专利名称：一种固定化酶法连续转化生产γ-氨基丁酸的方法Y-氨基丁酸是一种具有很高生理活性的天然氨基酸，广泛分布于动植物中。是目前研究较为深入的一种重要的抑制性神经递质，参与多种代谢活动。根据目前的研究，发现Y-氨基丁酸的生理活性主要表现在以下几方面(1)镇静神经、抗焦虑；(2)降低血压；(3)治疗帕金森病、癫痫、老年痴呆等疾病；(4)降低血氨，以解决氨毒，从而增进肝机能；(5)提高脑活力；(6)促进乙醇代谢；(7)其他如防止皮肤老化、消除体臭、改善脂质代谢、防止动脉硬化高效减肥等功能。Y-氨基丁酸目前在医药中已有广泛的应用，同时作为 一种具有显著药理作用的功能性因子，其在食品工业中的应用也越来越受关注。由于Y -氨基丁酸在动植物原料中含量很低，很难直接从天然组织中大量提取得至IJ，目前Y-氨基丁酸的制备方法主要有化学合成法和生物合成法。但是，化学合成法得率较低，并且在生产工艺中使用危险溶剂，甚至是有毒溶剂，因此化学合成法制备的Y -氨基丁酸不宜用于食品添加剂使用。生物合成法主要是利用酶催化转化，在Y-氨基丁酸支路中合成。该方法生产成本低、无毒、安全环保，属于低碳、绿色生产方式。就酶源而言，可分为两种途径植物组织代谢和微生物发酵。其中，植物组织代谢主要利用内源酶转化制备Y-氨基丁酸，分为植物组织生长代谢和立体植物组织应激代谢两种方式。微生物发酵法主要是利用谷氨酸脱羧酶(GAD)生物催化谷氨酸脱羧生成Y-氨基丁酸。至今为止，被发现具有GAD活性并用来制备Y-氨基丁酸的微生物主要包括大肠杆菌E. coli、乳酸菌、酵母菌、红曲霉菌等，表I是目前微生物生产Y-氨基丁酸的情况。表I微生物生产Y -氨基丁酸的研究概况一种采用固定化酶连续转化生产γ-氨基丁酸的方法。采用构建的谷氨酸脱羧酶基因工程菌BL21(DE3)-pET35b-GAD，将其诱导表达后破碎细胞，收集上清液，对融合表达纤维素结合域(CBD)的谷氨酸脱羧酶的最适反应条件和固定化条件进行了研究。利用CBD标签对纤维素的特异性吸附性能，将纤维素载体加入到细胞裂解液中，实现谷氨酸脱羧酶的特异性吸附，并采用交联剂交联固定化谷氨酸脱羧酶。优化转化条件，最佳的催化反应条件为，pH5.5；反应时间2h；底物L-谷氨酸钠的浓度40g/L；固定化酶浓度8mL/L；辅酶磷酸吡哆醛浓度0.1mM。在最适反应条件下，重复连续转化10次，底物L-谷氨酸钠的转化率均达到93%以上。