专利名称：含有卡拉胶的水性抗菌组合物的制作方法含有卡拉胶的水性抗菌组合物相关申请的交叉引用 本申请要求申请序列号为12/587，405、申请日为2009年10月6日、名称为抗菌组合物的独特组合的利益；申请序列号为12/587,405的申请是申请号为10/977，001、申请日为2004年10月29日的美国专利申请的部分继续申请；申请号为10/977,001的申请是国际申请号为PCT/US03/13456、申请日为2003年4月30日的国际申请的继续申请；国际申请号为PCT/US03/13456的国际申请要求美国临时专利申请号为No. 60/376，400、申请日为2002年4月30日的申请与美国临时专利申请号为No. 60/377，050、申请日为2002年5月I日的申请的申请日之利益，以上申请所公开的内容通过参考而纳入本文。卡拉胶群组为从俗称海藻的红藻中提取的多聚糖。它们是海藻的结构组成部分， 可被提取为三种主要类型的卡拉胶，分别为I型、K型、λ型，此外还有其他的类型如K-II型、M型、N型。卡拉胶群组作为增稠剂、胶凝剂及稳定与分散剂在食品、制药及化妆品工业中具有广泛地应用。大量的药理学和毒理学的研究已进行。卡拉胶被发现通过口腔、皮肤及系统给药吸入途径获取即使非常高的剂量也没有毒性。因此FDA (食品及药物管理局)在1972年把卡拉胶群组分在“一般安全”(GRAS)类别内2。进一步地，大量的在猪、小鼠、沙鼠、豚鼠、雪貂、仓鼠、狗及猴上进行的口服药物动力学研究3_η显示，卡拉胶群组在胃肠道中的分解充其量是极小的且几乎完全不被吸收。国际专利申请WO 94/15624指出了应用硫酸多糖(sulfated polysaccarides)如 I 型卡拉胶(iota carrageenan)、硫酸葡聚糖(dextran sulfate)、K 型卡拉胶(kappacarrageenan)、λ 型卡拉胶(lambda carrageenan)、模拟月干素(heparin mimetics)、硫酸肝素(heparin sulfate)、戍聚糖多硫酸酯(pentosan polysulfate)、硫酸软骨素(chondrotin sulfate)、硫酸香燕多糖(lentinan sulfate)、硫酸凝胶多糖(curdlansulfate)、去氮硫酸肝素(de-N-sulfated heparin)和褐藻糖胶(fucoidan)等，以抑制HIV的细胞间传递,进而抑制获得性免疫缺损综合症(Acquired Immune DeficiencySyndrome) (AIDS)以及衣原体生物疾病的性接触传染。该申请指出在活体内及活体外防止HIV感染和阻止衣原体感染方面，I型卡拉胶(iota carrageenan)在市售的硫酸卡拉胶群组(sulfated carrageenans)中是最有效的。发明概要申请人:发现特定的卡拉胶或各种卡拉胶的混合物或结合物具有特定的物理和化学性质，当它们配制为用于阴道给药时，它们能提供长期的抗菌作用并抑制或降低性传播感染(STI)的传染可能性。因此，本发明的第一方面针对一种水性抗菌组合物，该组合物包括有效量的含有卡拉胶群组(本文指的是“卡拉胶群组”或一种“卡拉胶混合物”)的抗菌剂和生理上可接受的PH值控制剂，其中λ型卡拉胶(lambda carrageenan)至少为所述卡拉胶群组干重的约50%,所述卡拉胶群组的其余成分为至少一种的非λ型卡拉胶(non-lambdacarrageenan)0为了本发明的目的，术语“抗菌”指的是包含抗菌和/或抗病毒的活性。本发明的一个相关方面针对一种抑制性传播感染(STI)的组合物，该组合物包括有效量的含有卡拉胶群组的抗菌剂和生理上可接受的PH值控制剂，其中λ型卡拉胶至少占所述卡拉胶群组干重的约50%，所述卡拉胶群组的其余成分为至少一种的非λ型卡拉胶。该组合物可进一步包括另一种抗菌剂和/或一种阴道给药的药物，在这种情况下卡拉胶的成分可为只有λ型卡拉胶，而没有任何非λ型卡拉胶。附加剂可与卡拉胶群组混合和/或以一种复合物的方式与卡拉胶群组结合。