一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物的制作方法[0002]醛糖还原酶存在于人体神经、红细胞、晶状体、视网膜等组织器官中，在多元醇通路中催化血液中的葡萄糖生成山梨醇。山梨醇本身由于极性强不易通过细胞膜，在细胞内会形成蓄积，使细胞膜的通透性发生改变，并使细胞中Na+-K+-ATP酶活性下降，造成肌醇丧失，导致细胞代谢与功能的损害。醛糖还原酶是多元醇通路的关键限速酶。当血糖浓度维持在正常生理水平时，它并不激活，它对葡萄糖的亲和力较低，此时葡萄糖很少转化为山梨醇。在高血糖状况下(如糖尿病)，己糖激酶被饱和，这时醛糖还原酶激活，促使体内的葡萄糖转化为山梨醇。[0003]山梨醇的增多使得果糖也随之增多，果糖的聚集继而抑制山梨醇脱氢酶的活性，使山梨醇分解减少。以上两方面的作用使山梨醇在组织中大量堆积，它作为一种极性很强的化合物，不能自由出入细胞，造成细胞内的高渗状态，从而造成细胞的渗透性水肿，同时细胞内山梨醇大量蓄积也可使Na+、K+-ATP酶活性下降，细胞中肌醇流失，从而导致细胞代谢与功能的损害，进而出现糖尿病并发症等器官病变。[0004]由于眼睛和神经细胞等组织内醛糖还原酶的含量较高，糖尿病病人体内高血糖的环境使这一通路很容易 被打开，造成对这些组织的病理损害，如糖尿病、白内障、神经病变、肾脏病变、视网膜病变、动脉粥样硬化等糖尿病并发症。[0005]临床需要能够有效调控血糖浓度，并能改善糖尿病眼睛和神经细胞慢性并发症的安全药物。
[0006]铁皮石斛(PendrobiumofficinaleKiMuraetMigo’)为兰科(Prchidaceaes)石斛属多年生草本植物的新鲜或干燥茎。其味甘，性微寒，归胃、肾经，具有养阴清热、益胃生津的功效，用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。《神农本草经》中记载:石斛“主伤中，除痹，下气，补五脏，虚痨羸瘦，强阴，久服厚肠胃”。李时珍在《本草纲目》中评价铁皮石斛“除痹，下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精，久服，厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，益智除惊，轻身延年。”但一直以来，铁皮石斛的药用配伍不甚明确，常规的中药材提取制备方法对石斛的药用价值有较大破坏或遗失。[0007]桑叶是卫生部公布的药食同源物品，充分、合理、高效的利用药食同源物质，可以防病治病，改善患者生活质量。
[0008]本发明的目的在于提供含有醛糖酶抑制剂的组合物，用于糖尿病患者控制血糖、同时延缓糖尿病慢性并发症的进程。
[0009]本发明全部选用天然中草药制成适当的药物；还可以制成食品、保健食品、食品补充剂、或饮料。
[0010]本发明提供一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物，由有效成分和药学上可接受的载体组成，其特征在于:所述的有效成分是来自于下列原料制成的:至少一种醛糖酶还原抑制剂与至少一种α-糖苷酶抑制剂，所述组合物制剂α-糖苷酶抑制剂选自桑叶提取物、桑枝提取物或桑白皮提取物或荷叶提取物一种或两种以上，所述组合物制剂醛糖还原酶抑制剂选自石斛、或石斛提取物或桑寄生、或槲寄生、或槐米、或知母一种或两种以上。
[0011]所述的桑叶提取物中，桑叶提取物的桑叶总生物碱含量为15% — 35%、桑叶多糖含量为5%-25% ;石斛提取物中，石斛提取物是药材洗净，用不超过低温50°C的水、或乙醇提取；不超过70°C低温浓缩制成的。
[0012]优选的所述的桑叶、石斛提取物提取物中，石斛提取物是通过药材洗净，用不超过低温50 V的水、醇提取；滤过、冻干固化而成的。[0013]本发明特别提供该组合物在制备治疗糖尿病视网膜病中的应用。
[0014]本发明特别提供该组合物在制备治疗糖尿病老年痴呆症中的应用。
[0015]本发明并提供该组合物在制备治疗糖尿病患者肾小管转分化相关疾病的应用。
[0016]本发明特别提供该组合物在制备治疗糖尿病患者肾脏间质成纤维细胞活化相关疾病的应用。
[0017]本发明组合物技术方案以石斛为君药，桑叶为臣药。君药性味甘寒入胃生津；臣药性味甘平，入肺经，疏散肺热而润燥；使肺金清肃，则金能生水，有利于口干口渴证的改善。二药合用，石斛滋胃生津、桑叶润肺燥、清肺热。二药相合，作用互济互补达到共同改善消渴胃阴耗伤、肺燥的特殊病机，二药配伍作用难得的协同性及作用的完备性。
