专利名称：活性发泡体的制作方法 前列腺癌是在高龄男性中具有代表性的癌症，由于人口的高龄化、生活方式的西化，前列腺癌在日本也不断增加。而且，通过用肿瘤标记物(前列腺特异抗原PSAprostate specific antigen)的血液检查的发展，诊察的普及，确认了前列腺癌的增加趋势。看一下日本前列腺癌的年龄校正患病率(对10万人)，1956年为3.5，1990年为8.5，2015年在推测统计学上预测达到20.3。在北美前列腺癌的患病率明显高，在1990年为92.4，美国的日本血统第3代的前列腺癌患病率与北美白人的患病率近似。基于该事实，说包含脂肪过多的饮食的生活方式西化，与在日本前列腺癌的增加有关并不过分。因此，预测在2015年有8～10万人成为前列腺癌的治疗对象。根据国立癌研究所(NCINational Cancer Institute)的统计，看一下美国在1998～2002年的癌的年龄校正患病率(对10万人)，全部为469.7。其中，前列腺癌为76.0，位居第一。接着是乳腺癌(73.3)，肺癌以及支气管癌(61.0)，结肠癌(38.3)，淋巴瘤(21.8)进入前5位。前列腺癌因男性荷尔蒙而增殖，具有去除男性荷尔蒙就能抑制其增殖的特征。因此，在抑制前列腺癌的增殖方面，很多采用通过手术摘除精巢或者是用药物抑制精巢功能的抗雄激素治疗方法。但是，用抗雄激素治疗方法，可以抑制前列腺癌在某一定期间(通常1～3年)的临床发展，但都复发。对于向远隔脏器转移(向骨转移的较多)的情况，用荷尔蒙疗法的10年生存率为10％或更小。对于限定局部的前列腺癌，根治前列腺全摘除术(包括骨盆内范围的淋巴结廓清)如字面意义成为根治的治疗法。不只是手术疗法，根据前列腺癌的恶性程度和发展程度以及有无转移，还有从荷尔蒙疗法到包括重粒子线照射或者将针状的放射性物质直接刺入前列腺的方法的放射线疗法、用抗癌剂的化学疗法的广泛选择。
然而，在任一种的治疗法中都有并发症、副作用，而且避免不了复发的例子也不少。因此，现在要求开发没有副作用的有效治疗法。另外，根本上是要求前列腺癌的预防治疗，美国最近报告了根据大量临床治疗经验，服用维生素E对抑制前列腺癌的发生有效。实际上，对因别的原因死亡的人的前列腺剖验进行组织学研究，发现有前列腺癌的情况很多，这表现为潜伏癌。潜伏癌的频率高，如果也包括在组织学上显示浸润图像的癌，则虽根据报告其频率之高有差异，发现50岁或更高龄的人占约30％。80岁或更高龄的有60％～70％的人被确认为前列腺癌。开发使这种潜伏癌在临床上不发展成癌的预防方法是迫切的问题。鉴于上述课题，本发明的目的在于提供无副作用、能够促进血液循环、改善体质、促进癌症等疾病的治愈的活性发泡体。为了达到上述目的，精心研究之后，完成了本发明。即，本发明提供一种活性发泡体，其特征为其是由含有锆化合物以及/或者锗化合物的天然或者合成橡胶或者合成树脂制成的，具有独立气泡结构，在给与药物时，使其与人体直接或者间接接触来使用。
本活性发泡体是使其与人体直接或者间接接触来使用的，如果进一步在活性发泡体与人体之间发生摩擦，则更有效果。本活性发泡体促进血液循环、改善体质、促进疾病的治愈，但是其机理没有被阐明。
锆化合物以及锗化合物在活性气泡体内收集来自于太阳等的红外线。于是红外线在活性发泡体内部的多个气泡壁上碰撞，反复进行漫反射和汇集，由此向活性气泡体外产生对人体有好处的波长在4～25微米的红外线。推测由于该红外线与人体波长发生共振，使身体中的水分子及蛋白质分子活化，由于代谢促进作用而增进人本身具有的自然治愈力。所以，推测促进癌、高血压、糖尿病、心脏病、肩膀酸痛、腰痛、过敏性疾病等疾病的治愈或者防止衰老、促进育毛等的体质改善。另外，本活性发泡体可以反复使用。
本活性发泡体在给与药物时，如果使其与人体直接或者间接接触来使用，则可以提高其药物制剂的效果。另外，即使是如果大量使用就有副作用的药物制剂，只要与本活性发泡体并用，则用少量即可，所以可以抑制副作用。
