的干叶或鲜块为原料，以水为提取剂，在75--85下煎煮，真空浓缩，高压灭菌制成营养液在该文献中还指出对京薯2号的干薯叶分析发现硒含量为0.163ppm，高于西蒙1号的甘薯干叶(0.102ppm)，已知硒有抑制肿瘤和抗衰老作用因此该现有技术是以硒为有效成分进行提取另一方面，目前临床上治疗辐射病的药物主要为氨磷汀，可选择的药物很少辐射病的临床症状不仅表现在血小板的减少，而且可能造成全血细胞减少，如白细胞的减少本发明的目的是在现有技术的基础上，提取原药中的有效部位，制备治疗血小板减少症的药物，在不降低疗效的前提下，减少病人的服药量本发明的另一目的是提出上述发明目的中所述的药物的第二药物用途本发明提供的药物是由西蒙，经乙醇提取，并浓缩、干燥后得到的进一步的优化是所使用的乙醇浓度为50--95％，用量为原料药的5--15倍，回流提取时间为1--4小时，提取温度为25--75℃最优条件是乙醇浓度为70％，用量为原料药的8倍，回流提取时间为2小时浓缩过程可在减压、温度为50--80℃条件下进行干燥过程采用喷雾干燥方法，其中进口温度200-260℃，出口温度100--160℃本申请人经研究表明上述药物还可以作为治疗辐射病的药物本发明中所用的西蒙味甘，性寒(凉)味甘属阳，性寒凉属阴，既有补益脏俯气血之功，又有清热凉血止血之效故该药在性能上阴阳并存，治疗上标本兼顾西蒙甘寒，力专清热泻火、凉血消瘀，故凡吐血、咯血、衄血、畜血、溺血、崩中带下，审其证因于热成者无不宜此调治西蒙滋肝肾，补脾气，又内专凉血滋阴，病人虚而有热者，或肝、肾阴虚，或脾失统血，宜加用之本申请人将西蒙提取物按极性大小分成不同的部位，并用生物导向实验研究表明经醇提制的部位主含咖啡酸类及黄酮类本申请人经主药效学试验证明西蒙中的有效成份为咖啡酸类和黄酮类物质，它们为醇溶性物质其中咖啡酸可以咖啡酸酰化物的形式存在，在水中即水解为咖啡酸咖啡酸具有抗菌抗病毒、升高白细胞、止血、抑制鼠脑组织匀浆脂质过氧化物的生成，有缩短血凝及出血时间的作用，易溶于乙醇另一方面，辐射病主要是由于射线的高能量光子直接或间接作用于患者的组织器官，将机体局部组织中的水分电离分解后产生非常活泼O2·、OH·及H2O2·、HO2·、H·等自由基，继而破坏机体的生物大分子、造血系统、酶及核酸等生命物质而西蒙中含有的黄酮类、咖啡酸类物质均有易于还原的有机基团，在极短时间内可致自由基失活在该药的研究过程中，发现由于叶中含有较多的树胶类物质，经煎煮后，难于过滤，且水煎液的临床效果不理想其原因在于，水提取液要浓缩时需将温度控制在50--80℃，在工业生产中很难达到它要求设备密封性能相当好，从而达到减压浓缩的真空度另一方面，咖啡酸在水中的溶解度随温度变化，在冷水中溶解度很小本申请人提出用醇回流提取，则易于过滤，便于制剂回收醇时，即达到浓缩的目的由于西蒙干叶中所含成分较多，常法难于干燥，故采用喷雾干燥，在瞬间达到蒸发、干燥的效果，将有效成份的损失降低到最低限度原药经提取浓缩、干燥后，可制成胶囊，有利于避免药物吸潮I期临床试验结果表明从1999年4月至2000年2月，在临床资料完整的23例ITP、STP病人中，有9例(39.1％)是经强的松、氨肽素、肌苷、利血生、血康等治疗无效的情况下该用本发明药物，其结果有效率为100％，其中治愈7例(77.8％)，显效1例(11.1％)，进步1例(11.1％)治疗期间无任何毒副反应，使用安全，疗效确切临床给药量为1--2粒/次，每天3--4次，每粒药中含提取药粉0.35g本发明提供的治疗血小板减少症的药物，不但能治疗血小板减少，而且对辐射病也有显著的疗效临床给药量为2--3粒/次，每天4次，每粒药中含提取药粉0.35g表1、提取工艺因素水平表因素 ABC水平 溶媒量乙醇浓度(％) 回流时间1 4 8542 6 7023 8 