相对应地，本发明的进一步的方面针对水性抗菌组合物，包括(a)生理上可接受的PH值控制剂；(b)有效量的抗菌剂，该抗菌剂包括一种含有λ型卡拉胶或卡拉胶群组和一种抗菌的生理上可接受的水溶性阳离子金属盐的复合物，其中该卡拉胶群组中λ型卡拉胶至少为所述卡拉胶群组干重的约50%，其余成分为至少的一种非λ型卡拉胶。 本发明进一步的方面针对一种水性抗菌组合物，包括Ca)生理上可接受的PH值控制剂；(b)有效量的抗菌剂，该抗菌剂包括一种含有λ型卡拉胶或卡拉胶群组的复合物，其中该卡拉胶群组中λ型卡拉胶至少为所述卡拉胶群组干重的约50%，其余成分为至少的一种非λ型卡拉胶；以及(c)木质素磺酸(lignosulfonic acid)。本发明进一步的方面针对一种水性抗菌组合物，包括Ca)生理上可接受的PH值控制剂；(b)有效量的抗菌剂，该抗菌剂包括一种含有λ型卡拉胶或卡拉胶群组的复合物，其中该卡拉胶群组中λ型卡拉胶至少为所述卡拉胶群组干重的约50%，其余成分为至少的一种非λ型卡拉胶；以及(c) 一种阴道给药药物，如避孕药或用于激素替代疗法(hormonereplacement therapy)的药物。本发明进一步的方面针对一种水性抗菌组合物，包括有效剂量的抗菌剂、一种生理可接受的水溶性阳离子金属盐和包含一种非核苷逆转录酶抑制剂或核苷逆转录酶抑制齐U，其中该抗菌剂包括多阴离子杀菌剂，如卡拉胶群组，在该卡拉胶群组中λ型卡拉胶占卡拉胶群组干重的至少约50%，其余成分为至少一种的非λ型卡拉胶。本发明进一步的方面针对一种生产、提纯或稳定化本发明卡拉胶群组的方法。该方法需要使λ型卡拉胶或卡拉胶群组以无水或粉末形式与干态的PH值控制剂混合，然后以例如通过添加水或另外的水溶液的方式水和卡拉胶。该方法克服了现有技术中把高浓度卡拉胶制造为同类水溶液相关的几个缺点，并方便进一步加工为药物制剂，如上述的组合物和复合物。图I为示出本发明包含卡拉胶群组的组合物长期活性的图表。在应用该组合物后不同时间间隔时用95-100% HSV-2感染剂量挑战小鼠。甚至在24小时过后组合物仍保持一些水平的对抗HSV-2的活性。这表明即使在使用组合物和性交之间相当多的时间已过去妇女仍可被保护。图2为从脾脏提取的核糖核酸(RNA)中的逆转录(RT PCR)制品的Southern印迹杂交图表。路线2和3是阳性控制，路线4至8来自在病毒挑战前5分钟用本发明包含卡拉胶群组的组合物预处理的小鼠。路线9至14来自阴道接种HIV的小鼠。图3为示出p24 (HIV)浓度与本发明包含卡拉胶群组的组合物浓度、本发明另一种包含卡拉胶群组和水溶性锌盐的复合物(“锌-卡拉胶”)的组合物浓度以及包含卡拉胶群组和木质素磺酸(LSA)的复合物的组合物浓度相对照的条形图。图4为示出在HSV-2小鼠系统中本发明包含卡拉胶群组和LSA的组合物，与本发明包括卡拉胶群组的组合物之间的对照图。结果显示包含LSA和卡拉胶群组的组合物比只含有卡拉胶群组的组合物更有效。图5是在通过p24酶联免疫吸附测定(ELISA)，测定LSA抑制病毒复制百分比的图例。图6为本发明包含卡拉胶群组的组合物和本发明包含锌-卡拉胶的另一种组合物在防止HSV-2在维洛(Vero)细胞内形成蚀斑方面起作用剂量的有效性图表。 图7是示出本发明包含卡拉胶群组的组合物和本发明另一种包括锌-卡拉胶的组合物在保护阴道挑战的小鼠不受HSV-2感染的有效性图表。图8为示出HSV-2病毒挑战剂量为IO4或100%感染剂量时，本发明包含锌_卡拉胶的组合物与两种已知产品Conceptrol及Advantage S相比较的长期活性对照图表。图9为示出本发明包含卡拉胶群组的组合物和本发明另一种包含锌-卡拉胶的组合物对抗病毒挑战的保护的图表。图10是本发明包含卡拉胶群组的组合物中释放Nestorone量的图表。图11是在保护小鼠不被HSV-2感染方面，本发明的卡拉胶组合物各种稀释情况下的有效性对照的条形图。结果显示即使在卡拉胶群组被稀释至I :200时，它们仍能对感染提供40%的保护。发明详述 本发明组合物中应用的阴离子杀菌剂为干扰病毒附着以减少HIV通过粘膜表面传染的杀菌剂。这些阴离子杀菌剂包括如PRO 2000、Buffergel、硫酸糊精(dextrin sulfate)、硫酸纤维素(cellulose sulfate)等化合物,最优选地为卡拉胶群组。