专利名称：将至少一种用于治疗和/或诊断用途的化合物包封在红细胞内的设备及试剂盒的制作方法近来,许多尝试集中在开发在患者体内特定位点处药剂祀向释放或取得在患者体内的药物缓释的程序。已知，在药物有效到达适当的靶位时或当药物优选在待治疗的器官或在待治疗的细胞内释放时，可以增加药物的有效性。此外，当给药药物总量最小化，但由于药物缓慢释放而保持其治疗作用时，药物的毒性可以降低。对于给药系统的关注既涉及大部分为相对简单的有机分子的常规制剂，也涉及更复杂的药学活性剂，如肽、蛋白质、酶、抗体、反义寡核苷酸、诱饵寡核苷酸、细胞因子、核酸和它们的组合等。最近的关注领域涉及红血球(下文中称为“红细胞”或“RBC”)作为载体用以在患者体内的期望位点或在血液循环中低剂量释放治疗剂量的药物的用途。可利用特定方法使红细胞“加载”生物活性剂，在该方法中使得红细胞的细胞膜具有渗透性，将一种或更多种制剂加入红细胞中，然后再密封该细胞膜。这些“加载的”或“经处理的”红细胞作为药物释放系统和靶向系统提供有几个优点，即它们是生物可降解的，可在循环中保持很长一段时间，并且可以靶向细胞例如巨噬细胞。制备负载在生理溶液中的细胞悬浮液的方法公开在德国专利号2326244和德国专利申请公开号(OS) 2326161和2495119，其中红细胞的细胞膜分别通过渗透压和电场被溶解。i仑 JC ^Erythrocytes as carriers of primaquine-preparation characterization and evolution " (Naresh Talwar et al. ；Journal ofControlledRealease, 20 (1992) 133-142)公开了在红细胞内包封磷酸盐。指出所建议的方法涉及红细胞的溶解以及洗涤经处理的红细胞。然而，其中没有提到或建议经处理的红细胞的浓度必须和/或能够增加。美国专利4，224, 313 (Zimmermann等人)公开了一种通过外部诱导的渗透压或电场或两者来制备细胞膜渗透性增加的悬浮在溶液中的大量加载细胞的方法。待加载的材料包括具有在被引入细胞内时提前破坏细胞膜的能力的药剂和能够抑制药剂与细胞膜的反应的稳定剂。美国专利4，. 478，824 (Franco等人)公开了一种将物质引入红细胞内方法，利用能够穿过细胞膜并通过扩散进入细胞内的化学剂例如DMSO和甘油来改变红细胞的内部渗透压。美国专利4，652，449 (Ropars等人)公开了一种利用渗透压将物质引入红细胞内的方法和设备。该方法和设备已被采用并且仅用于测试大量血液。这使得许多应用被限制为采用自体血，即血来自随后接受加载有药物的血液的同一患者。美国专利N. 4，931，276 (Franco等人)公开了一种用于在红细胞中包封非离子制剂方法。在期望待引入的制剂不是阴离子的，或者是阴离子或多阴离子的但不是在几乎等渗的水剂中以足以使得细胞渗透性产生所需的增加而不破坏细胞的浓度存在时，该方法具有有限的有效性。Heubsch 等人，J. Cell. Physiol.，122 :266-272(1985)表明在渗透溶胀的细胞中，形成膜的双脂层与细胞的细胞骨架分离，并且细胞的尺寸显著改变并变为球形。这在正常情况下不会发生。专利申请公开号EP1466968公开了一种用于在红细胞中包封活性物质的方法和机器。对于在细胞中引入物质的方法的综述由Franco等人在Life Science32 2763-2768 (1983)、AM. J. HematoI. 17 :393-400 (1984)、e J. Physiol. 129 :221-229 (1986)中给出。尽管红细胞作为药物释放系统的用途已有许多研究，但是用于实施这些方法学的方法和设备尚未被开发至正常应用于临床实践、诊断和研究的程度。此外，发展到现在的方法和设备的灵活性不足以允许获得在治疗、诊断和研究领域中的任何类型用途中使用的红细胞。特别是，根据现有技术中公开的程序，通常不可能得到能够实际用于诊断(或治疗)领域的产品。用于在红细胞内包封化合物的设备的近期实例还公开在专利US6139836中。虽然该设备相对于现有技术代表了相当大的改进，但是该设备相对复杂、昂贵并且难以使用。在这方面，应该指出的是，专利US6139836的设备的操作需要专门操作人员的存在和持续干预，该操作人员必须以正确的顺序操作设备的不同部件。因此，红细胞的处理(加载)相对耗时并涉及操作人员犯错的风险。 已知的设备不能适当地实施。由于它们不能实施这一事实，所以该程序需要在专用结构中实施并且不可能在更容易影响患者的位点处操作。此外，已知的设备需要专门工作人员的连续干预并且并不总是精确和/或足够有效的。本发明的一个目的是提供一种设备、试剂盒、用途和方法，其允许克服现有技术中的至少部分缺点并且同时实施起来容易且成本有效。
