专利名称：一种用于预防和治疗女性衰老性疾病的药物组合物及其制剂的制备方法 女性到18岁左右，发育成熟，随后随着年龄的增长，体内的自身雌激素分泌开始逐渐渐少，从而使女性的皮肤、生理逐渐成熟并开始走向衰老。到40岁左右进入绝经期时，雌激素分泌已明显减少，并导致一些器质性的病变，明显地为卵巢功能减退、骨质疏松、皮肤松弛、情绪波动等。为解决女性雌激素减少，人们首先自然想到的是补充雌激素，但是经过几十年的临床应用后发现补充雌激素虽能解决雌激素减少产生的问题，但是却又导致激素带来的另外一些问题，如癌症等。因此，寻找类雌激素物质成为一个重要的方向。类黄酮类的植物有效成分成了医药科学家的目标。异黄酮(isoflavonoid)是一大类物质，已从植物中分离鉴定出600多种异黄酮。其中大豆来源的异黄酮化合物较为常见。异黄酮的功能研究和临床疗效，涉及的生理功能较多，充分肯定了异黄酮的雌激素样作用、抗氧化功能、抗肿瘤作用、血管保护作用、对骨代谢的作用。大量的研究和临床已证实异黄酮可以防治骨质疏松症，减轻妇女更年期不适症及降低冠心病的发病率。美国FDA批准大豆异黄酮类功能食品进入美国市场，此后几年大豆异黄酮在美国迅速形成产业，在美国已有300多种相关产品，年销售额近20亿美元。在欧洲、日本、韩国等国家和地区，也已成为一种新型的保健食品。自1996年以来，到2004年，中国已批准的含大豆异黄酮的保健食品有35个产品，这些产品申报的功能主要集中在延缓衰老、美容上面。中国大豆、葛根资源十分丰富，研究开发异黄酮类产品具有十分显著的社会效益和经济效益。因此将异黄酮应用于保健食品中，在国外已很多，主要是用于延缓衰老、心脑血管疾病、骨质疏松等。但是与欧美国家相比，亚洲(特别是东南亚地区)人群尿液或血液中的异黄酮水平要高得多，同时与雌激素降低相关的疾病的发病率和严重程度都要低些。但是女性的综合体质和衰老并没有降低。
本发明的目的是针对体内异黄酮含量尚高，但是仍出现体质下降、衰老明显的女性人群提供一种用于预防和治疗女性衰老性疾病的药物组合物及其制剂的制备方法。本发明的目的是这样实现的用于预防和治疗女性衰老性疾病的药物组合物是由异黄酮、人参二醇型皂苷、升麻提取物、十八碳三烯酸组成功效成分共同组成，其配方中各功效成分组成比例为异黄酮 1.5％～30％人参二醇型皂苷 1.5％～22.1％升麻提取物 1.2％～17.9％十八碳三烯酸30％～95.8％。其中各有效物质分别为异黄酮大豆异黄酮、葛根异黄酮类植物异黄酮；人参二醇型皂苷是源自人参属植物的二醇型达玛烷型皂苷，如含Rb1为主要成分的人参或三七皂苷分离的有效部位产物，也可以是三七叶皂苷、或西洋参皂苷；升麻提取物是指由升麻提取的以含三萜皂苷(2～20％)为主要活性成分的提取物；十八碳三烯酸是指含十八个碳原子的三烯酸如γ-亚麻酸、α-亚麻酸和皮诺敛酸。制成的成品每次使用的剂量中含异黄酮5～100mg、人参二醇型皂苷5～74mg、升麻提取物4～60mg、十八碳三烯酸100～321mg。软胶囊的剂基质为油酸、亚油酸等单和/或多不饱和脂肪酸等植物食用或药用油中的一种或几种组成。药液里可以根据需要加入调香剂，如肉桂油。
产品可以制成软胶囊、液体胶囊、液体剂等可接受的制剂。
研究用传统中医理论复方来解决女性衰老和体质下降的问题。衰老是一种阳气衰退、同时体内毒物不断蓄积，并对人体产生毒害作用的过程。经研究发现毛莨科升麻属植物升麻Cimicifuga foetida L.具有很好的升举阳气、清热解毒功效，可以很好的针对衰老的病因和病症，来解决女性岁年龄增加而出现的体质下降、毒物蓄积的问题。人参二醇型物质则能从根本上刺激骨髓产生红细胞，解决女性广泛存在的贫血问题以及情绪波动问题。十八碳三烯酸酯，具有很好的营养保健功能，使人体尤其是女性必需的营养物质，俗称维生素F。其中的γ-亚麻酸(γ-Linolenic acid或Gamma-Linolenic acid简称GLA)，是人体必需的脂肪酸，也是人体合成对生命有重要意义的前列腺素的前体，对机体的抗病防衰老有着显著的积极效果，主要用作经前综合症、皮疹、消炎、心脑血管疾病、抗癌等。α-亚麻酸α-Linolenic acid是人体必需的脂肪酸。皮诺敛酸Pinolenic acid有较好的降血脂作用、保持皮肤水分、美白和释放快乐因子等作用。女性体质下降和衰老是密切相关的两种表象，原因在于雌激素分泌不足、自由基等体内毒物蓄积增多、贫血和阳气下降等综合原因诱发，解决办法只能是“综合问题综合解决”，即运用复方理论最为有效。本发明的药物组合物配方选异黄酮直接补充雌激素的不足，人参二醇型皂苷针对贫血问题，升麻提取物提升阳气，清热解毒，十八碳三烯酸酯补充营养必需物质，防治皮肤衰老。
本发明的药效所制成的各种产品稳定性好；产品可补充女性类雌激素，进而预防因雌激素下降导致的系列疾病；改善衰老症状，明显养护皮肤；抗氧化、清除体内自由基等毒物蓄积。