本发明组合物中的卡拉胶群组包括λ型卡拉胶。在一定程度上非λ型卡拉胶是存在的(在这种情况下组合物的卡拉胶成分可指的是“卡拉胶群组”或“卡拉胶混合物”)，在组合物中卡拉胶总干重的基础上，卡拉胶混合物中包含至少约50% (优选为至少50%)的λ型卡拉胶。在更优选的实施例中，λ型卡拉胶的量至少约为卡拉胶总干重(S卩λ型卡拉胶和非 λ 型卡拉胶)的 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99 %。其他优选的量为至少 75%、至少约85%、至少约95%、约85%至约99%、及从约94%至约97%的λ型卡拉胶。λ型卡拉胶在市面上有售(费城的FMC公司)。可替代地，λ型卡拉胶可从二倍体白勺海藻如radula^Gigartina skottsbergii、Gigartina chamissoi^Gigartinastellata、Iridaea cor da ta > Chondrus chrispus 及 Sarcothalia crispata.中制取。卡拉胶从海藻中的分离根据标准技术进行。例如，对海藻进行分离、清洗然后干燥。λ型卡拉胶在热的稀释氢氧化纳溶液中提取，生产出包含浓度高达4%的λ型卡拉胶的糊状物。生产出的糊状物通过离心及过滤以生产出澄清的λ型卡拉胶溶液。通过蒸发、酒精沉淀或清洗、及干燥等方法中的任意组合以去除水分。
本发明组合物的卡拉胶群组中的其余成分可包括至少一种非λ型卡拉胶。“非λ型卡拉胶”指代不是λ型卡拉胶的任意类型的卡拉胶，如K型卡拉胶(^a/7/ a-carrageenan)、I 型卡拉 {iota carrageenan)、K-II 型卡拉 {kappa~IIcarrageenan)(其包括K型和I型卡拉胶)、M型卡拉胶(■/ carrageenan)及N型卡拉胶(/ carrageenan)ο非λ型卡拉胶也在市面上有售(如FMC公司)或可根据标准技术从海藻中提取。例如K-II型卡拉胶也在上文所述的海藻品种中自然存在。在优选的实施例中，非λ型卡拉胶包括K型卡拉胶、I型卡拉胶、K-II型卡拉胶、及任意两种或更多种卡拉胶的混合物。在更优选的实施例中，非λ型卡拉胶包括K-II型卡拉胶。在优选的实施例中，卡拉胶群组中的非λ型卡拉胶成分低于约1%、2%、3%、4% 、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24% 或约 25% 的卡拉胶群组的总干重。在更优选的实施例中，非λ型卡拉胶成分为低于约25%、低于约15%、低于约5%、约1%至约15%、或约3%至约6%的卡拉胶群组的总干重。在其他优选实施例中，卡拉胶混合物中基本或完全没有葡萄糖，葡萄糖是食品工业中应用的卡拉胶中的一种常见成分。为提供抗菌作用，λ型卡拉胶或卡拉胶群组的量通常为组合物总重的约1%至约5%。在优选实施例中，卡拉胶群组占组合物总重的约3%。“抗菌”或“抗菌作用”指的是组合物抑制或降低由细菌、其他微生物或病毒导致的性传播感染的传染可能性。本发明组合物在对抗性传播感染的保护是有效的，例如通过抑制HIV、HPV、HSV-2及淋病奈瑟氏菌(.Neisseria)感染。在另一方面,术语“抗菌”或“抗菌作用”并不传达、暗示或限制于任意通过其可实现限制感染传染的特定方式。并不意图受任意特定的操作理论约束，据认为卡拉胶群组非特定地与性传播疾病(STIs)病原的病毒、细菌或其他微生物结合，从而阻断受体部位。包含λ型卡拉胶或卡拉胶群组的组合物可能会应用低于1%或高于5%的量，只要它们可提供抗菌作用且保持阴道内可接受性即可。“阴道可接受性”指的是允许其被用于其预期目的的流变性能，如组合物的粘度(如，组合物保持一定粘度使能它能被使用者应用并在阴道空腔内保持，同时具有美学性能如基本无臭、平滑、清澈、无色及无味)。选择的粘度为能使组合物均匀地涂布阴道空腔的上皮层。通常，组合物的粘度为约10，000 CP至约50，OOOcP,优选为约20，000 cP至约50，OOOcP,更优选为约30，000 cP至约50，OOOcP。