501实验方法与结果称取50g西蒙叶片，该西蒙叶为湖南省农科院作物研究所提供(下同)按正交表加入乙醇，回流，测定干浸膏量和咖啡酸含量干浸膏量测定方法精密吸取回流后滤液20ml，按药典方法测定，并计算出干浸膏提取量咖啡酸含量采用标准曲线法，按分光光度法(中国药典1990版一部附录51页)于325nm处测定供试品溶液的制备取本品，研成细粉，取约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加70％乙醇50ml，称定重量，水浴加热回流1小时，放冷，称定重量，加70％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液10ml，蒸至近干，残渣加蒸馏水适量，使之溶解，放冷，小心转移至制备好的聚胺柱(Φ1.5×30cm，聚酰胺柱约10cm高)，蒸馏水洗涤蒸发皿三次，洗液并入柱上冷蒸馏水反复冲洗柱子(约100ml)，弃去洗液95％乙醇150ml冲洗至流出醇液近无色，减压回收乙醇至干，甲醇定量转移至50ml容量瓶中，摇匀即得供试品溶液测定法按分光光度法(中国药典1990版一部附录51页)在325nm波长处测定吸收度计算供试品溶液中咖啡酸的重量(ug)，即得本品中含咖啡酸(C9H8O4)的百分含量表2、醇提工艺方差分析表结 果ABCD浸膏得率(％) 咖啡酸类含量(mg/g药材)1111111.7 8.342122212.1 8.823133311.8 8.134212313.2 8.645223114.1 9.276231215.2 9.457313212.2 8.708321316.2 10.539332114.8 9.12注D为空白值以咖啡酸类含量和浸膏得率为指标考察正交试验的直观分析及统计学方差分析结果(见表2)表明对咖啡酸类含量的影响A、B两个因素均有显著性意义；对浸膏得率A因素具有显著性意义程度依次为A＞B＞C综合分析，各因素的最佳水平为A3B2C1由于提取时间因素影响小，从节约的角度出发先C2较好，即A3B2C2结论西蒙胶囊药粉原料制备工艺最佳条件是药材加8倍量70％乙醇，回流2小时无论是对咖啡酸还是浸膏的提取，均为最佳工艺条件所得药粉中，经测定每1克药粉中含咖啡酸75mg，总黄酮25mg咖啡酸的测定方法同实施例1--9中总黄酮的含量以槲皮素计，用标准曲线法测定样品制备如下精密称取上述本发明提供的药粉约1克，置于200ml圆底烧瓶中，精密加入50％甲醇溶液100ml，称重，回流1小时，冷却，称重，补足减失重量精密吸取样品溶液100μl，加水约3ml，加醋酸-醋酸钠缓冲溶液1ml，加0.1M三氯化铝溶液1ml，加水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，于420nm处测定，通过标准曲线计算得总黄酮的含量毒理学研究本研究急性毒性试验、亚急性毒性试验、长期毒性试验，实验结果如下4.1急性毒性试验昆明种小白鼠32只，每只动物在24小时内灌胃本发明提供的西蒙胶囊颗粒剂0.6ml/20g体重(用量相当于生药43.5g/kg体重)，药物浓度已达最大限度，且7天之内无一死亡动物活动性、毛色及重要内脏器官均正常，求不出灌胃的LD50，剂量已达到临床应用药量的218倍4.2亚急性毒性试验小白鼠24只，随机分成3组，连续灌胃给药30天，每天按0.25ml/10g体重剂量给药一次在第31天称体重断头处死小死，并进行肝功能、血常规等检查，结果表明给药组与对照组小鼠的红细胞、血红蛋白、血小板、白细胞及肝功能，组间无显著性差异4.3长期毒性试验大白鼠60只，连续灌服西蒙胶囊135天高、低两个剂量组(相当于成人日用量的8倍和3倍)，各组血常规、肝、肾、脑功能检测，脑、心、肺、脾、肾、睾丸等病理组织学切片结果，与对照组比较无明显差