根据本发明，提供根据所附独立权利要求的设备、试剂盒、用途和方法，优选根据直接或间接从属于独立权利要求的任何权利要求。现在将参照附图描述本发明，附图示出本发明的非限制性实施方案，其中图I是根据本发明制成的设备的图；图2是根据本发明制成的设备的第二实施方案的图；图3是根据本发明制成的设备的第三实施方案的图；图4是图I所示设备的可重复使用装置的局部透视图，其中为了清楚起见删除了细节；图5是图I所示设备的示意性顶视图，其中为了清楚起见删除了细节；
图6和7是图5所示设备的侧透视图，其中为了清楚起见删除了细节；图8示意性示出图I所示设备的某些部分；图9示意性示出图I所示设备的一次性装置；图10是利用灌注加载有血细胞比容6. 4%的吲哚青绿的红细胞得到的荧光血管造影图像；和图11是利用灌注加载有血细胞比容54%的吲哚青绿的红细胞得到的荧光血管造影图像。


根据本发明的第一方面，提供一种用于将至少一种化合物引入红细胞内的设备。在图I、图5、图6、图7和图8中，附图标记I整体上表示作为将至少一种化合物引入红细胞内的设备。特别地，设备I适于接收含有红细胞的血液样本；接收样本与生理溶液以将血浆和其他血细胞与红细胞分离；使红细胞溶胀并溶解；将化合物加载至红细胞内；和闭合被加载的红细胞以获得经处理的红细胞。特别地，生理溶液是盐水，例如为0. 9% NaCl重量/体积的水溶液。根据替代实施方案，它是适合用于洗涤血液的另一溶液。更特别地，当洗涤后的样品与第一溶液接触时，红细胞溶胀。溶胀的红细胞然后暴露于第二溶液中，导致其部分或完全溶解。接着，将溶解或部分溶解的红细胞在血液滤过器中浓缩。使溶解或部分溶解的红细胞与至少一种化合物接触。由此，该化合物分布在溶解或部分溶解的红细胞的内部和外部。换言之，一些化合物的分子被引入红细胞内。(在此程序阶段)含有化合物的红细胞然后暴露于密封溶液中。暴露于密封溶液导致细胞膜被密封复原，从而将化合物包封在细胞内。所谓得到的“红细胞载体”或“经处理的红细胞”然后进行洗涤(利用与前述相同的生理溶液)。这样做是为了移除在该程序中未被RBC包封的物质。特别地，使用本发明的方法包封化合物。根据一些实施方案，该化合物选自生物活性剂、药理活性剂、直径至多500nm的纳米粒子、用于诊断的造影剂、利用荧光、光学、磁和/或回声检测器(和/或利用适合检测利用该程序引入红细胞内的造影剂的任何其他方法)使得红细胞可识别的物质。特别地，该化合物是药物、分子探针或前体药物(即生物或药理活性剂的前体)。根据一些实施方案，该化合物选自肽、寡肽、多肽、蛋白质、酶、激素、皮质类固醇、糖皮质激素、非留体抗炎剂、蛋白酶抑制剂、谷胱甘肽、细胞因子、毒素、寡核苷酸和其他核酸以及已知为有用的治疗剂的核苷类似物。这些包括常用作为免疫抑制剂和恶性细胞生长抑制剂的6-巯基嘌呤(6-MP)或硫唑嘌呤和磷酸氟达拉滨以及作为抗病毒剂特别是治疗AIDS有用的磷酸化叠氮胸苷(AZT)、双脱氧胞苷(DDC)和双脱氧肌苷(DDI)。例如，可将地塞米松-21-磷酸盐(d_21P)包封在红细胞载体内，并且当将加载的红细胞引入哺乳动物的循环系统中时，d-21P缓慢地转化为药物地塞米松。由于地塞米松可以穿过载体红细胞的细胞膜(而d-21P不能)，这个过程确保在一定的时间内为该哺乳动物提供恒定水平的生物活性剂(在这种情况下为地塞米松)。根据特定的实施方案，该化合物选自氨基酸、寡肽(2-10个氨基酸)、多肽(10-20个氨基酸)、蛋白质(超过20个氨基酸)、激素、皮质类固醇、糖皮质激素、FANS、谷胱甘肽、细胞因子、毒素、寡核苷酸(至多20个核苷酸)、多核苷酸(超过20个核苷酸)。的寡核苷酸和多核苷酸可以包含一个或多个改性核苷酸或核苷酸类似物。氨基酸、寡肽和多肽可以包含一个或多个改性氨基酸或氨基酸类似物。特别地，该化合物选自氨基酸、寡肽(2-10个氨基酸)、多肽(10-20个氨基酸)、蛋白质(超过20个氨基酸)、激素、皮质类固醇、糖皮质激素、FANS、细胞因子、毒素、寡核苷酸(至多20个核苷酸)、地塞米松磷酸钠和倍他米松磷酸钠、谷胱甘肽、吲哚菁绿(ICG) 。根据一些实施方案，该化合物选自药理活性剂、肽、蛋白质、激素、地塞米松磷酸钠和倍他米松磷酸钠、谷胱甘肽、毒素、单链或双链寡核苷酸(可包括核苷酸类似物)、直径至多500nm的纳米粒子、荧光剂、吲哚菁绿(ICG)、通过光学、回声或磁共振装置可检测到的其他试剂、可被用作任何形式和类型的诊断手段的其他造影剂。