卡拉胶具有连续的分子量。通常，本发明卡拉胶混合物可具有高达约2 X IO6道尔顿的分子量，其中具有的平均分子量为I X IO5道尔顿的卡拉胶分子小于约1% (当用气体渗透光谱和光散射确定时)。更特别地，本发明的λ型卡拉胶具有的平均分子量为约600，000至约1，200, 000道尔顿。这种物理性能使最终制剂具有非吸收性，其反过来可提供长时间的抗菌活性。在非卡拉胶的其他阴离子杀菌剂中，也可应用于本发明组合物中的阴离子杀菌剂为PR02000。这种杀菌剂是防止HIV的阴道杀菌剂。另外，其他的这类阴离子杀菌剂包括Buffergel,Buffergel为一种杀菌的杀精子剂其提供缓冲的活性以在精子存在时保持阴道为温合的、保护性的酸性。另外，硫酸糊精一种可阻止HIV进入细胞表面的聚阴离子，及硫酸纤维素也可为此而使用。该组合物进一步包含生理上可接受的PH值控制剂，如磷酸盐缓冲液(PBS)。除了稳定组合物PH值(如在约3. 5至约8. 5的等级，优选地为约5. 8至约7. 2，例如从约6. 8至7. 2)以外，pH值控制剂还防止或降低组合物的任何变化，这种变化为一旦引入PH值会显著变化的体内后组合物可能产生的变化。阴道的pH值可在3. 5至5. 5之间的范围。因此，pH值控制剂的存在延长了卡拉胶群组的抗菌效果。组合物包括约O. 001%至I. 0%的pH值控制剂。根据拟定的用途(如下文所述)，组合物制剂可进一步包括其他活性剂和/或惰性成分。本发明卡拉胶群组具有另外的几个优点。如暴露在冷冻环境或沸腾温度下它们仍可保持稳定。混合物可适于人类阴道环境。并不意图受任意特定的操作理论约束，据认为卡拉胶群组可适于人类阴道环境，且不充当基质或不会另外导致或刺激阴道自然菌群的成长，它们也没有干扰阴道内的自然植物群平衡的毒性。除了归因于本发明的卡拉胶群组的性能以外，由于它们不被系统吸收或降解为任何可吸收的对人类有害的副产品，因此它们的抗菌活性可延续一段时间。本发明的另一方面针对一种水溶性金属盐与卡拉胶群组间的复合物。在优选实施例中，金属盐为锌盐(抗菌组合物称为“锌卡拉胶”)。锌是性传染病原体如HIV和HSV-2的抑制剂。醋酸锌和硫酸锌已被证明可抑制细胞培养的HIV感染、及可抑制在细胞培养与动物试验的HSV-2感染。锌盐已被证明在阻止活体外HIV39、口蹄疫病毒、人类鼻病毒、A型与B型流感病毒、西门立克森林病毒(semliki forest virus)和辛德毕斯病毒(sindbis virus)感染方面是有效的4°。Haraguchi等人39发现通过p24 ELISA及RT检测时，氯化锌、醋酸镉和氯化汞抑制HIV-I的制造。当存在的浓度高达550 μ g/mL时，氯化锌也没有显示出明显的细胞毒性。本发明中应用的水溶性锌盐不仅包括无机盐还包括有机盐，这些锌盐显现出抗菌性能且在根据本发明进行应用时不会产生无法承受的刺激。优选地水溶性锌盐包括醋酸锌、丙酸锌、丁酸锌、甲酸锌、葡萄糖酸锌、甘油酸锌、乙醇酸锌、乳酸锌、硫酸锌、氯化锌及溴化锌。ZnS04、ZnCl2、ZnBr2、Zn (Ac) 2等。如果相对应的铜和银盐在体内无刺激且不会降解为任何可吸收的对人体有害的副产品，它们也可用于本发明。因此，本发明组合组包括约O. 03%至I. 5%的水溶性金属盐，优选为从约O. 3%至I. 0%。组合物的抗菌活性大于只有卡拉胶群组作为抗菌剂的制剂。在本发明具有特定锌盐的实施例中，抗微生物活性显著增加。并不意图受任意特定的操作理论约束，据认为制剂的抗菌活性是增强的，因为金属盐被身体吸收的速率相对是可控的，且同时金属盐的刺激性是降低的。本发明复合物可应用金属离子取代天然存在于多糖主干上的阳离子的标准工艺来生产。例如，锌卡拉胶(指的是本发明锌离子与卡拉胶群组间的复合物)是一种通过使锌
