专利名称：一种连翘子软胶囊的质量控制方法在制药技术上，药品生产要达到安全有效、质量稳性、可控的基本要求。完善的质量控制标准能够保证药品的可靠性和均一性。本发明药物是ー种从连翘子中提取得到的，具有治疗感冒等疾病的中药软胶囊制剂。木犀科植物连翅forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl为中医常用的清热解毒药,历来被视为疮家要药，其性微寒，味苦，具有清热解毒、消肿散结之功能。连翘是中国临床常 用传统中药之一，现代药理研究表明连翘有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用，常用于治疗急性风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结结核、尿路感染等症，为等中药制剂的主要原料。市场上有关连翘的中药制剂大多是复方成药，如双黄连ロ服液、双黄连粉针剂、清热解毒ロ服液、连草解热ロ服液、银翘解毒冲剂等。中国药典2005年版一部收载的连翘药材分为青翘和老翘两种，秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”。青翘，基本能保留连翘子，而老翘中的连翘子往往被当作杂质而除去。中医临床大多是“老翘”，除非处方特别写明“青翘”。因此，大量的连翘子资源被浪费。近年来有研究发现，连翘子中的挥发油含量较高，挥发油具有很好的抗菌效果，在体外对金黄色葡萄球菌也有明显的抗菌作用。但是目前市场上未发现连翘子的相关制剂。另外，发明人在长期的药学研究中发现，连翘子中除了挥发油外，还有其他活性成分也能够发挥药物活性成分作用。发明人意外地发现了ー种充分获得连翘子有效成份的软胶囊制剂及制备方法，同时创造性地提出了该制剂的质量控制方法。
本发明的目的是提供一种连翘子软胶囊的质量控制方法，通过此方法可以很好地控制该连翘子软胶囊的质量，为该连翘子软胶囊建立了质量标准。本发明所提到的连翘子软胶囊是通过如下方法制备而成的(I)取连翘子，加水8倍量(V/W)，水蒸气蒸馏提取挥发性物质，重复3次，时间分别为3小吋、2小吋、I小时，提取完毕后，合并挥发性物质，密闭保存，得提取物A ；(2)将(I)中水提液合并，滤过，滤液在60°C时减压浓缩至相对密度I. 05 I. 10，放冷，加入こ醇使含醇量为80%，放置过夜，取上清液减压回收こ醇，至浓缩液浓度为每ml含I. Og生药，滤过，滤液上AB-8大孔吸附树脂，控制流速为O. 5 I. 5BV/h,先用5BV的水进行除杂，然后用2BV80 %こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮，60-70°C真空干燥，粉碎，即得提取物B ；(3)将提取物A和提取物B合井，即得活性成分C ；(4)将分散剂(大豆油、麻油、菜籽油、红花油、蓖麻油、橄榄油、棉籽油、玉米油、紫苏油、花生油中一种或组合)与助悬剂(蜂蜡、单硬脂酸甘油酷、可可脂、氢化蓖麻油、氢化植物油、单硬脂酸铝中的一种或组合)加热熔融，搅拌均匀后，冷却至60°C以下，边搅拌边加入C，混合物过胶体磨或均质机，使混合物过100-200目筛网，备用；活性成分C和囊内辅料(分散剂和助悬剂)重量比为20-50%和50-80%。(5)称取明胶、水、增塑剂、色素，制备囊皮；(6)压制软胶囊，每粒65Omg。为了有效控制所述的连翘子软胶囊中活性成份的质量，本发明人提出了如下所述质量控制方法的技术方案，为了方便阅读，进行适当编号。所述连翘子软胶囊的质量控制方法，包括如下鉴别方法中的ー种或全部性状鉴另O、薄层色谱鉴别、对内容物的ー种或几种成分进行含量測定。 一、所述连翘子软胶囊的性状鉴别如下软胶囊，内容物为棕褐色混悬液，味辛、微苦，具特殊香气。ニ、所述连翘子软胶囊的薄层色谱鉴别以连翘酯苷为对照品，步骤如下按照中国药典2005年版一部附录VI B的薄层色谱法试验。I. 一般地，薄层色谱鉴别步骤如下对照品溶液配制取连翘酯苷对照品，用甲醇配成溶液；供试品溶液配制取软胶囊内容物加入正己烷，超声2分钟，滤过，弃去正己烷液，残渣挥干，加入甲醇，溶解，即得；薄层色谱鉴别方法吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-6 4-6 O. 4-0. 6的丙酮-こ酸こ酷-水为展开剂展开,取出晾干,用硫酸こ醇溶液显色后，加热至斑点显色清晰，置日光下检视，供试品色谱在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。2.优选地，薄层色谱鉴别步骤如下对照品溶液配制取连翘酯苷对照品，用甲醇配成Iml含2. 8-3. 5mg中任ー剂量的对照品溶液；供试品溶液配制取软胶囊内容物I. 0-1. 