作为药物制剂的种类，例如，可以举出注射用剂、皮肤外用剂、经粘膜皮肤用剂、经鼻腔用剂或者经口用剂等，但不限定于这些种类。还可以具体举出抗癌剂、抗生素等，但不限定于这些种类。另外，药物制剂优选为来自于人的物质。来自于人是指人本身体内具有的物质。来自于人的物质可以是从人体提取得到的物质，也可以是人工合成得到的物质。
即使在来自于人的物质中，使用毒性无限小的物质，优选在平常量下使用时没有副作用的物质。作为其例子，例如，可以举出存在于人肠管内的丁酸钠(sodium butyrate，以下称为SB)、丁酸酯钠。这些物质是使染色质不活化的组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor，HDACI或者简称为HDi，以下称为HDACI)，具有活化染色质、启动抑癌基因、停止癌细胞的细胞周期(分裂周期，细胞分裂结束后到下一个细胞分裂为止的细胞生活周期)的作用，即，具有作为抗肿瘤剂的作用。即使是合成的SB、丁酸酯钠衍生物，如果毒性小也是有用的。如果将这些物质的服用与本活性发泡体的使用组合起来，则可以抑制癌基因的作用，提高癌抑制效果。
另外，作为来自于人的物质，也可以是在HDACI起作用时，起到共益作用的各种核内转录因子(DNA活化因子或者抑制因子)或染色质重塑物质。即，为了使抑癌基因活化，只要是在其DNA的启动子区域内起作用的物质就可以。通过将这些物质与本活性发泡体组合，可以抑制癌基因的作用，提高癌抑制效果。
在内部含有的气泡优选形成20～30个/mm2。这样，通过在内部高密度地含有多个独立气泡，可以产生对人体有益的红外线。
作为活性发泡体的形式，例如，可以制成容易携带搬运的小型三角形状的便携型，铺的褥子、盖的被子等寝具状形式，用于衣服等一部分或者全部的形式，只要是能与人体直接或者间接接触的形式，就没有限定。另外，想要将活性发泡体局部集中到人体的一部分来给与疾病治疗等效果时，可以做成厚度约8mm～5cm的片状。还有，在作为衣服原材料的情况下，如果做成厚度约0.3～5mm的片状，就容易制作衣服。
作为橡胶成分，天然橡胶或者合成橡胶都可以。作为合成橡胶，可以举出氯丁二烯橡胶(CR)、苯乙烯-丁二烯橡胶(SBR)、丙烯腈-丁二烯橡胶(NBR)、丁腈橡胶(NRP)、丁二烯橡胶(BR)、异戊橡胶(IR)等橡胶类高分子，或者将它们数种混合得到的物质，并不限于这些物质。
另外，作为合成树脂成分，可以举出聚氯乙烯树脂(PVC)、聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)等，并不限于这些物质。
作为发泡剂，可以使用公知的发泡剂，优选Celogen OTI(UNIROYAL社制，美国)或者Unicel(ドンジン社制，韩国)。
可以是使锆化合物以及锗化合物两方都含有的形式，也可以是只含有任意一方的形式。在癌治疗中，如果使锆化合物以及锗化合物两方都含有，则对癌的治疗有促进效果，所以优选。
作为锆化合物，优选使用锆配位化合物。作为锆配位化合物，可以举出锆和氟等的配位化合物，具体可以举出六氟锆酸钾(K2ZrF6)或者八氟锆酸钾(K2ZrF8)，并不限于此。相对于橡胶成分100重量份，锆化合物的含量优选使其含有10～80重量份。任何一种比下限值小的情况，都是效果欠乏，即使比上限值多，因为未见效果有显著差异，所以从经济性方面考虑不优选。
另外，作为锗化合物，优选使用锗矿物或者锗配位化合物。作为锗矿物，可以举出硫锗银矿(Ag8GeS9，Argyrodite)及硫砷铜铁锌锗矿(レニェル矿)((Cu，Zn)11Fe4(Ge，As)2S16，Renierite)等，并不限于此。另外，作为锗配位化合物，可以举出锗和二羧酸或者胺等的配位化合物，并不限于此。相对于橡胶成分100重量份，锗化合物的含量优选使其含有5～10重量份。任何一种比下限值小的情况，都是效果欠乏，即使比上限值多，因为未见效果有显著差异，所以从经济性方面考虑不优选。