(II)非共价地附接至卡拉胶群组的硫酸基的工序而合成的复合物。卡拉胶是一种由D-半乳糖单元和3，6-去水D-半乳糖单元以线状方式重复而组成的多糖。聚合体被高度硫化，每个二糖单元都具有3个SO3基。锌与卡拉胶群组的结合通过用锌取代与卡拉胶天然结合的钠的化学过程来实现。在这个过程中应用溶解度高的锌盐(如醋酸锌)的水溶液作为锌离子的来源。卡拉胶群组在醋酸锌的浓缩溶液内通过透析方式使带正电的锌离子扩散并与卡拉胶群组中带负电的硫酸基结合。然后过量的锌通过在水内透析的方法除去。含有本发明锌II金属阳离子与卡拉胶群组的复合物的包含物可通过应用锌II卡 拉胶而得到。锌卡拉胶通过用锌阳离子取代卡拉胶中的天然阳离子(钠、钾、钙)而合成。通常锌卡拉胶通过在醋酸锌II的浓缩溶液中透析卡拉胶溶液而生产。然后在浓缩前，例如在冷冻干燥前，过量的锌离子通过在水内透析而去除。在本发明中应用锌II卡拉胶可避免使用如乳酸根或醋酸根阴离子。
另一工艺需要如下步骤(a)在乳酸锌(或其他可溶性锌盐)为约2. 5%，酒精水为50 50的溶液中浸泡卡拉胶群组两小时，(b)分离，(c)在干燥前用酒精冲洗。步骤(a)至(c)可能需要重复数次以在卡拉胶群组中获得所需的金属含量。为获得超过50%当量的锌卡拉胶通常需要两个循环。上述工艺生成一种复合物，其为水溶性的且具有对抗包膜病毒如HIV及HSV-2的活性。与无机的或简单的有机锌盐不同，锌卡拉胶保持优良的流变性能并具有高的分子量(高达2，000, 000 Da)，使得它可配制在阴道产品内，无刺激性且不被吸收。该组合物指的是一种“复合物”，由于在金属和卡拉胶群组之间分子间相互作用的存在，不利于或阻碍分解出自由的金属阳离子。在物理、化学和/或抗菌性能方面，包括金属盐和带负电的硫酸多糖复合物的本复合物群组与水溶性金属盐和卡拉胶群组的混合物是不同的。根据本发明的另一方面，申请人发现不可溶于水的金属盐和卡拉胶群组之间的复合物与特定的抗逆转录病毒剂一起的组合提供了预想不到的优点及协同性能。最特别地， 这种各成分的特定组合已被发现在抑制性传播感染方面，特别是阻止阴道SHIV-RT感染(猴/人类免疫缺陷性逆转录酶病毒)方面，可提供预想不到的效果。抗逆转录病毒剂为用于治疗逆转录病毒主要是HIV感染的药物。有许多不同类别的抗逆转录病毒药物在HIV生命周期的不同阶段起作用，这些药物包括，例如，非核苷逆转录酶抑制剂类(NNPTI类)、核苷逆转录酶抑制剂类(NRTI类)、整合酶抑制剂类、融合抑制剂类及CCR5拮抗剂类。NNRTI类药物为使它们自身粘附在逆转录酶上，阻止酶将RNA转换为DNA的化合物，从而HIV的遗传物质不能在健康细胞的遗传物质内复制，并可防止细胞产生新的病毒。这类药物包括如奈韦拉平(nevirapine)、地拉夫定(delavirdine)、依法韦仑(efavirenz)、 etravirine> MIV-150、 MIV-160、 MIV-170、 dapivirine (TMC-120)及UC-781等药物。最优选的NNRTI为MIV-150，是由Medivir研发出的作为抗病毒药物治疗而使用的NNRTI。MIV-150是一种与HIV-RT紧密结合的酶抑制剂，其特点为形成迅速而分解速度缓慢，这在浓度非常低时钝化HIV的化学分离是有效的。在本发明的一个优选实施例中，申请人已发现本发明卡拉胶群组与水溶性金属盐，优选如锌盐，以及NNRTI类药物如MIV-150的特定组合在完全阻止阴道SHIV-PT感染上是有效的。进一步的，已发现这种特定组合比单独的卡拉胶群组与水溶性金属盐如锌盐的组合；或卡拉胶群组与NNRTI类药物；或卡拉胶群组自身更有效。在一个优选的实施例中，本发明卡拉胶群组、水溶性金属盐和NNRTI的组合优选地包括上述的卡拉胶群组，该卡拉胶群组包括至少占卡拉胶群组干重50%的λ型卡拉胶,其余的卡拉胶中至少具有一种非λ型卡拉胶,最优选地为95%的λ型卡拉胶和5%的K型卡拉胶的组合。总的组合为凝胶的形式，包括1%至5%的卡拉胶，优选地为3%的卡拉胶；组合物包括的水溶性金属盐优选地包含锌盐，更优选地为醋酸锌或乳酸锌的形式，在总的组合物中包括O. Iwt. % (重量百分比)至1.5 wt. %的金属如锌，优选为约O. 3 wt. % ;且包括的NNRTI类药物优选地为MIV-150，NNRTI如MIV-150的量从5mM至5000mM(或 O. 000185% 至 O. 185%)，优选地在 IOmM 至 250mM 之间(或 O. 00074% 至 O. 00925%)，最优选地为约 50 mM (或 0.00185 %)的 MIV-150。