实施例1、复方异黄酮软胶囊处方(1000粒)大豆异黄酮5g三七人参二醇型皂苷(含Rb155％)5g升麻提取物20gα-亚麻酸 160gγ-亚麻酸 60g
亚油酸 160g油酸40g红色素 适量。
制备工艺在氮气保护下，将配方量的α-亚麻酸和γ-亚麻酸等液体油性物混合，加入大豆异黄酮和三七人参二醇型皂苷、升麻提取物，充分搅拌、溶解、过滤、脱气，送至填充机上方的罐内，待用；同时准备好软胶囊充填机上方保温明胶罐中的胶皮用的明胶溶液，待用；在30万级、21℃～25℃、RH％39～41％的条件下，开动旋转模压机压丸，把制成的软胶囊洗净，在[28±2]℃下干燥19-27小时，分装，包装即得复方异黄酮软胶囊450mg(粒内容物重)的红色软胶囊成品1000粒。
实施例2、复方异黄酮软胶囊处方(1000粒)葛根异黄酮 45g三七叶皂苷 25g升麻提取物 38gα-亚麻酸154gγ-亚麻酸140g亚油酸 60g油酸 50g明胶 适量甘油 适量苋菜红 适量亮黑 适量。
制备工艺同实施例1(略)。得512mg内容物的紫红色软胶囊成品1000粒。
实施例3、复方异黄酮软胶囊处方(1000粒)葛根异黄酮 100g西洋参皂苷 5g
升麻提取物 12gα-亚麻酸200gγ-亚麻酸10g亚油酸 100g油酸 100g明胶 适量甘油 适量食用钛白粉 适量。
制备工艺同实施例1(略)。得每粒含519mg内容物的白色软胶囊成品1000粒。
实施例4复方异黄酮液体胶囊处方(1000粒)葛根异黄酮 8g人参二醇型皂苷(含Rb180％)10g升麻提取物 6gα-亚麻酸 50gγ-亚麻酸 50g亚油酸 60g油酸 49g。
制备工艺在氮气保护下，将配方量的α-亚麻酸和γ-亚麻酸等液体油性物混合，加入葛根异黄酮和人参二醇型皂苷、升麻提取物，充分搅拌、溶解、过滤、脱气，送至胶囊机上方的罐内，待用；同时准备好绿色的液体胶囊，用液体胶囊机分装，即得绿色的复方异黄酮液体胶囊。
实施例5复方异黄酮脂肪乳口服液配方(1000支)大豆异黄酮10g三七人参二醇型皂苷(含Rb195％)9g升麻提取物(含三萜20％)48gγ-亚麻酸 40g
皮诺敛酸 160g亚油酸 60g油酸 9g甘油 210g大豆磷脂 100g。
制备工艺在100级的条件下，在氮气保护下，将大豆磷脂加入无盐水5000ml，再加入γ亚麻酸等油液、异黄酮、人参二醇型皂苷、升麻提取物，搅拌至均匀，加入甘油，补加无盐水至10000ml。于70～80℃用组织打碎机制得粗乳。将粗乳迅速冷却至20℃以下，再用两步高压乳匀机乳化，即得细分散的亚微乳(脂肪乳)。送入分装机，按每瓶10ml分装，扎盖、包装、检验、合格、的成品。可制得1000支10ml之规格的复方异黄酮脂肪乳口服液成品。
为清楚地说明本发明的可能组合，提供以上实施例，但绝不是为了限制本发明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。
产品药学研究及功效一、产品的稳定性实施例1、2、3、4、5五个样品在室温下避光保管，放置1、2、3、6、12个月，按时检查，每样品得外观基本不变，有效成分经检验也未发生变化。过氧化值不变。含量测定以紫外法测定异黄酮法测定。因此，初步认为各种产品及各种处方均可达到1年左右的保质期。
稳定性试验结果