[0018]本发明同时提供了基于α-糖苷酶抑制作用与醛糖还原酶抑制作用双重作用的组合物，有效的改善了高血糖所带来的引起人脑血管动脉粥样硬化导致高血压、高血脂，严重者发生心肌梗塞、脑梗塞等病理进程，从而防治糖尿病慢性并发症。
[0019]本发明的技术效果:
实验例:
桑叶-石斛提取物对糖尿病大鼠肾醛糖还原酶活性的影响
方法:用桑叶-石斛提取物和醒糖还原酶抑制剂螺旋已内酰脲(sorbinil)对糖尿病Wistar大鼠模型进行治疗，并观察肾组织肾醛糖还原酶(AR)活性、尿蛋白和Na+2K+2ATP酶活性的变化。
[0020]结果:糖尿病鼠模型组其肾醛糖还原酶活性显著高于正常鼠组(P〈0.01)，使用螺旋已内酰脲(sorbinil)、桑叶-石斛提取物后醛糖还原酶活性明显下降(P〈0.01))，与正常对照组相比较无显著性差异(P>0.05)。治疗8周末，两个治疗组尿蛋白水平与4周末相当，但糖尿病模型组尿蛋白明显升高，远高于两个治疗组(P〈0.01))，治疗后两组间无明显差异(P>0.05)。用sorbinil和桑叶-石斛提取物治疗后，Na+2K+2ATP酶活性显著升高(与模型组相比P〈0.05))。结论:桑叶-石斛提取物可通过抑制糖尿病大鼠肾脏组织醛糖还原酶活性而发挥其防治效用。
[0021]1、实验动物及分组
32只雄性Wistar大鼠随机分出8只为正常对照组(以下称正常组)；另24只用四氧喃唳(100 mg/ kg)诱发糖尿病，血糖值>11.0 mmol/ L，随机分为糖尿病模型组、sorbinil治疗组、桑叶-石斛提取物治疗组。
[0022]sorbinil 用法为 IOmg.kg-1/ 天;
桑叶-石斛提取物由桑叶-石斛等中药组成(锦州医学院新药开发中心制备)，每日灌服提取物混悬溶液10ml/kg，每毫升溶液中含生药0.5g。
[0023]2、实验方法
实验开始第4、8周各测定血糖和尿蛋白I次，第16周时将大鼠断头处死，取肾脏剔除附着物，捣碎取匀浆，供测定AR活性用。
[0024]肾醛糖还原酶活性测定参照Maragoudakis法测定；即记录NADPH在340nm处吸收光值下降IOU来表示酶活性。
[0025]其中使用两种反应体系，反应体系I包括67mmol/L、pH6.2的Na-K磷酸缓冲液，10mmol/L的DL-甘油醛，5mmol/L的2-巯基乙醇，0.lmmol/L的NADPH和酶适量；实验杯包括全部试剂，对照杯以双蒸水代替底物DL2甘油醛。
[0026]反应体系II以0.lmmol/L的NADH代替NADPH，其余试剂同反应体系I。
[0027]测定组织匀浆酶活性，同时测定蛋白含量，一单位酶活性规定为Imin产生I μ moINADP+ (或NAD+)的酶量，各组织酶活性用比活性进行比较，比活性=酶单位/mg蛋白。
[0028]3、Na+2K+2ATP 酶活性测定:
取少量肾皮质和髓质，称重后用组织匀浆缓冲液(含蔗糖0.2mmol/L、TriS2HC10.02mmol/L、pH7.40)，组织重量与组织匀浆缓冲液比为1: 40，在玻璃匀浆器中制备匀浆，直接用粗制肾组织匀浆加于酶反应管中(总量1.0ml)，反应液中各化合物浓度为:NaC1100、Mg2C122.5、KCL10、EDTA2.0、ATPNa21.0mmoI/L 或哇巴因 0.2mmol/L，37°C水浴中反应30min，速加无机磷显色剂2.5ml (含0.02%孔雀绿、0.55%钥酸铵和0.1%TWEEN220)，再加24%柠檬酸钠0.2ml,室温反应30min，用波长660nm比色测光密度，计算无机盐含量，Na+2K+2ATP酶活性单位以每小时每克组织蛋白(g_lpro)产生的无机磷(Pi)含量(mmol)来表示，即mmolPi.g-lpr0.h_l。每次作标准曲线，各反应管均作复管。
[0029]统计学方法计量资料值以x±s表示，各配伍组样本均数比较采用方差分析。
[0030]4、结果:
体重、血糖变化治疗开始糖尿病鼠体重与正常鼠相当，治疗8周结束时，糖尿病各组的体重明显低于正常组，用2种药物治疗血糖无变化，糖尿病各组间体重无明显差
巳
[0031]肾脏AR活性:
分别以还原型辅酶II (NADPH)和还原型辅酶I (NADH)测定肾脏的AR活性，结果见表1。
[0032]糖尿病鼠模型组其AR活性显著高于正常组(P < 0.01)，使用sorbinil、桑叶-石斛提取物后AR活性明显下降，与模型组相比，P值均〈0.01 ;虽然各治疗组AR活性仍高于正常组 ，但与正常组相比较无显著性差异(P > 0.05)。
[0033]表1:各组肾脏醛糖还原酶AR活性比较