一种抗菌肽的制作方法[0002]人们对于健康的追求程度随着人们生活质量的改善而提高。但是目前工业化生产和社会发展所导致的环境污染已经严重影响到人们的健康生活，其中细菌滋生是一个重要的原因。这些细菌一方面本身可以对人体产生极大的危害，导致感染和疾病；另一方面会成为载体，传播病毒。同时，细菌也无处不在，特别是在室内、车内这些环境相对封闭、以及公共场所这些环境相对较为复杂的地方，细菌更易传播并导致疾病。传统的杀菌剂具有一定的局限性，如乙醇对皮肤刺激性大；而广泛应用的抗生素则会导致细菌的抗药性，产生超级细菌，是人类面临困境。因此，研发并生产新型杀菌物质对人们健康水平和生活质量的提高具有重要意义。[0003]抗菌肽的是科学家首先在昆虫体内发现的一类具有抗菌活性的肽物质，由氨基酸聚合而成。其因具有高抗菌活性、低毒性、抗菌/抗病毒/抗寄生虫、耐药性发生概率小、代谢产物安全无害等特点，而受到研究者们的关注。但是由于其成本高，且抗菌性不易调控，而在一定程度上应用受到了限制。[0004]近年来，一些小分子抗菌肽受到了研究者们的关注，如Lys-Arg-Trp-Trp-Lys-Trp-Trp-Arg-Arg，Lys-Trp-Lys-Trp-Trp-Lys-Trp-Lys-Lys-Cys, Arg-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Arg-Ar g-Cys 等(Hilpert K et al.Chemistry&Biology.2009 ; 16:58-69)。据上述文献报道，这些小分子抗菌肽在具有一定抗菌性的同时，由于其分子量小，还具有合成成本低，不存在免疫反应的优点。但是，上述的小分子肽的PH稳定性差，杀菌效果不理相>zb ο
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种抗菌肽，该抗菌肽具有pH稳定性好的优点。
[0006]一种抗菌肽,该抗菌肽的序列为 Lys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys (SEQ ID NO: I)ο
[0007]上述抗菌肽可按SEQ ID NO:1所示序列采用多肽合成仪合成得到。
[0008]由于本发明所述的抗菌肽的pH稳定性好，因此适宜制成水溶液的杀菌剂，该杀菌剂每升含有SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽3~7 μ mol。
[0009]本发明所述的杀菌剂每升还含有乙醇80~120mL和甘油10mL。其中，所述的乙醇既有消毒作用又可增加作用在皮肤上清凉感觉；所述的甘油可对皮肤进行滋润。
[0010]上述杀菌剂由以下方法制备成:
[0011]取SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽溶于500mL去离子水中后，加入乙醇和甘油搅拌均匀，再加入去离子水至1000mL,搅拌5分钟，即得杀菌剂。[0012]本发明所述的抗菌肽具有广谱杀菌作用，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌(金葡菌)或绿脓杆菌均有较强的杀灭作用。本发明所述的抗菌肽还具有安全无刺激的优点，相比于乙醇，本发明所述抗菌肽所制成的杀菌剂对细胞的刺激性小。

[0013]下述实施例1~4所用抗菌肽委托上海吉尔多肽有限公司按SEQ ID NO:1~4所示序列合成。
[0014]实施例1
[0015]1、杀菌剂样品的制备
[0016]取3μΜ SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽溶于500mL去离子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL搅拌均匀，再加入去离子水至1000mL,搅拌5分钟即得。
[0017]2、杀菌剂对照品及其制备
[0018]对照品1:取 3 μ M序列为 Lys-Arg-Trp-Trp-Lys-Trp-Trp-Arg-Arg (SEQ ID NO:2)的抗菌肽溶于500mL去离子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL搅拌均匀，再加入去离子水至1000mL,搅拌5分钟即得。
[0019]对照品2:取 3μΜ 序列为 Lys-Trp-Lys-Trp-Trp-Lys-Trp-Lys-Lys-Cys (SEQ IDNO:3)抗菌肽溶于500mL去离子水中后，加入乙醇IOOmL和甘油IOmL搅拌均匀，再加入去离子水至1000mL,搅拌5 分钟即得。
[0020]对照品3:取 3 μ M 序列为 Arg-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Arg-Arg-Cys (SEQ IDNO:4)抗菌肽溶于500mL去离子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL搅拌均匀，再加入去离子水至1000mL,搅拌5分钟即得。
[0021 ] 对照品4:体积浓度为75 %的医用乙醇。
[0022]3、细菌灭活率检测实验
[0023]取ImL样品和对照品I~4分别加入盐酸调节pH至3后，每一种杀菌剂中分别加入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌(金葡菌)及绿脓杆菌悬液，配成细菌浓度为109cfu/mL的菌液。在5s和Imin后，取出菌液，梯度稀释后涂琼脂板计数。实验中以ImL去离子水溶液为空白组，进行相同处理，并依照其中的细菌存活数计算各组的细菌灭活率。结果如下表1和2所示。
[0024]表1 5s内的细菌灭活率)
[0025]

I对照品I I对照品2 I对照品3 I对照品4~
大肠杆菌 35.31 28.12 17.12 20.23 30.12
金葡菌~ 38.12 30.13 15.25 16.13 28.43
绿脓杆菌 38.84 27.12 13.22 16.09 34.52
[0026]表2 Imin内的细菌灭活率
[0027]