设备I包括连接通道系统2 ;将含有红细胞的样品载入设备I中的导入单元3 ;用于分离样品的不同组分(特别是将血浆和其他细胞与红细胞分离)的分离单元4;和合并单元5，它包括容器6 (特别是收集袋)，并且在其中将红细胞和化合物合并在一起以得到经处理的红细胞。应当指出的是，设备I有利地具有低于35公斤的重量。因此，设备I便于携带。设备I还包括进口 7 (特别是容器6的可穿孔隔垫)以取出容器6中的化合物；以及供给单元8，其包括供给第一溶液的通道9和供给第二溶液的通道10。第一溶液适于在与红细胞接触时溶胀红细胞，并且特别是由一种或多种无机盐的水溶液构成，其总渗透压摩尔浓度(osmolality)(即加入的所有溶解盐的浓度)为约100m0sm/Kg-约300m0sm/Kg。更特别地，第一溶液由6体积的生理溶液(浓度为0. 9%重量/体积的NaCl水溶液)和4. 5体积的蒸馏水或去离子水构成。第二溶液适于在与红细胞接触时溶解红细胞，并且特别是由一种或多种无机盐的水溶液构成，其总渗透压摩尔浓度(即加入的所有溶解盐的浓度)为约10m0sm/Kg-约150m0sm/Kg。更特别地，第二溶液由6体积的生理溶液(浓度为0. 9%重量/体积的NaCl水溶液)和8体积的蒸馏水或去离子水构成。应当指出的是，进口 7不仅允许将化合物引入容器6内，而且还允许将密封溶液引入容器6内。密封溶液适于在与红细胞接触时重新密封红细胞，从而至少部分包封化合物。特别是，进口 7包括可穿孔隔垫。根据一些实施方案，密封溶液是磷酸盐_肌苷-葡萄糖-丙酮酸盐-腺嘌呤(PIGPA)溶液。特别地，PIGPA 溶液包含约 33mM NaH2PO4 ;约 I. 606MKC1 ;约 0. 194M NaCl ;约0. IM肌苷；约5mM腺嘌呤；20mM ATP ;约0. IM葡萄糖；约0. IM丙酮酸盐；和约4mM MgCl20根据其它实施方案，密封溶液由一种或多种无机盐的水溶液构成，其具有与血液相同的或更高的渗透压摩尔浓度(即等于或高于280m0sm/Kg)。在一个有利的实施方案中，使用约5ml至7ml的密封溶液来重新密封体积为约50_90ml的溶解红细胞。设备I还包括用以浓缩容器6的内容物的浓缩单元11 ;和收集单元12，它包括容器13 (特别是收集袋)，用以收集经处理的红细胞。通道系统2连接(即允许之间的流体流动)导入单元3、分离单元4、合并单元5、供给单元8、浓缩单元11和收集单元12。
特别地，通道系统2由一个或多个通道构成。更具体地，系统2包括在分离单元4和合并单元5之间的连接通道14。根据有利的实施方案，在本文中，除非另有说明，通道是指由可弹性变形材料制成的导管，并且根据一些实施方案，其至少一些部分是基本透明的。特别地，导管由聚硅氧烷、PVC或其它聚合物制成。此外，它也可以包含织物插入物以改善韧性。设备I包括控制单元15，其适于调节设备I的操作。图1-3示出在控制单元与设备I的不同组件之间通过细线的电连接(或通过电磁波连接)。有利的是，控制单元15包括电子控制单元和操作员接口(HMI)，所述操作员接口例如设置有显示器和/或键盘，操作员可以通过该接口修改和/或显示操作参数和操作规范。 根据一些实施方案，导入单元3包括可穿孔隔垫16 (或在任何情况下为连接)，血液样品可以通过该可穿孔隔垫被注入(或连接)(例如，利用注射器17)到通道系统2的通道18(特别是管道)中。导入单元3还包括调节装置19(特别是阀门)，它们沿着通道18设置并适于调节沿通道18的流量。根据一些实施方案，通道18连接到在分离单元4与合并单元5之间的通道14。特别地，调节装置19适于完全阻塞通道18 (以便基本防止沿通道18的流体通过)，并允许流体自由流过通道18。更特别地，调节装置19包括夹紧元件，其适于使通道18变形以完全阻塞通道18的管腔。调节装置19可通过控制单元15进行操作。根据一些实施方案，分离单元4包括用于将红细胞和/或经处理的红细胞与样品的其它组分分离的离心组件20。容器21 (特别是收集袋)适于收集来自分离单元4 (尤其是离心单元20)的与红细胞分离的物质。容器21通过通道(特别是系统2的通道)22连接到离心单元20。根据一些实施方案，离心单元20包括适于旋转的(大致水平的)板23和安装在板23上的分离碗24。更特别地，离心单元20包括电动机25 (特别是具有用于检测速度、方向和电流的直流电动机)，其适于使得板23绕基本垂直的轴旋转。