结果表明该发明制备的样品，经过初步稳定性考察，产品质量基本稳定，可达一年以上。
1、产品可补充女性类雌激素，进而预防因雌激素下降导致的系列疾病(1)增加骨密度功能按照中华人民共和国卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》中增加骨密度功能检验方法进行检验。
实验药品实施例5配方所制得的样品乳液。灌胃给药，按25、50、100mg/kg.W给药。结果如下各组动物体重增长情况为中剂量组最好，模型组最差。低剂量组也优于对照组。
各组股骨钙潴留为高剂量组最好，模型组最差。低剂量组也优于对照组。
各组血清钙的测定结果为高剂量组最好，模型组最差。低剂量组也优于对照组。
综合试验得出，复方异黄酮有显著促进动物增重、提高钙表观消化吸收率、增加股骨钙潴留既提高血清钙浓度等作用，各项指标均优于碳酸钙对照组。
(2)改善更年期综合症年龄在42～55岁的进入更年期的自愿受试者35名，自愿接受实施例2样品，以每天早晚各1粒，连续服用60天，观察180天，进行改善更年期综合症的临床试验。结果更年期综合症中几个主要症状表现如下表

结果表明，复方异黄酮产品对更年期综合症的主要症状有明显的改善作用。
二、抗衰老、抗氧化、清除体内自由基等功效(一)降脂材料1.动物SD大鼠，体重180-230g，合格证号“云动管B04”。
2.药品与试剂复方异黄酮软胶囊 实施例1制得的样品 代号FYH胆固醇上海化学试剂分装，批号050517胆盐苏州东医用生化制品厂生产，批号050101丙基硫氧嘧啶片广州市桥制药厂生产，批号900523猪油市售非诺贝特片江苏泰兴制药厂生产，批号0508163.仪器Mooarch1000型全自动生化仪(美国产)方法1.高脂乳化剂制备将胆固醇、丙基硫氧嘧啶片研成粉末。按10％胆固醇、2％胆盐、1％丙基硫氧嘧啶、20％猪油量用蒸馏水配制成脂肪乳剂(W/V)。冰箱保存，用时放置热水浴中融化。
2.复方异黄酮软胶囊对大鼠高脂模型血清脂质的影响用上述SD大鼠40只，随机分为(1)正常对照组(2)模型对照组(3)FYH小剂量组(4)FYH大剂量组，每组10只大鼠，雌雄各半。分组后动物每天上午(1)组ig给蒸馏水，(2)(3)(4)组ig给等体积的高脂乳剂；下文(3)(4)组分别ig145mg/kg、290mg/kg，(1)(2)组给蒸馏水，连续20d。末次给药后，动物禁食16h，大鼠眼眶静脉丛取血，分离血清，用酶法测定血清胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、载脂蛋白A(APOA)、载脂蛋白B(APOB)。
结果见表。
FLQ

模型对照组与正常对照组比较△P＜0.05 △△P＜0.01给药组与模型组对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01结果由表可见，FYH高剂量组能显著降低高脂模型大鼠血中的TC(P＜0.05)，低剂组也有降低趋势；对两组TG降低显著(P＜0.01)；对HDL-C、LDL-C、APOA、APOB无显著影响。
(二)FYH对衰老动物模型的促智作用研究1材料1.1实验动物 ICR小鼠，体重20±2g，雌雄各半，由云南省天然药物药理重点实验室提供，动物合格证编号为滇实动证第00205号。
1.1.2药物及试剂1.1.2.1供试品 实施例2制得的样品(代号FYH)。临用时，用1％羧甲纤维素钠配制成5％、10％和20％的混悬液。
1.1.2.2对照品 脑康胶囊，临用时，用1％的羧甲纤维钠配制成5％的混悬液。
1.2实验方法和结果先将小鼠分为空白对照组和衰老模型组。衰老模型组小鼠每天眼球后注射D-半乳糖0.12mg/g，连续一月[1]。小鼠造型后根据需要再分若干小组。实验时小鼠随机作如下分组(1)空白对照组(动物不造型)，灌胃N.S。(2)造型对照组(动物造型)，灌胃N.S。(3)阳性药对照组，动物造型、灌胃脑康胶囊溶液(0.5g/kg，为临床二倍成人剂量)。(4)-(6)组为FYH低、中、高剂量组，分别灌胃5％、10％和20％的FYH溶液(用药量分别为临床2、5和10倍的成人剂量)。各组小鼠灌胃容积均为10ml/kg，每日一次，连续两周。于末次给药后作下列各项指标测定。
1.2.1FYH对衰老模型小鼠的学习和记忆维持的影响1.2.1.1跳台试验 仿文献方法[2]，先将小鼠放入跳台反应箱内适应环境3分钟，然后给反应箱底的铜栅通以36V交流电，动物受到电击后，往往会跳至平台，以避伤害性刺激。由于平台窄小，不便停留，迫使其再次或多次跳至铜栅，但受到电击后又会迅速地跳回平台，如此训练5分钟，记录每鼠受到电击的次数，以此作为该鼠的学习成绩。24小时后重作测试。试验时，先将小鼠放在平台上，记录小鼠第一次跳下平台的时间(潜伏期)和3分钟内因跳下平台而受电击的次数(即错误次数)，以此作为记忆维持的指标。结果见表1。
表1FLQ对衰老模型小鼠学习记忆的影响(跳台法)x±SD，n＝20

