专利名称：一种用于治疗心脑血管疾病的胶囊及其制备方法和应用的制作方法 三七是五加科多年生草本植物，含有多种植物皂苷，这些皂苷具有扩张血管，抑制血小板聚集等作用。以三七提取物为主要原料制得的药物在临床上具有活血祛瘀，增加脑动脉及冠状动脉血流量，降血脂，改善微循环的功能，可用于治疗心脑血管系统疾病，中风偏瘫，瘀血阻络症以及脑栓塞疾病。传统的三七总皂苷胶囊的制备工艺为取三七根，清洗，浸润，切片，再投入提取罐中，加水煎煮提取两次，合并提取液，浓缩，加乙醇处理，过滤，加收乙醇，浓缩得到的稠膏干燥，粉碎，灌装即得。该工艺存在以下缺陷1、浸润过程中有效成份有一定损失；2、切片时有个别片厚度较大，使得有效成份提取不完全；3、用水来提取，受热温度高，时间长，有效成份会受热分解，同时使提取物性状加深；4、使用常压加收乙醇，有效成份易受热分解。
(一)要解决的技术问题本发明的目的是提供一种用于治疗心脑血管疾病的胶囊。本发明的另一目的是提供该胶囊的制备方法。本发明的又一目的是提供具有本发明所述成分配比的三七总皂苷在制备治疗心脑血管系统疾病，中风偏瘫，瘀血阻络症，脑栓塞疾病的药物中的应用。
(二)技术方案本发明提供了一种用于治疗心脑血管疾病的胶囊，其特征在于该胶囊中的有效成分三七总皂苷含有如下配比的成分人参皂苷Rg110.0～80.0％，人参皂苷Rb110.0～87.0％，三七皂苷R12.0～75.0％。
其所含成分中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的总量为40.0～99.9％。
本发明所述的用于治疗心脑血管疾病的胶囊的制备方法，它包括以下步骤(1)取三七主根粉碎，加入乙醇，密封，室温下浸泡；(2)用乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至5.0～8.0，静置；(3)过滤，减压回收乙醇，浓缩得到稠膏；(4)将浓缩得到的稠膏干燥，粉碎，加入辅料，混合，填充胶囊，得到成品。
其中所述的步骤(1)中浸泡用的乙醇的浓度为50～90％，浸泡时间为12～48小时。
其中所述的步骤(2)中渗漉用的乙醇的浓度为50～95％，静置时间为12～48小时。
其中所述的步骤(3)中所得稠膏的相对密度为1.00～1.30。
其中所述的步骤(4)中干燥温度为40～90℃，粉碎粒度为80～120目，稠膏中的三七总皂苷与辅料的用量比按重量份计为40～120∶30～100。
其中所述的步骤(4)中辅料选自淀粉、滑石粉中的一种或两种。
本发明所述的制备方法，所用的仪器设备均为本领域常用的设备，其中渗漉在渗漉罐中进行。
具有本发明所述成分配比的三七总皂苷在制备治疗心脑血管系统疾病、中风偏瘫、瘀血阻络症、脑栓塞疾病的药物中的应用。
通过高效液相色谱检测本发明所述胶囊所含有效成分的方法，其特征在于以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，检测波长为203nm，柱温为40℃。
本发明所述的胶囊的规格为每粒装0.18g，其中含三七总皂苷100mg。
本发明所述的胶囊的服用方法为口服，一次1粒，一日3次。
(三)有益效果本发明所述的胶囊的制备方法与现有技术相比，具有如下优点1、使用乙醇作为提取溶剂，增加了提取收率，提高了有效成份的纯度，大大减少了提取物中蛋白质等杂质的含量；2、采用渗漉法提取，实现了在不受热的条件下进行提取操作，避免了有效成份受热分解，不仅如此，渗漉法还增加了浓度差，从而大大提高药品收率；3、调pH值后再负压加收乙醇，能减少有效成份的分解，进一步提高收率，并可降低能耗；4、粉碎成粉末后加入辅料分装，保证了本品崩解时限符合规定，提高了药品的吸收速度，且辅料为淀粉和滑石粉，对有效成份无配伍影响，保证了药品疗效不受影响。