在上述构成的基础上，本活性发泡体还优选使其含有碳。通过含有碳，提高活性发泡体的强度，而且可以更多地收集来自于太阳等的红外线。作为碳，例如有炭黑，可以使用粉粒体的物质，并不限于此。
通过本发明，本活性发泡体在给与药物时，如果使其与人体直接或者间接接触来使用，可以提高其药物制剂的效果。另外，即使是如果大量使用就有副作用的药物制剂，只要与本活性发泡体并用，则少量即可，所以可以抑制副作用。


本实施方式的活性发泡体的纵向剖面图[图2]表示血流量(ml/min/100g)变化的图[图3]表示血液量变化的图[图4]表示血流速度变化的图[图5]表示体压(hPa)变化的图[图6]细胞的电子显微镜照片(a)实验组(b)对照组[图7]Du145(人前列腺癌细胞)的活细胞的cDNA微阵列的结果[图8]是表示Du145(人前列腺癌细胞)的活细胞数的推移的表以及图，(+)表示使用本活性发泡体的实验组，(-)表示对照组[图9]是表示LNCap(人前列腺癌细胞)的活细胞数的推移的表以及图，(+)表示使用本活性发泡体的实验组，(-)表示对照组[图10]是表示PC3(人前列腺癌细胞)的活细胞数的推移的表以及图，(+)表示使用本活性发泡体的实验组，(-)表示对照组符号说明1气泡片2覆盖片
以下，根据附图对本发明的实施方式进行说明。图1是本实施方式的活性发泡体的纵向剖面图。如图1所示，本实施方式的活性发泡体是在橡胶制气泡片1的表面和背面层叠有橡胶制覆盖片2的层叠体。另外，在本实施方式中，虽然制成在橡胶片1的表面和背面都层叠有覆盖片2的形式，但是可以制成在表面和背面的任意一面上层叠覆盖片2的形式，也可以制成不层叠覆盖片2而只是气泡片1的形式。
气泡片1是以橡胶或者是合成树脂作为主成分的，含有锆化合物以及/或者锗化合物和碳的、具有独立气泡结构的发泡体。独立气泡是通过发泡剂使其发泡而形成的。气泡片1的剖面形状形成有大量微细的气泡。另外，气泡片1的厚度为约1cm，但并不限于此。
表面和背面的覆盖片2是通过粘附在气泡片1的表面和背面而固定的，只要能够层叠在气泡片1上，也可以采用别的方法进行固定。另外，覆盖片2的材料是以氯丁二烯橡胶(CR)为主成分的橡胶片，不含有气泡，但也可以是使其含有气泡的形式。还有，覆盖片2的材料不限定为氯丁二烯橡胶，也可以是别的合成橡胶、天然橡胶或者氯磺化聚乙烯等的合成树脂。
实施例以下用实施例对本发明的
进行更详细的说明，但是本发明并不限定于以下的实施例，当然可以在本发明的范围内在实施例上增加更多的修改以及变更。
首先，做成气泡片1。以橡胶或者树脂为基材，根据表1的配方进行配合，在辊筒中混炼。将材料混合的方法没有特别的限制，可以采用对于一般的橡胶或者合成树脂的配合物使用的混合方法。接着，将得到的混炼物通过挤压机成形为片状。将该片在加热空气下硫化以及发泡(硫化工序)。该硫化工序分为1次和2次的2个阶段来进行。通过在2个阶段中硫化，气泡在气泡片整体中被均匀形成。通过以上的工序，气泡片1被制造出来。
然后，在气泡片1的表面和背面上用橡胶类或者合成树脂类的粘合剂粘合覆盖片2。接着，在作为表面的一侧施加高电压。施加电压的条件为电流为1万安培～80万安培，电压为200～3300V，时间为0.1～0.3秒。另外，优选电流越高越好。活性发泡体产生红外线等电磁波。虽然机理没有被阐明，但是推测通过在活性发泡体的一面施加高电压，电磁波的方向显示为指向施加电压的面。所以，如果将那一面与人体接触，则可以接触到在那一面所集中的电磁波，能够更好地提高疾病的治愈效果。通过以上的工序，完成本活性发泡体。


(单位重量份)在上述实施例中的Celogen OTI是P，P′-氧代双苯磺酰肼(UNIROYAL公司制，美国)，是发泡剂。锆石是指通常作为硅酸盐存在的物质(ZrSiO4)。另外，硫化促进剂DM指二硫化二苯并噻唑。硬度使用橡胶硬度计C型。
<实验1>
接着，对于采用活性发泡体，其给人的体压以及血流带来的影响进行测定实验。首先，说明体压以及血流测定的实验方法。
<实验对象>
将1名50多岁的女性作为被实验者。
<实验方法>
