专利名称:抗氧化剂的制造方法近年来,活性氧被认为是造成皮肤皱纹、张力降低等老化的原因,作为防止老化的方法之一,除去活性氧的方法已广为所知。作为活性氧清除剂被使用的有超氧化物岐化酶 (S0D,也被称为抗氧化酶)等。SOD不仅具有抑制活性氧发生的效果,而且能够防止由活性氧引起的皮肤变粗糙和斑点、皱纹等(参照非专利文献1)。因此,近年来,人们对具有SOD活性的抗氧化物质进行了相关研究。例如,已提出了白桦提取组合物(参照专利文献1)以及以七叶树籽的提取物为有效成分的SOD活性化剂(参照专利文献幻等。然而,由于这些SOD活性化剂全都是从植物原料提取得到,该提取操作耗费时间长,且由于天然资源的利用可能性有限等原因,其制造成本高。另外,除了来自植物的抗氧化物质以外,乳酸菌等的发酵物也被发现具有抗氧化效果。例如,专利文献3中提出了对于广范围的过氧化物具有分解特性的乳酸菌由来的培养物。然而,该培养物仅仅是从豆曲等分离源分离乳酸菌、并培养,从所得到的培养物回收菌体,而得到的含有该菌体的菌体悬浊液,对于过氧化氢等过氧化物具有分解特性。对于过氧化物的分解有可能是由还原性物质引起的分解,因而并不一定是由SOD引起的分解。另夕卜,非专利文献2 5中公开了由纳豆菌或乳酸菌发酵豆渣得到的发酵物具有抗氧化作用。 然而,这些研究都偏重于豆渣发酵物的亚油酸体系中的抗氧化作用、羟自由基清除能力、过氧化氢清除活性等抗氧化作用,而对于具有SOD活性还未有报道。此外,专利文献4、5中提出了纳豆菌发酵番石榴叶由来的抗氧化物质。然而,从其实施例可以看出,只使用番石榴提取物(试样1)和只使用米糠、大豆发酵物(试样幻时的 SOD活性都低,其活性氧清除效果不充分。而且,由于番石榴叶的获得受季节限制,因而该方法同样在实际使用上存在困难。如上所述,虽然已知具有各种活性氧清除能力的物质,但是,这些物质中还没有发现高SOD活性,已实用化的物质也很少。而且,目前还没有利用假丝酵母属(Candida)的微生物来制造具有高SOD活性的抗氧化剂的报道。非专利文献1 食品功能素材11,2001年4月27日出版,株式会社广告节目郗, 44-63 页非专利文献2 田村贵起等,日本食品科学工学会刊,1999年,第46卷,第9号, 561-569 页非专利文献3 渡边泰成等,崎玉县产业技术综合中心研究报告,2005年,第3卷非专利文献 4 :B. Moktan, etc.,Food Research International, 2008,41 :586-93非专利文献5 :Y. P. Zhu, etc.,Food Control, 2008,19 :654-661专利文献1 :日本特开2008-88109号公报专利文献2 日本特开2007-291069号公报专利文献3 日本特开2009-191276号公报专利文献4 日本特开2004-24004号公报专利文献5 日本特开2004-43505号公报
针对上述现有技术中存在的技术问题,本发明人进行了悉心研究,结果发现 在含有豆渣的培养基中培养假丝酵母属(Candida)的微生物,特别是培养诞沫假丝酵母(Candida zeylanoides)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)或热带假丝酵母 (Candida metapsilosis),能够低成本且高效地获得抗氧化剂,从而完成本发明。本发明涉及提供一种抗氧化剂的制造方法,其中,在含有豆渣的培养基中培养假丝酵母属(Candida)的微生物,从其上清液中得到抗氧化剂。本发明还涉及提供根据上述抗氧化剂的制造方法得到的具有高SOD活性的抗氧化剂。本发明还涉及豆渣的假丝酵母属(Candida)的发酵提取物作为抗氧化剂的用途。本发明还涉及提供豆渣的假丝酵母属(Candida)的发酵提取物在制造(活性氧清除剂)中的用途。本发明还涉及提供配合有上述抗氧化剂的食品、化妆品、医药品。发明效果根据本发明所涉及的抗氧化剂的制造方法,能够利用特定微生物,以食品加工业等的副产物豆渣作为培养基的主原料,低成本且高效地得到抗氧化剂,该抗氧化剂具有活性氧清除效果,安全性优异,容易操作,因而能够用于食品、化妆品、医药品等领域。 *上述微生物都从江南大学购入,并保藏于中国高校工业微生物资源和信息中心 CICIM0其中标记有CICIM的是保藏编号,没有标记CICIM的是原始编号。将在YPD (Yeast Extract Peptone Dextrose Medium)培养基中 30°C下培养后得到的上述菌株接种到含有抗氧化剂制造培养基IOOml的三角烧瓶(容量300ml)中,在30°C 下培养72小时。该培养基含有10W/v%豆渣和葡萄糖。其中,豆渣的制备通过将大豆放入水中浸泡12小时,使大豆充分吸收水分,然后将吸收了水分的大豆研磨破碎,过滤并除去液体成分后,将剩余残渣浙干来得到。然后,对得到的培养液以3000rpm离心分离10分钟除去菌体,回收培养上清液,将其分别作为试样1 9。另外,只由培养基(没有接种微生物),在与试样1 9同样条件下培养、处理,回收上清液作为对照品,用于测定SOD活性。(SOD活性的测定)使用超氧化物歧化酶检测试剂盒(SOD ASSAY KIT-ffST,同仁化学研究所制),在96 孔板中测定如上所述得到的试样1 9和对照品的SOD活性值。使用试剂盒中附带的试剂。将上述试样1 9和对照品作为待测样品,移取20μ 1在96孔板的“样品”孔和 “空白对照2 ”孔中,在“空白对照1 ”孔和“空白对照3 ”孔中添加20 μ 1无菌水。然后,在各孔中分别添加200μ1 WST工作液,充分混勻。在“空白对照2”孔和“空白对照3”孔中分别添加20μ 1稀释缓冲液。再在“样品”孔和“空白对照1”孔中分别加入20μ 1酶工作液,充分混勻。以37°C加热20分钟,进行孵育,然后,将孔板放入酶联免疫斑点自动图像分析仪Bioreader中,测定450nm处的吸光度。接着,按如下公式计算SOD活性值。将SOD活性值为64. 11 %以上且小于75%记为Δ,表示具有一般SOD活性,将75%以上且小于100%记为〇,表示具有中等的高SOD活性,将100 120%记为◎,表示具有更高的高SOD活性,示于表2和表3。另外,SOD活性值越高,表示抗氧化活性越高。 SOD 活性(% ) = [ (Abi-Ab3) - (As-Ab2) ] / (Abi-Ab3) X 100As 由“样品”孔测定的加入待测样品反应时的吸光度Am 由“空白对照1”孔测定的没有添加待测样品反应时的吸光度Ab2 :由“空白对照2”孔测定的待测样品本身的吸光度Ab3 由“空白对照3”孔测定的孔板本身及稀释缓冲液的吸光度表
本发明涉及抗氧化剂的制造方法。本发明提供一种抗氧化剂的制造方法,其中,在含有豆渣的培养基中培养假丝酵母属(Candida)的微生物,从其上清液中得到抗氧化剂。本发明还提供由上述制造方法得到的具有高SOD活性的抗氧化剂。根据本发明的制造方法,能够利用特定微生物,以食品加工业等的副产物豆渣作为培养基的主原料,从而低成本且高效地获得抗氧化剂。
抗氧化剂的制造方法
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