5g中任一剂量于50ml的烧杯中，加入正己烷10ml，超声2分钟(250W，40HZ)，滤过，弃去正己烷液，残渣挥干，加入IOml甲醇，溶解，即得；薄层色谱鉴别方法吸取上述两种溶液，取10-30 μ I任一点样量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5 5 O. 5的丙酮-こ酸こ酷-水为展开剂展开，取出晾干，用10%的硫酸こ醇溶液显色后，105°C加热至斑点显色清晰，置日光下检视，供试品色谱在与对照品色谱相应位置上显相同顔色的斑点。3.更优选地，薄层色谱鉴别步骤如下对照品溶液配制取连翘酯苷对照品，用甲醇配成Iml含3. 2Img的对照品溶液；供试品溶液配制取软胶囊内容物I. 3g于50ml的烧杯中，加入正己烷10ml，超声2分钟(250W，40HZ)，滤过，弃去正己烷液，残渣挥干，加入IOml甲醇，溶解，即得；阴性样品溶液配制按上述连翘子软胶囊的制备方法，不加提取物B，按供试品溶液制备方法处理，即得；薄层色谱鉴别方法吸取上述三种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5 : 5 : O. 5的丙酮-乙酸乙酯-水为展开剂展开，取出晾干，用10%的硫酸乙醇溶液显色后，105°C加热至斑点显色清晰，置日光下检视，供试品色谱在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。三、所述连翘子软胶囊的含量测定方法，是测定连翘酯苷的含量和α、β -菔烯的含量；其中连翘酯苷含量采用高效液相色谱法测定，α、β_菔烯采用气相色谱法进行测定。按照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法、中国药典2005年版一部附录VI E气相色谱法测定。I. 一般地，连翘酯苷的含量和α、β -菔烯的含量是采用如下方法
(I)连翘酯苷含量测定色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-O. 2%冰醋酸为流动相；检测波长为290nm ;流速Iml/分钟；理论板数按连翘酯苷峰计算应不低于 5000。对照品溶液的制备称取连翘酯苷对照品，加甲醇配制成溶液，即得。供试品溶液的制备取软胶囊内容物，加入正己烷，超声，滤过，弃去正己烷液，残渣挥干，加入甲醇，超声，过滤，即得。测定法吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。 (2) α -菔烯，β -菔烯含量测定测定条件及系统适用性试验采用HP-INN0WAX毛细管色谱柱；检测器为FID ；以分流比40 I的分流进样；进样I μ I ;进样口温度240°C ;检测器温度300°C ;载气氮气；尾吹气流速25ml/分钟；程序升温条件柱温初始温度为60°C，维持11分钟，以50°C /分钟的升温速率升温至200°C，保持5分钟；理论塔板数以β -菔烯峰计应不低于8000。对照品溶液的制备称取α -菔烯，β -菔烯对照品，加无水乙醇制成混合溶液，即得;供试品溶液的制备将软胶囊内容物加入正己烷，超声，摇匀，过滤，即得。测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入气相色谱仪，测定，即得。2.优选地，连翘酯苷的含量和α、β -菔烯的含量是采用如下方法(I)连翘酯苷含量测定色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以32 68的甲醇-O. 2%冰醋酸为流动相；检测波长为290nm ;流速Iml/分钟；理论板数按连翘酯苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取连翘酯苷对照品，加50%甲醇配制成每Iml含35-45 μ g任一剂量的溶液，即得。供试品溶液的制备取软胶囊内容物90mg，精密称定，置于50ml具塞锥形瓶，精密加入正己烧5ml,超声2分钟,滤过,弃去正己烧液，残洛挥干，精密加入50%甲醇50ml,称定重量，超声10分钟，补足失重，O. 22 μ m微孔滤膜过滤，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