设备I还包括传感器(或多个传感器)26，用以检测空气、氧分压、二氧化碳、血红蛋白、氰基血红蛋白、血细胞比容、摩尔渗透压浓度(osmolarity)、用于测量吸光率/透射率的光学传感器、测量荧光、磁共振、声波测量(回波描记)和/或相对于导入单元3的分离单元4上游的其它参数。特别地，传感器26沿通道18和离心单元20之间的通道14设置。传感器26连接到控制单元15并适于将沿通道14检测到的信息传递至控制单元15。根据特定的实施方案，传感器26适合于检测相对于导入单元3的分离单元4上游的氧气(和/或空气)。特别地，传感器26是超声传感器(用于检测气泡)。通道14具有(至少在传感器26处)低于70 (尤其是高于50，更具体是高于60)的肖氏A硬度(根据ASTM D2240标准测定)。由此，传感器26可以适当地附着到通道14(因此执行精度更高的检测活动)。传感器26例如是Int.IOtcki卩:AD8/AD9超声检测器。通道14例如由意大利Sorin Group 的pvc xs(至少在传感器26的区域内)制成。传感器26允许限制污染剂在设备I内的存在，以提高在红细胞内引入的效率和精度。此外，传感器26允许在自动化工艺过程中获得空气和液体的明确区分，从而确保执行正确的步骤，并且在应该为液体的地方没有空气，反之亦然。传感器26促进以自动化程度更高的方式正确执行过程。供给单元8包括容器27 (特别是袋)，其通过系统2的通道9连接到系统2。容器27包含上述第一溶液。供给单元包括另一容器28 (特别是袋)，其通过系统2的通道10连接到系统2。容器28包含上述第二溶液。导入单元8包括调节装置29 (特别是阀)，它们被布置沿着通道9，并适于沿着通道9来调节流量。导入单元8包括调节装置30 (特别是阀)，其沿通道10设置并适于沿通道10调节流量。·
特别地，调节装置29和30适于分别完全阻塞通道9和10 (以基本避免分别沿通道9和10的流体通过)，并允许流体分别自由流过通道9和10。更特别地，调节装置29和30包括相应的夹紧元件，其适于分别使得通道9和10变形以完全阻塞管腔。调节装置29和30可通过控制单元15 (彼此独立地)操作。供给单元8还包括泵送装置31，其适于使第一和/或第二溶液向合并单元5 (或分离单元4)移动。特别地，泵送装置31沿(系统2的)通道32设置以使第一和/或第二溶液移动通过通道32。通道32将通道9和10连接到通道14。根据一些实施方案，泵送装置31包括蠕动泵。更特别地，泵送装置31包括在其上安装有一个或多个辊的转子，其沿通道32的区段移动使得通道32反复变形(节流阀)。有利的是，收集单元12包括调节装置33，其可通过控制单元15来操作以调节从系统2向容器13的流量。特别地，调节装置33沿(系统2的)通道34设置，其连接到容器13。调节装置33在结构上与调节装置29和30基本相同，并且对通道86. 36cm的操作方式与调节装置29和30对通道9和10的操作方式基本相同。有利的是，合并单元5包括可通过控制单元15操作的混合装置35，用以移动容器6以便混合其内容物。特别地，合并单元5包括容纳容器6的支持板36 ;和用以移动(摇晃)板36并因此混合容器6的内容物的致动器(为已知类型并且图中未示出)。上述致动器包括步进电动机和4个位置传感器以控制所述板36的水平位置，振荡的角度至多为+/-30°并且保持至多45°的角度(这在容器6排空时采取更加倾斜的位置)。有利的是，合并单元5还包括加热元件(为已知类型并且图中未示出一例如电阻)，其可由控制单元15控制以加热容器6的内容物。加热元件的操作通过已知类型且图中未示出的温度探测器控制，从而通过控制单元15利用反馈来控制其操作。有利的是，合并单元5还包括连续测量重量的元件(为已知类型并且图中未示出一例如加载单元)，其可由控制单元15控制以测定容器6所包含的重量(或体积)。根据一些实施方案，浓缩单元11包括过滤器37 (特别是血液过滤器或透析过滤器)以至少部分分离出经液体(尤其是水溶液，例如第一和第二溶液、密封溶液和/或生理溶液)处理的红细胞。浓缩单元11包括抽吸器38(特别是真空泵，其也可以其他方式作为压缩机来操作特别是本发明的溶液，本文中没有示出)，其由控制单元15控制并且适于抽吸至少部分液体通过过滤器37。抽吸器38由一个或多个已知类型的压力传感器(本文中未示出)控制。根据本发明的一些实施方案，抽吸器38可以将空气引入通道系统2内，以测试其液压密封并确认其相对于调节装置的正确定位，抽吸器38位于调节装置上。浓缩单元11还包括容器39 (特别是袋或刚性容器)以收集流过过滤器37的液体。