专利名称：四种腹泻病病原菌纳米可视化基因芯片的制作方法DNA芯片的基本原理是在固相支持物上固定核酸并通过杂交过程来检测样品。此基本原理实际来自于20世纪70年代出现的Southern blot和Northern blot技术。80年代中期，国际上几个研究小组同时开发了杂交测序的技术。基本原理是在固相支持物上固定成百上千个8碱基长度的寡核苷酸片段，然后与待测序的DNA片段进行杂交。由于不同的寡核苷酸的碱基序列是相互覆盖的，通过计算机来分析杂交信号，便可以拼接出未知DNA的序列。Fodor等人1991年2月在Science杂志上发表论文,他们利用固相化学合成,光敏保护基团及光刻掩膜技术，在固相支持底物上高密度合成了多肽和寡核苷酸，并用合成的多肽在固相支持物上与抗体进行了亲和反应。随后，1991年9月Science杂志发表了一篇评论，介绍了 Fodor等人在I. 28cm2的面积上原位光合成65，000个点的工作，第一次提出了 DNA芯片(DNA chip)的概念。到1995年，Schena等人在Science杂志上发表论文，将45个拟南芥基因固定在一张玻片上，并行检测拟南芥植株不同组织及不同处理后45个基因表达的变化。此报导第一次将高精度机械手点样技术，荧光标记技术，双信道荧光扫描技术及数据分析软件结合在一起，可以说是DNA芯片技术在基因表达分析中第一次真正意义上的应用。随后，用于基因表达分析的DNA芯片技术发展迅速，在玻片上点样的密度越来越大。部分已经完成基因组测序的微生物的全基因组DNA芯片已经制备出来并应用于各项研究中如酿酒酵母、结合杆菌、大肠杆菌以及白色念珠菌的全基因组DNA芯片。随着人类基因组计划的完成和功能基因组学研究的进展，制作出人类全基因组DNA芯片将只是一个时间上的问题。现在用生物芯片技术分析的物种包括人、酵母、小鼠、大鼠、黑猩猩、大猩猩、果蝇、线虫、玉米、水稻、棉花、细菌和病毒等。目前有超过3000篇的论文与芯片分析有关。这些论文从不同的角度表明了微数组技术的多样性、不同研究单位的研究侧重点以及此技术领域商业化产品的多样性。
以下结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步描述。图I为本实用新型的实施例图。主要组件符号说明I......芯片 2......微孔为了更充分理解本实用新型的技术内容，下面结合具体实施例对本实用新型的技 术方案进一步介绍和说明。本实用新型四种腹泻病病源菌纳米可视化基因芯片，系由聚苯乙烯材料制成之三孔芯片，并形成数组模式,芯片上取霍乱弧菌、痢疾杆菌、出血性大肠杆菌0157、空肠弯曲菌之DNA为探针。而微孔板芯片每孔芯片的探针排列皆为4X4的矩阵，本实用新型四种腹泻病病源菌纳米可视化基因芯片，基因芯片技术平台一般包括5个部分芯片的基质材料、把DNA固着到芯片上的装置、核酸杂交控制系统、读取杂交信号的光学扫描系统以及读取和分析数据的计算机软件工具，由于不同的文献对探针(probe)和靶标(target)有不同的定义，这里我们的定义是固定在基质载体上的DNA被称为探针，而来自生物样品的核酸被称为靶标。参考目前已发表的相关文献，我们从NCBI上下载所需微生物的GenBank文件，利用软件primer premier5在保守序列上设计相关病毒的特异性引物及探针。在引物的设计过程中，尽可能使不同引物对之间的退火温度趋于一致(4对引物退火温度均在49-54°C之间)，以利于后期的多重PCR过程。设计的引物和探针序列见表I.