异以上试验研究表明本发明提供的西蒙胶囊剂安全，毒副作用较小本发明药物主要药效学研究一、试验材料(一)、受试动物小白鼠Balb/c种，体重18-22g，雌雄各半由中国科学院上海实验动物中心提供，为清洁实验动物，随机分为五组，每组24只(二)、受试药物(含剂量与给药途径)本发明提供的西蒙胶囊每粒含提取药粉0.35g，相当于西蒙原药2.5g将药粉加适量蒸馏水呈混悬液对动物灌胃给药，每日二次，分高低两个剂量组阳性对照药物强的松片，为目前治疗血小板减少性紫癜疗效确切的药物试验时将药片粉碎成细末，加适量蒸馏水制成一定浓度的混悬液对动物灌胃给药，每日两次空白对照用同等容量蒸馏水灌胃，每日两次药物剂量西蒙低剂量组2.5g/kg(人0.035g提取药粉/kg体重)高剂量组7.5g/kg强的松对照组0.01g/kg(人1mg/kg)二、试验方法与结果(一)、试验方法1.动物分组将Balb/c鼠随机分成五组，每组24只，雌雄各半一组西蒙低剂量组；二组西蒙高剂量组；三组阳性药物强的松对照组；四组空白对照模型动物组；五组空白对照正常动物组2.复制血小板减少症动物模型将前四组动物，用Co60一次性照射，剂量650rad，产生继发性血小板减少症模型因为特发性血小板减少性紫癜(ITP)目前尚无制造方法3.观察指标Hb、WBC、Pt计数及动物活动状况试验前观察2次(取平均值)，开始试验后，每周观察血象1次，至实验组血象恢复正常为止(二)、实验结果见表3三、讨论与小结(一)、讨论西蒙胶囊治疗前模型各组(一至四组)血红蛋白值与正常组无差异(P＞0.05)白细胞与血小板计数经Co60照射后，明显下降，仅为正常组值的四分之一，前4组与第五组(正常组)统计学处理差异显著(p＜0.001)西蒙胶囊药效学总结表3单位x109/L 经用西蒙胶囊与强的松分别治疗后，第一周、第二周复查两次，西蒙高、低剂量两组、强的松对照组，白细胞数与血小板数明显上升，与空白模型对照组(第四组)相比，血小板上升值有显著差异(P＜0.001)西蒙胶囊组与正常组血小板值无明显差异(P＞0.05)，说明西蒙胶囊组通过西蒙胶囊治疗血小板计数近于恢复正常第三周后复查，血小板计数治疗组完全恢复正常，但空白模型对照组(第四组)仍比治疗组(一、二、三组即西蒙高、低剂量组与强的松对照组)和正常组(第五组)的血小板计数低很多，统计学处理，第一、二、三组的血小板数与第四组差异显著(P＜0.01)，而一、二、三组血小板数比正常组还略高，但与正常组无统计学差异(P＞0.05)，而第四组与第五组血小板数差异显著(P＜0.01)，说明未经治疗的模型组恢复缓慢(二)、小结从上看出，西蒙胶囊治疗血小板减少性紫癜疗效显著，结果与阳性药强的松相当，说明其对血小板减少性紫癜有确实的提升血小板的作用同时，由于血小板减少症动物模型是将动物用Co60一次性照射，剂量650rad，产生的继发性血小板减少症模型因此，该模型同样构成辐射病的模型从表3中的数据可以看出，动物的白细胞减少，经给药后，白细胞恢复正常说明本发明提供的药物不但能升血小板，对辐射病亦具有显著的疗效典型病例1、刘某某女28岁，临床症状皮肤紫癜，月经量多，诊断为原发性血小板减少性紫癜(ITP)，曾用强的松、氨肽素等治疗无效服用本发明提供的药物三个月后，血小板从25*109/L，升至58*109/L，皮肤紫癜消失，月经量正常2、杨某某女60岁，临床症状皮肤紫癜瘀斑17年，诊断为ITP，经强的松多次治疗，效果不满意服用本发明提供的药物两个月余，皮肤紫癜瘀斑消失，血小板从54*109/L上升至112*109/L，血小板正常3、朱某某，男71岁，反复皮肤紫癜瘀斑，结膜出血，诊断为继发性血小板减少性紫癜(STP)，经氨肽素，肌苷、血康及中药治疗无效服用本发明提供的药物两个月余，血小板从59*109/L上升至136*109/L