还提供泵送装置40以使容器6的内容物与过滤器37接触。特别地，系统2包括通道41，在使用时，待过滤的和已经过滤的材料通过通道41从容器6到达过滤器37，反之亦然；并且根据一些实施方案，系统2包括连接过滤器37与容器6的抽吸通道42，并且在抽吸通道42的区域中产生沿通道41移动流体所需的压力。泵送装置40沿通道42设置，并且有利的是包括蠕动泵。更特别地，泵送装置40包括在其上安装有一个或多个辊的转子，其沿通道42的区段移动使得通道42反复变形(节·流)。通道系统2还包括连接过滤器37与容器39的通道43 ；以及连接抽吸器38与容器39的通道44。设备I还包括另一供给单元45，用以供给第三溶液(特别是生理溶液)。特别地，供给单元45包括调节装置46，它可由控制单元15来操作以调节来自供给单元45的流量。根据所示的实施方案，调节装置46沿(系统2的)通道47设置。调节装置46在结构上与调节装置29和30基本相同，并且其对通道119. 38cm的操作方式与调节装置29和30对通道9和10的操作方式大致相同。 有利的是，供给单元45包括容器48 (特别是袋)，其包含生理溶液并且连接到通道系统2，特别是通过通道47连接。设备I还包括泵送装置49，其可由控制单元15来操作并适于至少在导入、分离、合并和收集单元3、4、5和12之间移动流体。有利的是，泵送装置49适于在导入、分离、合并、收集和供给单元3、4、5、12和45之间移动流体。泵送装置49沿通道14设置。根据一些实施方案，泵送装置49包括蠕动泵。更特别地，泵送装置49包括在其上安装有一个或多个辊的转子，其沿通道14的区段移动使得通道14反复变形(节流)。有利的是，导入单元3和收集单元12被连接至在泵送装置49和合并单元5之间的连接通道14。供给单元8 (和可能的供给单元45)也被连接到在泵送装置49和合并单元5之间的连接通道14。根据一些实施方案，该设备还包括调节装置50，其可由控制单元15来操作并且沿所述通道14设置。特别地，调节装置50设置在供给单元8和分离单元4之间。调节装置50在结构上与调节装置29和30基本相同，并且其对通道14的操作方式与调节装置29和30对通道9和10的操作方式基本相同。根据一些实施方案，调节装置50设置在分离单元4和供给单元8之间。根据特定的实施方案，调节装置50设置在一侧上的导入单元3和收集单元12 (和可能的供给单元45)与另一侧上的合并单元5之间。根据所示的实施方案，调节装置50设置在泵送装置49和合并单元5之间。根据未示出的一些实施方案，设备I没有调节装置50。有利的是，设备I还包括适于检测容器27和28的重量的称重装置51。称重装置51也适于检测容器39的重量。有利的是，称重装置51适于检测容器21的重量。根据一些实施方案(未示出)，称重装置51适于检测容器48的重量。根据一些实施方案(未示出)，称重装置51适于检测导入单元3的重量。称重装置51适于将检测数据发送到控制单元15。特别地，控制单元15适于调节泵送装置31和抽吸器38的调节装置29和30的操作，作为称重装置51检测出的容器27、28和39的重量的函数。根据一些实施方案，抽吸器38可以在操作人员引入包含血液的注射器17之前将空气引入通道系统2内，以测试其液压密封并验证其相对于该调节装置(抽吸器38位于其上)的正确定位。下文中公开了设备I的操作的简要描述，从操作人员利用注射器17 (也可以用袋来代替)通过隔垫16引入血液样品时开始。以下说明规定，除非另有明确说明，设备I的不同部件由控制单元15控制。 在样品注射过程中，调节装置50、33和46保持关闭，而调节装置19保持开放并且泵送装置49使样品朝向分离单元4移动。操作电动机25，以使板23 (及分离碗24)旋转。当整个样本进入分离碗24内，传感器26检测到化合物(特别是氧)沿通道14的存在时，关闭调节装置19并打开调节装置46，使得生理溶液到达分离碗24。此时，分离碗24将红细胞与血浆和其它细胞分离，将其送入容器21。在血浆分离后，电动机25停止并且通过操作泵送装置49和保持调节装置19、46和33关闭和调节装置50开放将红细胞送入容器6中。此时，泵送装置49停止并且操作泵送装置31以使第一溶液进入容器6。在第一溶液转移到容器6的过程中，调节装置30和50 (尤其是，还有调节装置19、33和46)保持关闭，而调节装置29保持开放。根据称重装置51检测到的容器27的重量(尤其是，重量的变化)，通过控制单元15来调节泵送装置31的操作(以及因此调节进入容器I中的第一溶液的量)。根据替代实施方案，调节装置50保持开放，使得部分第一溶液到达分离碗24，以洗涤分离碗24。