注与造型对照组比较*P＜0.05**P＜0.01。
与空白对照组比较△P＜0.05；△△P＜0.01以上结果显示，FYH显著延长小鼠跳台潜伏期，同时明显减少跳台的错误次数(P＜0.01)。
1.2.1.2矩型迷宫试验 取造型合格小鼠一批，按上述试验进行分组及给药(或N.S)。给药至第11天，禁食12小时后作迷宫取食训练。小鼠放入起步区，经矩形迷宫到达目标区。途中走错，帮助其纠正。达目标区后让其进食5分钟。每天如此练习10次，连续三天。第四天(即给药的第十四天)正式实验。各组选取灵活性较一致的小鼠20只，记录小鼠从起步区到达目标区的时间以及中途走错的次数[3]。连续作两次，两次数据合并取平均值作为小鼠的学习成绩。动物继续给药，一周后重复上述试验，所得数据即表示记忆的维持，结果见表2表2FYH对衰老模型小鼠学习记忆的改善作用(迷宫法)x±SD n＝20

注与造型对照组比较*P＜0.05**P＜0.01。
与空白对照组比较△P＜0.05；△△P＜0.01以上结果显示，FYH明显提高衰老模型小鼠走迷宫的学习成绩，减少记忆维持期走迷宫发生的错误次数，即增强小鼠对记忆的保持效应。
1.2.2FYH对衰老模型小鼠血清MDA和SOD含量以及脑组织内单胺类神经递质含量的影响取小鼠一批，分组及给药剂量和方法同上述1.2.1实验。但给药(或N.S)时间为两个疗程(28天)，于末次给药后一小时从股动脉取血并取小鼠全脑。按南京建成生物工程研究所提供的测试盒所述方法分别测定各组小鼠血清中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量[4]。用萤光分光光度法测定小鼠脑组织中单胺类神经递质的含量。操作方法及结果如下
血清丙二醛(MDA)的含量测定，按下表操作

混匀(摇动几下试管架)

旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，刺一小孔，于95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，然后离心(4000rpm)10分钟，取上清液，532nm处1cm光径，蒸馏水调零比色，测各管吸收光度值，再按下列计算血清中MDA的含量

血清超氧化物歧化酶(SOD)的活力测定，按下表操作

用旋涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40分钟

混匀，10分钟后倒入1cm光径比色杯中，蒸馏水调零，于波长550nm处比色，按下式计算SOD活力(nu/ml)

结果见表3
表3FYH对小鼠血浆MDA和SOD的影响x±SD

注与造型对照组比较*P＜0.05**P＜0.01。
与空白对照组比较△P＜0.05；△△P＜0.01以上结果显示FYH能明显减少血浆脂质过氧化产物MDA的含量和提高血浆超氧化物歧化酶(SOD)的活性。
三、改善皮肤衰老症状具有皮肤易干燥、出现眼角皱纹、老年斑、冬季皮肤瘙痒的45～56岁女性自愿受试者45例，口服本发明产品(实施例3所得的白色软胶囊)，从2005年10月到2005年12月内，连续2个月后，经回访受试者，统计后结果如下

结果表明，本发明的药物组合物对皮肤美容有明显的作用，能较快增加皮肤的水分和弹性，改善皮肤物理外观。同时观察到使用者的精神状况明显改善。


本发明涉及一种用于预防和治疗女性衰老性疾病的药物组合物及其制剂的制备方法，由异黄酮、人参二醇型皂苷、升麻提取物、十八碳三烯酸组成。该制备方法制成的产品稳定性好；可补充女性类雌激素，进而预防因雌激素下降导致的系列疾病；可改善衰老症状，明显养护皮肤；抗氧化、清除体内自由基等毒物蓄积。