使用血流以及体压测定机器(AMI3037-2，株式会社AMI TECHNO制)进行实验。体压以及血流传感器安置在大腿上部，在室温23℃，湿度55％RH的环境下，在下述2种条件下进行了测定。条件1在椅子上垫上活性发泡体，在其上面静坐30分钟后，对血流量(blood flow)、血液量(blood volume)、血流速度(blood velocity)、以及体压(body surface contactpressure)进行10分钟测定。条件2作为对照例，在不垫活性发泡体的椅子上静坐30分钟后，对血流量等进行10分钟测定。将其结果示于表2、图2～图5中。表2示出10分钟的血流量等测定值的平均值。图2～图5表示10分钟的血流量等的测定值的推移。血流量是100g人体组织在1分钟流动的血流量，通过从毛细血管中的红血球反射的光量来测量。血液量是100g人体组织的单位断面积的血液量，有血液量和血流速度的乘积大致等于血流量的关系。
实验结果表2

由表2、图2～图5可知如果使用本活性发泡体，血液循环变好，体压降低。
<实验2>
<实验对象>
使用来自于人的培养前列腺癌细胞(Du145，PC3，LNCap)。LNCap是荷尔蒙依存性的前列腺癌细胞，Du145和PC3是荷尔蒙非依存性的前列腺癌细胞。
<实验方法>
在加入有培养液15ml的直径10cm的培养皿中，以105细胞/皿将各前列腺癌细胞(Du145，LNCap，PC3)分别撒布于皿中，在37℃、5％CO2的条件下，培养7～10日后(准备期间)，开始实验。在1个培养皿中撒布1种前列腺癌细胞。另外，在该准备期间，不使用活性发泡体。
然后，实验开始后，实验组在用活性发泡体将各培养皿的上下夹着的状态下培养。对照组在没有活性发泡体的状态下培养。培养液平均3日换1次，各细胞在达到饱和状态前转移到新的培养皿中进行继代培养。继代培养日因各细胞而异，但对于各种细胞的对照组与实验组而言，继代培养日相同。
将实验即将开始前作为0日，在开始后的第1，2，3周回收细胞，将培养第3周的细胞固定后用电子显微镜观察(a)。
另外，从将培养第3周的细胞中提取mRNA(messenger ribonucleicacid，信使核糖核酸)。提取的mRNA杂交到human 1.2K cDNA microarray(Clontech)中，其结果用GeneSpider(基因解析软件Silicon Genetics，Redwood，CA，U.S.A)解析。关于细胞凋亡相关基因的表达，用ANOVA聚类分析(b)。
<实验结果>
在实验组中确认了如下各前列腺癌细胞的增殖特征。
(a)在实验组与对照组的第3周电子显微镜像中，确认了形态的差异。即，在与活性发泡体接触3周的各癌细胞中，与对照组(图6(b))相比，细胞质的液泡多，产生线粒体的内部结构的不鲜明化、核膜的不清晰化(图6(a))。即，明确了在使用了活性发泡体的细胞中，产生细胞凋亡(apoptosis)。
另外，细胞凋亡是指基因上被程序化的细胞死亡，即细胞的自杀。这种细胞凋亡系统紊乱、持续增殖的细胞就是癌细胞。
(b)还有，关于cDNA微阵列的第3周的结果，将作为代表例的DU145的结果示于图7中。与对照组相比，mRNA表达亢进，即基因活化的用黑色表示；与对照组相比，mRNA表达低下，即基因活动低下的用格子图形表示；与对照组相比，mRNA表达没有变化的用灰色表示。
对于Du145而言，实验组与对照组相比，确认增加(up-regution)到FasL(2.3倍)、Fas(1.4倍)、TRADD(1.4倍)、CASP1，4，10(1.7，1.2，1.7倍)、DFF40(1.7倍)。对于PC3而言，实验组与对照组相比，确认增加到CD40(1.4倍)、TNF(1.4倍)。对于LNCap而言，实验组与对照组相比，确认增加到Fas(1.6倍)、CASP8(1.6倍)、CASP3(1.3倍)。另外，FasL，Fas，TRADD，CASP1、4、10，DFF40，CD40，TNF是启动细胞凋亡途径的基因群。由上述可知，使用了活性发泡体的实验组与对照组相比，细胞凋亡被促进。