在这种情况下，进入分离碗24内的该部分第一溶液通过操作泵送装置49被转移至容器6。在第一溶液被引入容器6后，泵送装置31被锁定，并且板36的致动器被操作为使容器6略微倾斜。该倾斜进行约5-20分钟。由此，红细胞至少部分溶胀。在倾斜之后，通过操作泵送装置49和保持调节装置50开放将容器6的内容物送入分尚碗24。在分离碗24中(当泵送装置49停止时)，所述至少部分溶胀的红细胞通过电动机25的操作被浓缩。经红细胞浓缩后，电动机25停止并且启动泵送装置49，以使所述至少部分溶胀的红细胞被送回容器6。此时，调节装置50关闭并且泵送装置31再次操作，保持调节装置29开放和调节装置30关闭，以使第二溶液进入容器6中。根据替代实施方案，调节装置50保持开放，使得部分第二溶液到达分离碗24，以洗涤分离碗24。在这种情况下，进入分离碗24的部分第二溶液通过操作泵送装置49被转移到容器6。根据称重装置51检测到的容器28的重量(尤其是，重量的变化)，通过控制单元15来调节泵送装置31的操作(以及因此调节进入容器I中的第二溶液的量)。在第二溶液被引入容器6后，泵送装置31被锁定，并且板36的致动器被操作为使容器6略微倾斜。该倾斜进行约1-30分钟，有利地为5-20分钟。由此，红细胞至少部分溶解。在容器6的混合过程中，调节装置50保持关闭。此时，泵送装置40被操作为使容器6的内容物通过通道41到达过滤器37。当红细胞到达过滤器37时，泵送装置40停止，然后抽吸器38运行以使至少部分溶解的红细胞浓缩。进行浓缩，直到在容器39中回收适当的流体量。利用称重装置51，通过检测容器39的重量变化来测量容器39的正确含量。换言之，根据称重装置51检测到的容器39的重量(尤其是，重量的变化)，通过控制单元15来调节抽吸器38的操作(以及因此调节进入容器39中的水溶液的量)。 在所述至少部分溶解的红细胞已被浓缩后，抽吸器38停止并且泵送装置40运行以使红细胞回到容器6中。因此，操作人员通过进口 7注射化合物，并且随后使板36倾斜约1-45分钟。在倾斜后，操作人员将密封溶液通过进口 7注射到容器6中。此时，容器在约25_40°C的温度下倾斜约10-40分钟，从而获得至少部分处理的红细胞。因此，容器6的内容物通过操作泵送装置49、保持调节装置50和33开放和调节装置46和19关闭(特别是还有调节装置29和30)转移至容器13。根据一个实施方案(图中未示出)，设备I没有泵送装置31。在这种情况下，通过泵送装置49和适当地控制上述调节装置来移动第一和第二溶液。图3示出与图I和8的设备I不同的设备的变化方案，区别仅在设备I没有泵送装置40，包括调节装置V (特别是，沿泵送装置49和分离单元4之间的通道14设置)并且通道42连接到连接通道14 (特别是在泵送装置49和分离单元4之间)。在这种情况下，容器6的内容物向过滤器37的转移是通过操作泵送装置49和保持调节装置50开放和调节装置V关闭来实施的。调节装置V与调节装置29和30在结构上基本相同，并且对通道14的操作方式与调节装置29和30对通道9和10的操作方式基本相同。图2示出设备I的一个变化方案，设备I允许在经处理的红细胞被浓缩后再转移到容器13。图2的变化方案与图I和图8的变化方案的区别仅在于包括另一过滤器52 (特别是血液过滤器或渗析过滤器)和调节装置53和54 (可由控制单元15操作)。过滤器52和调节装置53安装在通道41和42之间，并适于浓缩所述至少部分经处理(和洗涤)的红细胞，然后将红细胞转移至容器13。调节装置54沿在容器6和过滤器37之间的通道41设置。调节装置53和54与调节装置29和30在结构上基本相同，并且操作方式与调节装置29和30基本相同。在使用中，特别地，在已在容器6中得到至少部分经处理的红细胞后，将容器6的内容物通过操作泵送装置40和保持调节装置54关闭和调节装置53开放来送至过滤器52。当红细胞到达过滤器52时，泵送装置40停止并且操作抽吸器38以浓缩所述至少部分经处理的红细胞。所述浓缩进行至在容器39中回收适当量的流体为止。在至少部分经处理的红细胞被浓缩后，抽吸器38停止并且操作泵送装置40以将红细胞送回容器6。有利的是，设备I包括一次性装置55 (特别是如图9中所示)，它包括该设备与红细胞直接接触的所有部件。特别地，装置55包括通道系统2、容器6和13以及进口 7。根据一些实施方案，(例如，如图9所示)装置55还包括过滤器37和/或52、容器27、28和48和分离碗24。有利的是，装置55还包括容器21和39。