以下实施例用于更好地理解本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 本发明所述的胶囊的制备取三七主根500kg，用锷式破碎机PSJB-125粉碎，加入50％的乙醇2500kg，密封，室温下浸泡12小时。然后装入渗漉罐内，用50％的乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至5.0，静置12小时。用板框过滤机CRBF-400X400过滤，并在乙醇回收塔JH1200中减压回收乙醇。然后在单效外循环蒸发器DN-1000中浓缩滤液，直至相对密度为1.15，得到稠膏。在40℃下真空干燥稠膏，并粉碎至80目，取80g粉末，加入淀粉58g，滑石粉2g，混合均匀，用全自动硬胶囊填充机NJP-1200D装胶囊，得到1000粒成品。
本实施例所得胶囊中各有效成分含量为人参皂苷Rg110.0％，人参皂苷Rb187.0％，三七皂苷R12.0％，这些成分的总量为99.0％。
实施例2 本发明所述的胶囊的制备取三七主根500kg，用锷式破碎机PSJB-125粉碎，加入60％的乙醇2500kg，密封，室温下浸泡48小时。然后装入渗漉罐内，用80％的乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至7.5，静置24小时。用板框过滤机CRBF-400X400过滤，并在乙醇回收塔JH1200中减压回收乙醇。然后，在单效外循环蒸发器DN-1000中浓缩滤液，直至相对密度为1.15，得到稠膏。在90℃下干燥稠膏，并粉碎至100目，取100g粉末，加入淀粉76g，滑石粉4g，混合均匀，用全自动硬胶囊填充机NJP-1200D装胶囊，得到1000粒成品。
本实施例所得胶囊中各有效成分含量为人参皂苷Rg125.5％，人参皂苷Rb136.0％，三七皂苷R16.0％，这些成分的总量为67.5％。
实施例3 本发明所述的胶囊的制备取三七主根500kg，用锷式破碎机PSJB-125粉碎，加入70％的乙醇2500kg，密封，室温下浸泡24小时。然后装入渗漉罐内，用70％的乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至6.5，静置48小时。用板框过滤机CRBF-400X400过滤，并在乙醇回收塔JH1200中减压回收乙醇。然后在单效外循环蒸发器DN-1000中浓缩滤液，直至相对密度为1.00，得到稠膏。在65℃下真空干燥稠膏，并粉碎至120目，取80g粉末，加入淀粉100g，混合均匀，用全自动硬胶囊填充机NJP-1200D装胶囊，得到1000粒成品。
本实施例所得胶囊中各有效成分含量为人参皂苷Rg145.0％，人参皂苷Rb115.0％，三七皂苷R138.5％，这些成分的总量为98.5％。
实施例4 本发明所述的胶囊的制备取三七主根500kg，用锷式破碎机PSJB-125粉碎，加入90％的乙醇2500kg，密封，室温下浸泡18小时。然后装入渗漉罐内，用95％的乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至6.0，静置30小时。用板框过滤机CRBF-400X400过滤，并在乙醇回收塔JH1200中减压回收乙醇。然后在单效外循环蒸发器DN-1000中浓缩滤液，直至相对密度为1.10，得到稠膏。在50℃下真空干燥稠膏，并粉碎至110目，取120g粉末，加入淀粉57g，滑石粉3g，混合均匀，用全自动硬胶囊填充机NJP-1200D装胶囊，得到1000粒成品。
本实施例所得胶囊中各有效成分含量为人参皂苷Rg180.0％，人参皂苷Rb110.0％，三七皂苷R19.9％，这些成分的总量为99.9％。
实施例5 本发明所述的胶囊的制备取三七主根500kg，用锷式破碎机PSJB-125粉碎，加入80％的乙醇2500kg，密封，室温下浸泡30小时。然后装入渗漉罐内，用80％的乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至7.0，静置18小时。用板框过滤机CRBF-400X400过滤，并在乙醇回收塔JH1200中减压回收乙醇。然后在单效外循环蒸发器DN-1000中浓缩滤液，直至相对密度为1.20，得到稠膏。在70℃下真空干燥稠膏，并粉碎至90目，取120g粉末，加入淀粉76g，滑石粉4g，混合均匀，用全自动硬胶囊填充机NJP-1200D装胶囊，得到1000粒成品。
本实施例所得胶囊中各有效成分含量为人参皂苷Rg120.0％，人参皂苷Rb148.5％，三七皂苷R110.5％，这些成分的总量为79.0％。
实施例6 本发明所述的胶囊的制备取三七主根500kg，用锷式破碎机PSJB-125粉碎，加入65％的乙醇2500kg，密封，室温下浸泡15小时。然后装入渗漉罐内，用65％的乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至5.5，静置15小时。用板框过滤机CRBF-400X400过滤，并在乙醇回收塔JH1200中减压回收乙醇。然后在单效外循环蒸发器DN-1000中浓缩滤液，直至相对密度为1.25，得到稠膏。在75℃下真空干燥稠膏，并粉碎至85目，取90g粉末，加入淀粉65g，滑石粉5g，混合均匀，用全自动硬胶囊填充机NJP-1200D装胶囊，得到1000粒成品。