NRTI类药物为合并入病毒的DNA内以停止其制造过程的化合物。因而它们导致DNA不完全从而不能制造新的病毒。这类药物包括如阿巴卡韦(abacavir)、替诺福韦(tenofovir)及叠氮胸腺(zidovudine)等药物。申请人:已发现NNRTI类药物和NRTI类药物在本发明组合中应用时表现出特别意想不到的性能。根据本发明的另一个方面，木质素磺酸(“LSA”)与λ型卡拉胶或卡拉胶群组组合(本文称为LSA-卡拉胶)，以达到更好的抗菌效果。在商业上LSA作为工业稳定剂、分散剂和强化剂而应用。它还在饲养牛时作为大量纤维素的来源，在生产人类消费的特定食品时作为乳化剂和分散剂使用。它存在于高等植物的细胞壁内。细胞壁纤维通常由地球上最丰富的多糖，纤维素组成。除了纤维素以外，次生细胞壁包括的另一种非常丰富的材料叫做木质素，其为使植物挺直的多糖。在 加热加压情况下，在硫酸氢钙溶液中蒸煮木屑，木质素转变为水溶性的木质素磺酸(LSA)溶液，被称为失效的亚硫酸盐废液31，32。它是一种低摩尔质量的化合物，具有的平均分子量为约5000道尔顿。因为木质素是非常复杂的自然聚合体，具有很多随机键合，其确切的化学结构是未知的，但它被认为是磺化聚合物，其基本单元是与松柏醇中基本单元类似的丙基苯结构31。商业中，木质素磺化盐因其分散、结合、配位及乳化性能而应用。木质素磺酸的芳香环结构赋予植物抵制病菌攻击的能力。在活体外LSA已显示出抗HIV的活性。包含卡拉胶群组和LSA的制剂可通过在卡拉胶群组内加入LSA而生产，通常LSA与卡拉胶总重的重量比例为从约20 1至约I :20。在组合物包含金属盐的情况下，可在卡拉胶群组中混入固体的缓冲盐，通常应用的重量比例为从约I :1至约10 :1。然后由此产生的混合物在水溶液内稳定化。然后卡拉胶-LSA制剂的PH值通过加入酸如HCL或碱如NaOH可调整至约6. O至约8. O。水溶液中的LSA产生出黄褐色至褐色的颜色。其颜色深度与应用浓度的增加成比例。因此，可在组合物中加入增白剂如二氧化钛。通常，增白剂的存在量占组合物总重量的约O. 1%至约3. 0%。增白剂也可有助于抗菌作用。并不意图受任意特定的操作理论约束，据认为除了其自身所有的抗病毒活性以夕卜，LSA还具有卡拉胶群组分散剂的功能，松散并延长卡拉胶群组，因此创造了更大密度的这种材料及更强的抗菌效力。另一方面，卡拉胶群组提供了优选的流变性能，这对阴道(甚至直肠)给药的可接受性和有效性是必需的，这种流变性能不能通过LSA自身获得，因为它在自然界是相当稀薄的。在一些实施例中，组合中的卡拉胶群组与LSA在防止或抑制性传播感染方面是协同工作的。本发明的组合物还可包含在水性制剂中的与PH控制剂和λ型卡拉胶或卡拉胶群组一起的阴道给药药物。优选的药物为避孕药，如类固醇激素，Saleh等的美国专利5972372 (“Saleh”)中已公开，其公开的内容因参考而纳入本文。在本发明中应用的避孕药示例包括孕激素类(progestins)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、雄激素类(androgens)、雌激素类(estrogens)、促性腺激素(gonadotropin)、人体生长激素(human growth hormone)>促生育素(menotropins)、孕酮(progesterone)、孕激素类(progestins)(如左炔诺孕酮(Ievonorgestrel )、块诺酮(norethindrone)、3-酮基去氧孕烯(3-keto_desogestrel)及孕二烯酮(gestodene))、孕激素(progestogen)、尿促卵泡素(urofollitropin)、后叶加压素(vasopressin)、及其组合。优选的药物包括孕激素化合物类(如醋炔诺酮(norethindrone acetate)、NEST0R0NE (“NES”)(即 16-亚甲基-17. α ·-醋酸基-19-去孕烯-3，20- 二酮(16-methylene_17. alpha. -acetoxy-19-norpregnene-3, 20-dione)),及孕激素类(progestins)(如左炔诺孕酮(levonorgestrel ) (LNG))。