应当注意的是，装置55只包括接触或可能接触血液的部件。装置55是一次性使用的事实，极大地简化了设备I的使用，提高了使用的安全性和速度。设备I还包括可重复使用的装置56，它适于用作在其上安装装置55的支承体。装置56的一个实施方案的部分细节示于图4中。 装置56包括泵送装置49和调节装置29、30和33。根据一些实施方案，(如图4中所示)装置56还包括泵送装置49、调节装置19和46、用于旋转板36 (有利的是还有板36)的电动机。装置56还有利地包括抽吸器38 (有利的是还有传感器26和称重装置51)。根据特定的实施方案，装置56还包括调节装置50。特别地，装置56还包括泵送装置31和/ 或 40。在图4中，附图标记57和58分别是指用于分离碗24的锁定臂和壳体。上述公开的设备I相对于现有技术具有几个优点。具体而言，设备I允许几乎自动执行所有的操作步骤，以获得经处理的红细胞。由此，在程序进行过程中，操作人员犯错的时间和可能性大大减少。设备I也相对简单，携带方便并且具有成本效益。设备I的使用得到进一步简化，并且由于设备I包括一次性类型的装置55，因而安全性得到进一步改善。在这方面，应该指出的是，根据有利的实施方案，该设备包括不超过三个泵送装置(特别是，2-3个)和至少四个调节装置(有利的是5个)。此外，上述公开的设备I非常灵活，尤其允许得到具有不同浓度的引入化合物以及还具有不同的血细胞比容和最终体积的经处理的红细胞。上述公开的设备I允许高度的自动执行和控制(而不需要由操作人员人工控制)允许将至少一种化合物引入红血细胞中的所有动作序列。在根据本发明的第二方面，提供一种用于设备I的一次性试剂盒I ;该试剂盒包括如上所定义的装置55或装置55的部件以组装得到装置55。根据本发明的第三方面，提供如上所定义的装置56。根据本发明的第四方面，提供一种用于将至少一种化合物(特别是，如上所定义的)引入红细胞内。该方法包括溶解步骤，在此期间红细胞被至少部分溶解悬浮在第二低渗溶液(特别是如上所定义的)中；和在溶解步骤之后的第一浓缩步骤，在此期间所述至少部分溶解的红细胞通过血液过滤进行浓缩。有利的是，该方法包括在溶解步骤之前的溶胀步骤，在此期间红细胞通过悬浮在第一低渗溶液(特别是如上所定义的)而溶胀，以得到悬浮液；第一低渗溶液相对于第二低渗溶液具有更大的溶质浓度。根据一些实施方案,该方法利用根据本发明的第一方面的设备实施。该方法还包括与第一浓缩步骤同时(或之后)的合并步骤，在此期间至少部分溶解的红细胞与化合物合并；在该合并步骤之后的闭合步骤，在此期间至少部分溶解的红细胞进行闭合，以至少部分地包封化合物并获得经处理的红细胞；以及在该闭合步骤之后的第二浓缩步骤，在此期间所述经处理的红细胞被浓缩。在闭合步骤后(并且在第二浓缩步骤之前)的经处理的红细胞的浓度低于在第二浓缩步骤后的经处理的红细胞的浓度。更准确地说，在闭合步骤结束时(并且在第二浓缩步骤之前)，经处理的红细胞在溶液中为第一浓度；在第二浓缩步骤结束时，经处理的红细胞在溶液中为高于第一浓度的第二浓度。在第二浓缩步骤期间，从经处理的红细胞的溶液中移除水。换言之，在闭合步骤结束时(并且在第二浓缩步骤之前)经处理的红细胞的溶液的含水量高于在第二浓缩步骤时经处理的红细胞的溶液的含水量。应当指出，本发明尤其源于以下事实即出乎意料的是，不是经处理的红细胞的所有浓度均会导致有效的结果。这个问题在现有技术中是完全不存在的。 有利的是，在第二浓缩步骤中，经处理的红细胞通过使用血液过滤器进行浓缩。根据一些实施方案，该方法包括第三浓缩步骤，其在溶胀步骤之后和溶解步骤之前，在此期间悬浮液中的水含量降低，因此悬浮液中的红细胞浓度相应增加。根据一些实施方案，第三浓缩步骤通过利用包括离心装置(特别是如上所定义的)的分离步骤进行。有利的是，在闭合步骤中，所述至少部分溶解的红细胞与密封溶液(特别是如上所定义的)接触。根据一些实施方案，该方法包括洗涤步骤，其在闭合步骤之后(可能在第二浓缩步骤之前)，在此期间用生理溶液洗涤经处理的红细胞。洗涤步骤适于移除未进入红细胞中的化合物以及其它不期望的物质(例如蛋白质或密封溶液)。根据本发明的第五方面，提供一种将至少一种化合物(特别是如上所定义的)引入红细胞内的方法。该方法包括溶解步骤，在此期间红细胞至少部分溶解悬浮在第二低渗溶液(特别是如上所定义的)中；和在溶解步骤之后的第一浓缩步骤，在此期间所述至少部分溶解的红细胞通过血液过滤得到浓缩。有利的是，该方法包括在溶解步骤之前的溶胀步骤，在此期间红细胞通过悬浮在第一低渗溶液(特别是如上所定义的)中而溶胀，以得到悬浮液；第一低渗溶液相对于第二低渗溶液具有更大的溶质浓度。