本实施例所得胶囊中各有效成分含量为人参皂苷Rg110.0％，人参皂苷Rb110.0％，三七皂苷R175.0％，这些成分的总量为95.0％。
实施例7 本发明所述的胶囊的制备取三七主根500kg，用锷式破碎机PSJB-125粉碎，加入75％的乙醇2500kg，密封，室温下浸泡40小时。然后装入渗漉罐内，用75％的乙醇渗漉，收集渗漉液，调节pH至8.0，静置40小时。用板框过滤机CRBF-400X400过滤，并在乙醇回收塔JH1200中减压回收乙醇。然后在单效外循环蒸发器DN-1000中浓缩滤液，直至相对密度为1.30，得到稠膏。在85℃下真空干燥稠膏，并粉碎至95目，取110g粉末，加入淀粉75g，滑石粉5g，混合均匀，用全自动硬胶囊填充机NJP-1200D装胶囊，得到1000粒成品。
本实施例所得胶囊中各有效成分含量为人参皂苷Rg115.0％，人参皂苷Rb120.0％，三七皂苷R15.0％，这些成分的总量为40.0％。
实验例1 本发明所述的胶囊的鉴别取实施例1制得的胶囊的内容物30mg，加甲醇1ml使之溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一含0.2％羧甲基纤维素钠溶液为黏和剂的硅胶G薄层板上，以氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点。
实验例2 本发明所述的胶囊中皂苷含量的测定1.三七皂苷R1，人参皂苷Rg1的含量测定1.1材料实施例2制得的胶囊；三七皂苷R1对照品；人参皂苷Rg1对照品。
1.2方法参照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)进行测定。
1.2.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(20∶80)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于7000。
1.2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的三七皂苷R1及人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R10.2mg、人参皂苷Rg10.9mg的混合溶液，即得。
1.2.3供试品溶液的制备取实施例2制得的胶囊内容物60mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇适量振摇，使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
1.2.4测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
1.3结果与分析测得实施例2制得的胶囊每粒含三七皂苷R1(C47H80O18)6.0mg，人参皂苷Rg1(C42H72O14)25.5mg。
从中可知，三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量均符合规定。
2.人参皂苷Rb1的含量测定2.1材料实施例2制得的胶囊；人参皂苷Rb1对照品。
2.2方法参照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)进行测定。
2.2.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长为203nm；柱温40℃。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于7000。
2.2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
2.2.3供试品溶液的制备取实施例2制得的胶囊内容物60mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇适量振摇，使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
2.2.4测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3结果与分析测得实施例2制得的胶囊每粒含人参皂苷Rb1(C54H92O23)36.0mg。
从中可知，人参皂苷Rb1的含量符合规定。
综上所述，实施例2制得的胶囊每粒含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总量为67.5mg。
实验例3 本发明所述的胶囊对小鼠抗缺氧能力的影响1.对小鼠常压耐缺氧的影响取昆明种小鼠110只，体重20.42±1.22g，雌、雄各半，称重后随机分为十一组，每组10只，第一组灌胃等容积生理盐水；第二组灌胃地奥心血康胶囊450mg/kg；第三～五组灌胃实施例2制得的胶囊900、450、225mg/kg；第六～八组灌胃实施例3制得的胶囊900、450、225mg/kg；第九～十一组灌胃实施例4制得的胶囊900、450、225mg/kg。给药20分钟后将小鼠放入到事先装有15g钠石灰和一圆型滤纸的250ml广口瓶内，瓶口涂凡士林，拧紧瓶盖，立即记时，以将小鼠放入瓶内并盖紧瓶盖，至小鼠停止呼吸的时间为小鼠的耐缺氧时间，结果见表1。
表1