优选的避孕药为16-亚甲基-17. α .-醋酸基-19-去孕烯-4_ene-3, 20-二酮(16-methylene-17. α . -acetoxy-19-norpregn-4-ene-3, 20-dione)(下文简称 “NES”)其已在文献中被确认为“ST-1435”。在应用经典的生物测定法测量孕效力的比较研究中，NES被发现具有高于孕酮100倍、高于左炔诺酮10倍的孕活性53。因此，只需要少量的NES可达到抑制排卵的效果。这种效力与没有雄激素、雌激素及糖皮质激素等(肝糖原沉积)活性及对脂水分配系数或临床化学参数没有影响相结合，赋予NES在避孕用品中使用的特定优势53_55。然而，已显示出在口服时，NES经历快速的新陈代谢并钝化，使其适于哺乳期妇女通过植入或阴道环给药而使用56’57。当与K型/λ型卡拉胶混合物以凝胶形式组合时，NES优选的递送剂量为每天约75至约100 μ g之间，其将在血浆内达到约200皮摩尔/升(pmol/DNES的水平，并在进行期间获得良好的血液模式。其他优选的阴道给药药物包括用于激素替代疗法的药剂，如雌激素类物质(如乙炔雌二醇)，及其他类固醇化合物。 并不意图受任意特定的操作理论约束，据认为卡拉胶群组拥有双重功能，在给予杀菌性能的同时，提供一种避孕药或用于激素替代疗法的药物的缓释递送系统，因此增强了药物的活性。本文描述的组合物可进一步包含至少一种生理隋性成分，如生理上可接受的防腐剂。防腐剂包括对轻基苯甲酸的烧基酯类(alkyl esters of para-hydroxybenzoicacid),如甲烧基对轻基苯甲酸酯(methyl paraoxybenzoate)与丙基对轻基苯甲酸酯(propyl paraoxybenzoate)、乙内酸服衍生物类(hydantoin derivatives)、对轻基苯甲酸酯类(parabens),如苯甲酸甲脂(methyl paraben)、丙酸盐类(propioniate salts)、三氯生三碳酸替(triclosan tricarbanilide)、茶树油(tea tree oil)、醇类(alcohols)、法呢醇(farnesol )、醋酸法呢醇(farnesol acetate)、六氯酌·(hexachlorophene)及季铵盐类(quaternary ammonium salts),如 benzolconjure、锋和招盐类、苯甲酸钠(sodiumbenzoate)、苯甲醇(benzyl alcohol )、苯扎氯铵(benzalkonium chloride)和氯丁醇(chlorobutanol)。通常,基于组合物总重,防腐剂的含量可达约0. 3%。除了抑制在生产过程中无意中引入的微生物的生长外，防腐剂可防止一旦组合物引入体内，由于正常人体菌群的存在而可能发生在组合物内活性药物上的任何有害影响。这将延长组合物内的活性药物保持活性的时间。在优选的实施例中，本发明的组合物，如包含卡拉胶群组作为唯一的抗菌制剂的、具有或没有阴道给药的药物的、及包含附加的抗菌制剂如阳离子金属盐或LSA的组合物，用于阴道给药。本发明还包括直肠给药。根据制药工业的技术标准，组合物可适用于配制为如凝胶类、乳酯类、泡沫类、膜类及栓剂。凝胶类为优选的。制剂优选地在性活动如性交前给药，通常在活动前约一个小时内。应用于人类的卡拉胶为基础的制剂防止或抑制性传播感染(STI)的传染，如淋球菌、人乳头状瘤病毒、HSV-2及HIV的传染。本发明的另一方面针对一种提纯不可吸收的卡拉胶的方法。制剂典型地从混合固态缓冲盐与λ型卡拉胶或卡拉胶混合物而开始制备，重量比例为从约I :1至约10 :1。然后固态缓冲盐与卡拉胶的混合物溶解于水或水溶液中，以制造制剂。然后制剂的PH值调节为从约6. O至约8. O。典型地可通过加入酸例如HCL或碱例如NaOH而得到。