该方法还包括在浓缩步骤之后的合并步骤，在此期间所述至少部分溶解的红细胞与化合物合并(或在同一时间同时与多种化合物合并)；在该合并步骤之后的闭合步骤，在此期间所述至少部分溶解的红细胞进行闭合，以至少部分地包封化合物(或多种化合物)并获得经处理的红细胞；以及在溶胀步骤之后和溶解步骤之前的第二浓缩步骤，在此期间悬浮液的水含量降低，悬浮液中的红细胞的浓度相应增加。根据一些实施方案，根据本发明的第五方面的方法具有根据本发明的第四方面的方法的一个或多个特征(在这种情况下，应该注意的是，第五方面的第二浓缩步骤对应于第四方面的第三浓缩步骤，反之亦然)。根据本发明的第六方面，提供根据本发明的第一方面的设备用于将至少一种化合物引入红细胞内的用途。
有利的是，该化合物如根据上述公开所限定。根据一些实施方案，该设备的用途根据本发明的第四和/或第五方面进行。根据本发明的一个特定方面，提供一种用于将至少一种化合物引入红细胞内的设备；设备I类似于(基本相同于)根据本发明的第一方面所公开的设备，并且与其不同之处在于除了传感器26之外或作为传感器26的替代方案，该方法具有以下特征中的一个或多个。设备I包括分别包含第一和第二溶液的容器27和容器28。通道9和10分别连接到容器27和容器28。设备I包括称重单元51，用以对第三和第四容器27、28进行称重。控制单元15适于根据第三容器27的重量来控制调节装置29和根据第四容器28的重量来控制调节装置30。设备I包括容器21以收集通过分离单元4从红细胞中分离的物质；包含第三溶液(特别是生理溶液)的第七容器48 ;连接到容器48的通道47 ；以及连接到容器21的通道22。通道9和10分别连接到容器27和第四容器28。设备I包括称重单元51，用以对容器27和28、容器21和容器13进行称重。控制单元15适于根据容器13 (和/或21和/或27和/或28和/或39和/或48)的重量来控制泵送装置31 (和/或40和/或49)。·根据本发明的进一步方面，提供以下内容。用作药物的溶液(含有经处理和浓缩的红细胞，即在第二浓缩步骤后获得的)。用于体内诊断的溶液(含有经处理和浓缩的红细胞，即在第二浓缩步骤后获得的)。溶液(含有经处理和浓缩的红细胞，即在第二浓缩步骤后获得的)用于生产药物的用途。溶液(含有经处理和浓缩的红细胞，即在第二浓缩步骤后获得的)用于生产药物的用途。一种包含溶液(含有经处理和浓缩的红细胞，即在第二浓缩步骤后获得的)的药物组合物。除非另有明确表示，本文中引用的内容(论文、文本、专利申请等)整体并入本文。特别地，上文提及的参考文献通过引用并入本文。从通过非限制性说明的方式给出的设备的一些实施方案的以下说明中将得到本发明的其它特征。实施例I该实施例公开了图I的设备的操作试验。下文中所用的方法遵循相对于本发明第一方面的上述设备I的操作说明的指示。在来自健康献血者50毫升全血的人红血细胞中进行8次加载地塞米松磷酸钠(每个程序采用500mg)的试验。用于试验的材料是-图4的装置；-图9的装置；-低渗溶液I(400ml，渗透压摩尔浓度180m0sm/Kg)、低渗溶液2 (200ml，渗透压摩尔浓度 120m0sm/Kg)；-再密封高渗溶液(PIGPA)(约33mM NaH2PO4 ;约 I. 606M KCl ;约 O. 194M NaCl ;约
O.IM肌苷；约5mM腺嘌呤；约20mM ATP ;约O. IM葡萄糖；约O. IM丙酮酸盐；和约4mMMgCl2)(7ml,2500-3800m0sm/Kg)。-地塞米松磷酸钠水溶液，500mg/20ml(完全使用)-注射级的生理盐水溶液(O.9%重量/体积的NaCl水溶液)(2L袋，其中使用
I.8L, O. 8L用于第一次洗漆，IL用于第二次洗漆)-来自健康献血者的50mL全血，用10000IU肝素钠抗凝结果通过试验获得的数据示于下表，其中可以通过标准偏差来验证不同测试之间结果 的实际可重复性。


一种用于将至少一种化合物引入红细胞内的便携且高度自动化的设备和方法；所述设备(1)包括可重复使用部件(56)，其具有机械元件例如泵(31、40、49)和阀(10、26、29、30、33、46、50)以及电子单元例如控制单元(15)；所述设备(1)还包括一次性部件(55)，其适于接触包含红细胞的样品并且具有由可变形材料制成的导管系统(2)、多个容器(6、13、21、27、28、39、48)和一个或多个过滤器(37)；所述设备(2)允许在处理红细胞后进一步浓缩红细胞；所述设备(1)允许以几乎完全自动化方式将化合物引入红细胞内。