注*与生理盐水组比较P＜0.05结果表明，本发明所述的胶囊能明显延长小鼠耐缺氧时间，高剂量组和中剂量组与生理盐水组比较均有显著差异，阳性对照地奥心血康胶囊组与生理盐水组比较差异也较显著。
2.对断头小鼠喘息时间及喘息次数的影响取小鼠110只，体重20.25±2.14g，雌、雄各半，称重后随机分为十一组，每组10只，第一组小鼠灌胃等容积生理盐水；第二组小鼠灌胃地奥心血康胶囊450mg/kg，第三～五组小鼠灌胃实施例2制得的胶囊900、450、225mg/kg，第六～八组小鼠灌胃实施例3制得的胶囊900、450、225mg/kg，第九～十一组小鼠灌胃实施例4制得的胶囊900、450、225mg/kg。20分钟后，用大剪刀将小鼠沿耳尖部逐只剪头，秒表立即记录小鼠断头后至张口喘气停止的时间及其间喘息次数，结果见表2。
表2

注*与生理盐水组比较P＜0.05；**与生理盐水组比较P＜0.01；***与生理盐水组比较P＜0.001。
结果表明，本发明所述的胶囊能明显延长断头小鼠的喘息时间，并增加喘息次数，与生理盐水对照组比较，差异显著。
实验例4 本发明所述的胶囊对实验犬缺血心肌的保护作用1.材料与方法
1.1材料健康成年杂种犬54只，雌雄不拘，质量10-15kg。
1.2方法1.2.1动物模型复制动物随机分为对照组(C group)，缺血组(I group)，地奥组(DA group 0.15g/10kg×b.w.)，本发明实施例2制得的胶囊(I组)高剂量组(7.5粒/10kg×b.w.H dose group)和低剂量组(3粒/10kg×b.w.L dose group)，本发明实施例3制得的胶囊(II组)高剂量组(7.5粒/10kg×b.w.H dose group)和低剂量组(3粒/10kg×b.w.Ldose group)，本发明实施例4制得的胶囊(III组)高剂量组(7.5粒/10kg×b.w.H dose group)和低剂量组(3粒/10kg×b.w.L dose group)，各组分别有动物6只，用3％戊巴比妥钠溶液(1ml/kg×b.w.)腹腔注射麻醉，各组均进行气管插管并连接呼吸机，静脉补液20(滴/min)，颈总动脉插管以监测血压，胸骨正中切口，暴露心脏，剪开心包并缝制心包床，对照组术后行冠脉左前降支第2对角支(下同)假结扎术，缺血组术后行结扎术。7个药物组连续灌药3d，并于第3d灌药后2h，左右结扎冠脉，结扎后均连续观察3h(Is3h)。实验结束时取左室缺血区心肌待检。
1.2.2测定方法超氧化物歧化酶(SOD)测定采用邻苯三酚法，(丙二醛)MDA测定采用采用苯乙烯二胺显色法，糖原测定采用蒽酮比色法，乳酸测定采用酶偶联四唑盐比色法，乳酸脱氢酶(LDH)测定采用酶活性比色法。
1.2.3血压差值百分率的计算为了减少不同动物之间的个体误差，用以下公式表示血压在实验中的变化情况(结扎前血压-结扎后血压)×100％/结扎前血压。
1.2.4统计学处理实验数据均用单因素方差分析在SPSS统计软件中进行处理。
2.结果2.1药物对动脉血压的影响结果见表3、4，其中表3表示药物对收缩压的影响，表4表示药物对舒张压的影响。
2.2药物对缺血区心肌各生化指标的影响结果见表5、6，其中表5表示药物对缺血心肌糖原及乳酸含量的影响，表6表示药物对缺血心肌SOD活性及MDA和LDH含量的影响。
表3

表4


表5

注*与缺血组比较p＜0.05；**与缺血组比较p＜0.01本研究表明，地奥心血康和本发明所述的胶囊均能增强心肌收缩力，在急性心肌梗死后仍能维持血压的稳定，同时用药组心肌LDH含量低于缺血组，表明用药后可以缓解缺血对心肌造成的损害，使LDH的外漏减少。酶的外漏是因为心肌缺氧时糖的有氧氧化受阻，ATP生成显著减少，离子梯度紊乱膜的稳定性降低，同时心肌缺血时ATP降解生成大量次黄嘌呤和黄嘌呤，黄嘌呤脱氢酶又转化为黄嘌呤氧化酶，产生了大量的氧自由基，再加上儿茶酚胺自氧化等也生成大量自由基，对心肌产生进一步的损伤，对照组和用药组心肌SOD活性显著高于缺血组，MDA含量则显著低于对照组，即服用地奥心血康或本发明所述的胶囊后血液中MDA浓度降低，SOD活性升高，表明地奥心血康和本发明所述的胶囊均具有提高SOD活性，减轻自由基损伤的作用。综上所述，本发明所述的胶囊具有和地奥心血康相似的抗心肌缺血作用。


本发明提供了一种用于治疗心脑血管疾病的胶囊，其有效成分三七总皂苷含有如下配比的成分人参皂苷Rg