通常，制剂的粘度为从约20000CPS至约100000CPS，优选为从约30000CPS至约35000CPS。至少一种生理上可接受的防腐剂可加入制剂中。这种防腐剂的示例在本文已揭示。在各种药典中已指明防腐剂可存在的比例，特别地与卡拉胶群组的重量比为从约80 1至约10 :1，优选为从40 I至约15 :1。固态缓冲盐包括固态的碱金属醋酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、以及乳酸盐。在为磷酸盐的情况下，固态的碱金属磷酸盐包括三基及二基碱金属磷酸盐的固态混合物，优选地以无水的形式，其中碱金属包括但不限于钾和钠。任何生理上可接受的缓冲剂都可应用。然而，在利用水溶性锌盐的情况下，磷酸盐不是优选的，在这些制剂中，醋酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐是更优选的。在优选的实施例中，这些缓冲剂溶液包含醋酸和醋酸钠；柠檬酸和柠檬酸钠；及乳酸和乳酸钠的混合物。并不意图受任意特定的操作理论约束，据认为卡拉胶群组是干粉末，当暴露在大气中时是非常吸湿的。大气中的水分吸收至干的成分中致使材料结块。当这种材料随后加入水基溶液时问题加剧，使卡拉胶群组完全融入均质的水溶液中是不可获得的。其还被认为通过把卡拉胶群组和至少一种固态缓冲剂盐混合在一起，当暴露在大气中时，固态缓冲剂盐吸收了卡拉胶群组可能吸收的大气中的水分，因此防止或大大减少卡拉胶群组结块。 其进一步被认为该过程有助于增加卡拉胶群组在水中的溶解度，及获得稳定的PH值。下面的示例意图进一步解释本发明特定实施例，但并不意图以任何方式限定本发明。示例1. 500升卡拉胶群组的牛产
在准备λ型卡拉胶或卡拉胶混合物时，(I)制剂中各成分应单独地在清洁、干燥的称重容器内称量；(2)各成分的“实际”重量，而不是约定重量，应记录在制造生产日志内，SP使二者间只有微小的差异；(3)任何用于盛放散装成分的容器内含有人工制品或污染的不可使用，且该容器应封闭、密封、标记上“已污染”并从生产区域内移除；(4)在过程中，生产批次在制造完成且制剂已经历过质量控制检验前不能从一个容器转至另一个容器；(5)在生产过程中产品容器应保持封闭，以防止由于蒸发而使水分丧失，尤其是在需要加热的步骤中。另外，卡拉胶已被证实在固体状态及各种不利条件的，包括冷冻或高压灭菌的生产状态时是稳定的，可保持24个月。下文涉及一种用于制造包括λ型卡拉胶和K-II型卡拉胶的卡拉胶群组(K-II/λ型卡拉胶混合物)的制剂的生产工序。在制备K-II/λ型卡拉胶混合物的过程中，从IOOmL的实验室小批次扩大至15至30升的实验室批次，最后至生产500升的批次，为获得所需制剂的批次与批次的一致性变得更困难。本方法令人意外地克服了这些难点，且生产出的K-11/λ型卡拉胶混合物的制剂具有批次与批次间一致的质量。设备
制造容器-IKA，EMA 9/500AIUTL，一种水套制造容器，其允许在生产过程中对溶液快速加热和冷却。成分
K-II/λ型卡拉胶混合物；
磷酸盐缓冲液(PBS)[包含=NaCl - 120 mmol/L、KCl -2.7 mmol/L、磷酸盐缓冲剂(磷酸二氢钾和憐酸二氢钠)_10mmol/L-(Sigma Aldrich, Saint Louis MO)；p-轻基苯甲酯(轻基苯甲酸甲酯)(p-Hydroxybenzoic methyl ester (Methylparaben))-(尼帕实验室，庞特普里斯，英国)(Nipa Laboratories, Pontypridd, UK)；盐酸(HCL)-默克公司(Merck),达姆施塔特(Darmstadt),德国(Germany)；
纯净水-瑞典AB清洁化工公司(Clean Chemical Sweden AB),博伦厄(Borlange),瑞典(Sweden)。生产工序
(1)按下述数量称重成分


本发明揭示了用于抑制性传播感染传染的组合物，该组合物包含一种或更多种阴离子杀菌剂、水溶性金属盐和特定的包括NNRTI类和NRTI类的抗逆转录病毒剂，阴离子杀菌剂如包括λ型卡拉胶的卡拉胶组。本发明还揭示了制造和利用该组合物的方法。