专利名称：用于预防和治疗sars病毒的重组疫苗的制作方法 SARS是一种严重威胁人类健康，呈世界范围流行的新传染病。由于死亡率比较高，迄今仍无特效的治疗药物。因此，提供有效的控制方案，尤其是预防疫苗的开发显得尤为重要。这是目前国内外科学家研究攻关的重要内容之一。正因为它被公认是最经济，最有效，最安全和最方便的预防SARS的手段，由此引发了全球寻找SARS疫苗的研究。目前，公开报道关于研究SARS疫苗的方法很多，有灭活疫苗，减毒活疫苗，腺病毒为载体的基因工程疫苗等，但大多数科研机构选择研制的方向是灭活疫苗。本发明人经过对各种研制SARS疫苗的分析，筛选，借鉴其他疫苗的成功经验，研制了针对SARS病毒有保护作用的蛋白疫苗。
本发明涉及一种具有免疫原性的融合蛋白，包括来自于SARS病毒的S-蛋白或其功能片段，以及至少一种来自于SARS病毒的辅助肽片段。其中S-蛋白具有附图1所述的序列或与所述序列至少有80％同源性的蛋白质。本发明涉及还一种具有免疫原性的融合蛋白，包括来自于SARS病毒的S-蛋白或其功能片段，至少一种M抗原，以及至少一种来自于SARS病毒的辅助肽片段。其中S-蛋白具有附图1所述的序列或与所述序列至少有80％同源性的蛋白质。本发明还涉及一种编码所述融合蛋白的核苷酸分子。本发明还涉及含有编码所述融合蛋白的核苷酸分子的重组载体。本发明涉及含有上述重组载体的宿主细胞。
本发明涉及生产一种融合蛋白的方法，该方法包括将含有编码所述融合蛋白核酸分子的载体导入宿主细胞，将宿主细胞在合适的条件下培养，获得所述的融合蛋白。
用于生产所述的融合蛋白的宿主细胞可以是任何真核细胞系，例如CHO细胞或COS细胞。
本发明还涉及一种疫苗组合物，包括一种具有免疫原性的融合蛋白和药物学可接受的载体，佐剂或赋形剂，其中的融合蛋白包括来自于SARS病毒的S-蛋白或其功能片段，以及至少一种来自于SARS病毒的辅助肽片段。必要时，还可以含有至少一种M抗原。其中S-蛋白具有附图1所述的序列或与所述序列至少有80％同源性的蛋白质。
该疫苗组合物可以制成一种鼻腔喷雾剂，或者通过口服给药。
用于该组合物中的载体包括，但不限于大的，缓慢代谢的大分子，如蛋白质，多糖，聚乳酸，聚乙酸，聚合的氨基酸，或氨基酸共聚物。
用于该组合物中的赋形剂包括，但不限于水，盐水，甘油和乙醇，以及如增湿剂，乳化剂或pH缓冲剂。
发明的详细描述利用SARS病毒基因序列和蛋白空间结构设计原理，设计合成了SARS病毒表面刺突的多肽，即具有重要抗原决定族作用的E和S等多种蛋白质。
利用基因工程手段，构建和表达了SARS病毒的数十种蛋白质。将编码这些多肽的基因连接成嵌合基因，由合适的载体携带导入合适宿主，所述的宿主能够表达所述的融合蛋白。
研制了针对SARS病毒的混合肽疫苗。


图1显示了SARS病毒的S-蛋白质的结构。
图2显示了编码S-蛋白质的S-基因的结构。
图3显示各种不同毒株的蛋白质图谱的比较。

实施例一体外抗SARS病毒的实验研究实施例二动物体内免疫学研究将SARS部分S基因装入了腺病毒中，经过扩大，纯化和鉴定，注射入大白鼠，检测到抗SARS的抗体。
将混合肽注射到兔子，检测到诱导的IgG抗体阳性。动物体产生高水平的针对SARS病毒的特异性抗体，并且抗体水平可持续相当长的时间。
本发明的产品与现有的其他疫苗相比，克服了蛋白疫苗和基因工程疫苗各自的缺点。当疫苗注入肌体后，可最大限度地发挥其抗原作用，充分调动机体的免疫反应，并且疫苗蛋白处于保护状态，可防止消化降解，并且无毒，无害，无任何副作用。


本发明公开了一种具有免疫原性的融合蛋白，所述融合蛋白包括来自于SARS病毒的S－蛋白或其功能片段，以及至少一种来自于SARS病毒的辅助肽片段，必要时，还含有至少一种M抗原。本发明也公开了编码所述融合蛋白的核苷酸序列，或含有这些蛋白的药物。本发明还公开用于预防SARS的疫苗组合物，所述组合物包括所述的融合蛋白和药物学可接受的载体。在动物模型中，通过鼻腔给药能明显诱导SARS特异性抗体的产生。