<考察>
从以上的实验可以得知，活性发泡体启动癌细胞的细胞凋亡途径，促进癌细胞的活动减弱作用。
<实验3>
对于人前列腺癌细胞，使用由活性发泡体和作为HDACI的SB，进行了癌细胞增殖抑制实验。该实验具体显示革命性的前列腺癌的治疗方法、预防方法，而且从原理上暗示着对所有癌都有效的可能性。在此，对HDACI进行详细的说明。HAT(组蛋白乙酰基转移酶histone acetyl transferase)如果将组蛋白的赖氨酸(lysine)乙酰化，则染色质在核内被活化。如果染色质被活化，则核内转录因子在DNA启动子(promoter)区域与激活因子(activator)结合在一起，启动结构基因。另外，HDAC(histone deacetylase)引起赖氨酸的脱乙酰化，使染色质再次不活化。
以SB为代表的HDACI，防止该HDAC的脱乙酰化，不发生染色质的不活化。因此，HDACI使作用减弱的抑癌基因等活化，起到了抑制癌细胞增殖的作用。
<实验对象>
使用来自于人的培养前列腺癌细胞(Du145，PC3，LNCap)。LNCap荷尔蒙依存性的前列腺癌细胞，Du145和PC3是荷尔蒙非依存性的前列腺癌细胞。
<实验方法>
将各个103细胞/100μl浓度的各前列腺癌细胞(Du145，LNCap，PC3)在96孔培养板(96well plate)中培养。在用活性发泡体的实验组中，在板中添加6μl的0、1、2、3mM的SB，用活性发泡体将板上下夹着。该加入SB的培养液，每两天换一次培养液。在对照组中，不使用活性发泡体培养，添加6μl的0、1、2、3mM的SB。在0mM的SB中，添加等量(6μl)的PBS(Phosphate buffer saline，磷酸缓冲食盐水)。上述实验在各浓度下进行4系列。
在培养的第2、5、8日，通过细胞增殖试剂盒(Cell Proliferation Kit II(XTTRoche，Manheim，Germany))，用光学密度(O.D.optical density)450nm对活细胞进行测定(减去空白的650)。
另外，Cell Proliferation Kit II是测定由XTT标准混合液和线粒体脱氢酶活性而生成的甲臜(フオルマザン)色素，从而定量细胞生存率。其中，XTT是脱氢酶的基质，利用通过脱氢酶将XTT还原成甲臜的性质。因此，甲臜量与活细胞数相对应。
<实验结果>
如果使用活性发泡体，不管各人前列腺癌细胞是否有荷尔蒙依存性，在使用活性发泡体的组中即使SB浓度低(1mM)，与没有使用活性发泡体的高浓度(3mM)SB或更高的组相比，其有意义地抑制了前列腺癌细胞的增殖(图8～10)。即，活性发泡体与SB共同作用，明确地抑制了人前列腺癌细胞的增殖。
<考察>
由上述实验可以得出如下结论。根据图8～10，通过同时使用活性发泡体与HDACI，活性发泡体能够促进HDACI的抑制人前列腺癌细胞的增殖效果。从原理上看，可以认为该方法是对所有癌都有效的治疗法。另外，SB本来是人体内存在于肠管内的物质，是不发生过敏反应等的物质。所以，在本实验中，在被证明有效性的1mM浓度下，对于生物体的毒性非常少，没有过敏等副作用。
另外，过剩的HDAC与染色质重塑因子(chromatin remodeling factor)等共同作用，使胞嘧啶(cytosine)甲基化，在抑制癌细胞的增殖方面起作用。
工业上的可利用性本活性发泡体，在给与药物时，如果使其与人体直接或者间接接触来使用，可以提高药物制剂的效果。另外，即使是如果大量使用就有副作用的药物制剂，只要与本活性发泡体并用，则少量即可，所以可以抑制副作用。


本发明提供一种活性发泡体，其特征为其是由含有锆化合物以及/或者锗化合物的天然或者合成橡胶或者合成树脂制成的，具有独立气泡结构，在给与药物时，使其与人体直接或者间接接触来使用。通过使本活性发泡体与人体直接或者间接接触，能够促进血液循环、改善体质、促进疾病的治愈。而且没有副作用。