(2) α -菔烯，β -菔烯含量测定测定条件及系统适用性试验采用HP-INN0WAX毛细管色谱柱；检测器为FID ；以分流比40 I的分流进样；进样I μ I ;进样口温度240°C ;检测器温度300°C ;载气氮气；尾吹气流速25ml/分钟；程序升温条件柱温初始温度为60°C，维持11分钟，以50°C /分钟的升温速率升温至200°C，保持5分钟；理论塔板数以β -菔烯峰计应不低于8000。对照品溶液的制备称取α -菔烯对照品，β -菔烯对照品，精密称定分别置于两个IOml量瓶中，加无水乙醇制成含α-菔烯10-15mg/ml任一浓度的溶液和含β -菔烯20-30mg/ml任一浓度的溶液，摇匀得储备液；分别精密量取上述储备液Iml置于同一 IOml的量瓶中，用无水乙醇定容后，摇匀，即得；供试品溶液的制备将软胶囊内容物混匀后取3g，精密称定于具50ml的具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20ml，超声5分钟，摇匀，过滤，即得。测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各I μ I注入气相色谱仪，测定，即得。 3.更优选地，连翘酯苷的含量和α、β -菔烯的含量是采用如下方法(I)连翘酯苷含量测定色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以32 68的甲醇-O. 2%冰醋酸为流动相；检测波长为290nm ;流速Iml/分钟；理论板数按连翘酯苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取连翘酯苷对照品，加50%甲醇配制成每Iml含40. 56 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取软胶囊内容物90mg，精密称定，置于50ml具塞锥形瓶，精密加入正己烷5ml，超声2分钟(250W，40Hz)，滤过，弃去正己烷液，残渣挥干，精密加入50 %甲醇50ml，称定重量，超声10分钟(250W，40Hz)，补足失重，O. 22 μ m微孔滤膜过滤，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。连翘酯苷含量测定方法考察对照品溶液的制备精密称取连翘酯苷对照品，加50%甲醇配制成每Iml含40. 56 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取软胶囊内容物90mg，精密称定，置于50ml具塞锥形瓶，精密加入正己烧5ml,超声2分钟,滤过,弃去正己烧液，残洛挥干，精密加入50%甲醇50ml,称定重量，超声10分钟，补足失重，O. 22 μ m微孔滤膜过滤，即得。阴性样品溶液配制按上述连翘子软胶囊的制备方法，不加提取物B，取75mg，精密称定，加50%甲醇溶液50ml，称定重量，超声10分钟(250W，40Hz)，补足失重，微孔滤膜(O. 22 μ m)过滤,即得。一、连翘酯苷方法考察I、波长选择、专属性及系统适用性考察取连翘酯苷对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液，以50%甲醇溶液为空白，分别在200 400nm进行扫描，结果显示，供试品溶液图谱与对照品图谱相似，其紫外扫描图谱表明二者在290±2nm处均有最大吸收，而阴性样品溶液图谱在相应位置没有吸收峰，说明可以用连翘酯苷为对照品，专属性良好。
系统适用性考察精密吸取对照品，(附图
2)与供试品(附图3)各10 μ I进样，记录图谱，结果表明连翘酯苷峰的分离度良好，理论塔板数为15000，符合含量测定要求。另取阴性供试品溶液进样，阴性供试品色谱图在连翘酯苷峰位处无相应峰出现，说明在此色谱条件下，含量测定方法的专属性良好。2、流动相的选择选用了测定有效部位的高效液相法并增加了少量水，测定了制剂供试品，试验结果表明，连翘酯苷色谱峰与相邻色谱峰有较好的峰形和分离度，故选择此方法进行测定，即选择的流动相为甲醇-O. 2%冰醋酸(32 68)。3、线性关系考察精密量取对照品溶液Iml分置于2ml、5ml、10ml、20ml、50ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇勻，制成浓度为 8. 112 μ g/ml、20. 28 μ g/ml、40. 56 μ g/ml、81. 12 μ g/ml、202. 8 μ g/ml和405. 6 μ g/ml的溶液。分别精密吸取上述溶液10 μ I注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，连翘酯苷对照品进样量为横坐标进行线性回归，计算得回归方程Y = 1181. 1Χ-4. 0143，相关系数r = I. 0000 ;表明连翘酯苷在O. 08112 4. 056 μ g范围内线性关系良好。测定结果见表I。表I线性关系考察结果


本发明涉及一种连翘子软胶囊的质量控制方法，具体包括鉴别方法和含量测定方法，属医药技术领域。其中鉴别方法有性状鉴别和薄层色谱鉴别；含量测定方法是对本发明软胶囊内容物中的连翘酯苷含量和α、β-蒎烯含量进行测定；其中连翘酯苷含量采用高效液相色谱法测定，α、β-蒎烯采用气相色谱法进行测定。本发明的实施结果能够对连翘子软胶囊产品的质量更好地控制。