一种金钱松内酯h的制备方法及应用的制作方法(—)【技术领域】。(二)[0002]随着世界经济的快速发展和人口的老龄化,糖尿病(Diatetesmellitus)已成为肆虐全球的一种流行性非传染病，它与癌症、心血管疾病并称世界性三大疾病。糖尿病是以糖代谢紊乱为主要表现的内分泌，代谢障碍疾病。它是一组由于胰岛素分泌缺陷，或胰岛素作用缺陷，或者 两者兼而有之引起的高血糖代谢为特征的代谢疾病。糖尿病的慢性高血糖带来氧化应激增加，引起多脏器的长期损害，功能减退和衰竭，尤其是眼、肾脏、神经、心脏和血管，危害健康。近年来糖尿病发病率逐年上升，据WHO估计，全世界约有1.5亿糖尿病患者，发达国家中，糖尿病发病率为3 %~5 %。据世界卫生组织估计，到2025年，患糖尿病的人数将比现在翻一番，将突破3亿，严重威胁着人类健康。[0003]糖尿病是慢性终身性疾病，一旦催患需终身治疗。西医目前治疗糖尿病的口服药主要有:磺酰脲类(如格列美脲)、双胍类(如二甲双胍)等，它们大多为合成类药物，可促进胰岛素分泌、减少肝糖元的输出或增加对胰岛素的敏感性，但容易引起低血糖或乳酸中毒，并且无法根本阻止胰岛β细胞的进一步坏死，导致胰岛素依赖。随着对糖尿病基础理论研究的深入，具有其它作用机制的新型糖尿病药物研究取得进展，并有不少己应用于临床:α-葡萄糖甙酶抑制剂类(如阿卡波糖)，可抑制小肠上段的α-糖甙酶，阻断碳水化合物分解而进入小肠中下段再分解吸收，从而使血糖平稳地维持在一定水平，缓解餐后血糖的升高，但该类药物会产生腹部不适、胀气等消化道不良反应。醛糖还原酶抑制剂类(如依帕司他)，可通过抑制聚醇代谢通路达到预防和延缓糖尿病并发症的目的，但该类药物毒副作用较大且疗效不很理想，大大限制了其应用。另外，还有糖元异生抑制剂、胰岛素增敏剂等，应用范围也不是很广。因而，继续寻找具有良好疗效、副作用小的新药，依然是当前糖尿病研究领域的一个重点。[0004]天然药物具有资源丰富、毒副作用小、易于接受和长期服用的优点，越来越受到重视。近年来，随着化学分析方法和药理实验技术的长足发展，有关天然药物降血糖作用的研究不断深入、从中发现了多种疗效确实而显著的活性成分，为开发治疗糖尿病的新药探明了方向。(三)
[0005]本发明所述的金钱松内酯H具有糖苷酶抑制活性和降血糖作用，可用于制备治疗临床常见的糖尿病及相关代谢性疾病的功能食品与药物，并且本发明还提供了一种金钱松种子中成分金钱松内酯H的制备方法。[0006]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法按如下步骤进行:
[0007](I)将金钱松种子粉碎后，用溶剂A提取，分离固液相得滤渣A和提取液Α，将所得提取液A浓缩干燥得到粗提物A ;所述溶剂A选自氯仿或二氯甲烷；
[0008](2)将步骤⑴中所得滤渣A用溶剂B提取，分离固液相得滤渣B和提取液B，将所得提取液B浓缩干燥得到粗提物B ;所述溶剂B选自乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮中的一种或者是其中两种以上任意比例的混合溶剂；
[0009](3)合并步骤(1)和步骤(2)中所得的粗提物A和粗提物B得总粗提物，将所述的总粗提物分散于醇水溶液中，再用石油醚提取脱脂，弃去石油醚相，将萃余液浓缩干燥即得金钱松种子三萜提取物；所述的醇水溶液是由醇与水按体积比1:0.1~10混合配制而成的，其中所述的醇为Cl~C4的醇；
[0010](4)将步骤(3)所得的金钱松种子三萜提取物在40~50°C下溶于卤代甲烷与丙酮的混合溶液，自然冷却至室温或制冷冷却至2~7°C促进结晶，过滤获得晶体粗品；进一步将所述的晶体粗品在40~50°C下溶于卤代甲烷与丙酮的混合溶液，冷却重结晶，过滤获得晶体产品，所述的晶体产品干燥后即为金钱松内酯H ;所述卤代甲烷与丙酮的混合溶液中，卤代甲烷与丙酮的体积比为1:3~5，优选为1:4。本发明方法制备的金钱松内酯H液相测得含量达90%以上，金钱松内酯H产品量约占金钱松三萜提取物的24wt%左右。
[0011]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法步骤(1)中，优选所述溶剂A的体积用量以金钱松种子的质量计为3~10mL/g ;优选所述的溶剂A为二氯甲烷。
[0012]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法步骤(2)中，优选所述溶剂B的体积用量以金钱松种子的质量计为3~10mL/g ;优选所述的溶剂B为乙酸乙酯。
[0013]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法步骤(1)和步骤(2)中，所述提取的方法可选择下述两种方法之一:①采用索氏回流提取6~24h ;②采用浸溃提取方式，浸提2次，每次5~7天。。
[0014]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法步骤(3)中，优选所述醇水溶液的体积用量以总粗提物的质量计为3~10mL/g ;所述醇水溶液中的醇优选为甲醇或乙醇。
[0015]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法步骤(3)中，所述的石油醚提取脱脂可以采用如下方法:将总粗提物分散于醇水溶液中后，加入石油醚萃取I~3次，弃去萃取液，将萃余液浓缩干燥即得金钱松种子三萜提取物；优选所述石油醚的体积用量以总粗提物的质量计为3~10mL/g ;优选所述的石油醚与醇水溶液的用量体积比为1:1。
[0016]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法步骤(4)中，所述的金钱松种子三萜提取物在用卤代甲烷与丙酮混合溶液重结晶获得晶体粗品的过程中，优选所述卤代甲烷与丙酮混合溶液的质量用量是金钱松种子三萜提取物质量的5~7倍，特别优选为6倍。
[0017]本发明所述的金钱松内酯H的制备方法步骤(4)中，所述的卤代甲烷优选为二氯甲烷或三氯甲烷，特别优选二氯甲烷。
[0018]本发明所述的金钱松内酯H可用于制备治疗糖尿病的功能食品和药物。所述的金钱松内酯H可通过添加常规药用辅料，按照药学领域中熟知的方法进一步制备成胶囊、片剂、颗粒或其他口服制剂。
[0019]本发明所述的金钱松内酯H制备方法的优点在于:结合了粉碎-浸提-萃取-结晶-重结晶的方式，对金钱松种子中金钱松内酯H进行提取。通过采用将浸膏分散于乙醇水溶液中，再用石油醚脱脂的方式，分离脱除了金钱松种子中大量的油脂类成分，使提取物中杂质含量降低，有利于后面结晶工艺的进行。进一步结晶制备金钱松内酯H的工艺简单，操作方便，能耗小。前期调研表明，金钱松种子中存在大量的三萜类化合物，这些化合物缺乏制备及活性报道。本发明主要采用溶剂萃取，结合溶剂重结晶的方式，高效制备了具有降血糖活性的金钱松内酯H。其中
[0020]1、操作步骤(3)中，针对金钱松种子中油脂含量高的特点，采用了浸膏分散于乙醇水溶液中，石油醚脱脂的方式，除去油脂类成分，有利于结晶进行。
[0021]2、操作步骤(4)中的冷却结晶，于室温冷却结晶较慢但可以形成较大晶体，提高晶体均匀度。处理量大时可强制制冷冷却结晶，加快生产效率。
[0022]3、操作步骤(4)中金钱松种子三萜提取物重结晶获得的母液可以反复利用，继续用来加热溶解三萜提取物。充分利用8次以上，对产品质量无影响。
[0023]化合物金钱松内酯H的碳谱数据如下:
[0024]金钱松内酯H: 13C-NMR (CDCl3, 500ΜΗζ) δ: 146.2 (C-1), 119.3 (C_2)，166.1 (C_3)，84.2 (C-4)，54.4 (C-5)，27.6 (C_6)，27.9 (C_7)，52.1 (C_8)，87.5 (C_9)，86.2 (C-1O)，27.5 (C-11), 29.7(C-12), 43.4(C-13), 47.7(C-14), 40.5(C-15), 77.0(C-16), 55.2(C-17), 17.9 (C-18)，59.4 (C-19)，30.1 (C-20)，19.2 (C-21)，44.2 (C-22)，107.2 (C-23)，42.7 (C-24)，34.2 (C-25)，179.6 (C-26)，15.0 (C—27), 21.9 (C—28)，30.7 (C—29), 21.3 (C—30)。
[0025]结构式如下:
[0026]