专利名称：一种银杏内酯制剂的制备方法目前，研究表明银杏内酯可改善脑缺血状态，对抗缺血性脑损伤，具有明确的脑保 护作用，另外，银杏内酯为一类强特异性的PAF拮抗剂，可用于治疗血瘀气滞引起的缺血性 脑血管疾病。从银杏叶中提取的多种有效成分中，银杏内酯类为其重要成分；而在银杏内酯 类中，银杏内酯K(Ginkgc)Iide K，以下简称GK)是最近开始研究的生物活性内酯，因为原来 因其在植物含量较少，所以被人们忽视。目前，由于GK在银杏叶中含量较低及分离纯化较 困难等原因，故用混合内酯(含内酯A，B，C)做针剂的见有报道，本人通过化学半合成的方 法，得到大量GK单体化合物，所以GK单体制备针剂的国内尚未见报道。在国内外文献中，未见GK的药理研究，仅见有中国药科大学楼凤昌教授分离得到 过该化合物。
本发明的目的在于提供一种简便、效果好的银杏内酯K针剂的制备方法。本发明的目的是通过如下措施来实现。选纯品GK为原料药，溶解于注射用的非水 溶剂-低分子量的聚乙二醇中，聚乙二醇可单独使用，或与无水乙醇组成的混合溶剂使用； PEG与乙醇的比例(按体积计)可在1 9-9 1范围，优选3 1-1 3，混合溶剂中可加 或不加助溶剂、表面活性剂，如吐温类(吐温80等)。可使GK溶液在稀释注射时不易析出， 充分搅拌或超声震荡，进行后处理；所述的后处理是指过滤、灌封、灭菌、检测，即得产品，使 用前稀释于适量的等渗氯化钠注射液中，摇勻、供静脉注射使用。本发明的针剂相比现有银杏内酯类药物的如下优点溶解性较好，活性较高，质量 可控，化学性质稳定，制备工艺简便，即将GK加选用的“溶剂”溶解，经过滤、灌封、灭菌，即 得。每毫升含10-20毫克GK的灭菌溶液。临用前稀释于适量的等渗氯化钠注射液中，含 GK10-40毫克/100毫升，供静脉滴注用。经药效学实验，对大鼠MCAO模型最低有效剂量为 2-8mg/kg/日，证明对心脑血管病有治疗作用。银杏内酯K注射液两种溶媒对MCAO大鼠脑梗塞范围的影响地点中国药科大学中药学院试验材料一、药物与试剂受试药银杏内酯K注射液按实施例1制得，大鼠用量8、4、aiig/kg/日。对照药-金纳多注射液德国威玛舒培博士药厂产品，每支5ml，每毫升含黄酮苷 0.8%ig，批号1047425，人用量为20_40ml/人/日，大鼠用量6. 7ml/kg/日。化学试剂 Fecl3.6H20(A.R.)，北京化工厂生产，用lmol/L盐酸配制；红四氮哇(TTC)，美国SIGMA公司生产，批号:100321o二、动物SD大鼠，雌雄兼用，体重220_250g，由中国药科大学实验动物中心提供，合格证 号=SCXK 10-12-0036。三、仪器MP2001-1型电子天平由上海第二天平仪器厂生产。FA1004N型电子天平由上 海精密科学仪器公司生产；台式低速大容量离心机TDL-5型，江苏省金坛市医疗仪器厂生 产；UV-2201紫外可见分光光度计由日本岛津公司生产。四、方法与结果一、银杏内酯K注射液对大脑中动脉血栓模型大鼠神经症状的影响(一)分组及给药取健康大鼠，按性别体重随机分为6组银杏内酯K注射液(8、4、2mg/kg)剂量组 和金纳多注射液阳性对照、模型对照组(以上各组η = 27，早13 $ 14或早14 $ 13只)以 及假手术对照组(n = 10)，雌雄各半。各组分别于造模前给药，每组动物尾静脉注射相应的 药物溶液，各组给药体积为1. 0ml/100g。每天给药一次，连续7天，模型对照组和假手术对 照组给予等容量的生理盐水。(二)模型制造术次给药Ih后，用戊巴比妥钠(约35mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰卧固定， 常规消毒皮肤，颈部正中切开，饨性分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉 (ICA)。用动脉夹夹闭颈总动脉，于颈内动脉上近颈总动脉分叉处剪一“V”字形切口，将一鱼 线(直径0.30mm)沿颈内动脉缓慢插入至大脑中动脉(MCA) 口，略感阻力时停止(插入过 程中无阻力感)，插入长度约(18.5士0. 5)mm，结扎固定鱼线。假手术组也同样插线，但Imin 后立即拔出，除不阻断大脑中动脉外，其余操作同手术组。银杏内酯B注射液注射液组、金 纳多注射液组在缺血即刻和MCAO后池分别给予相应剂量的银杏内酯B注射液、金纳多溶 液，假手术对照组和模型对照组在同一时间点仅给予等容积生理盐水。术后回笼饲养(3只 /笼)，注意保暖。造模后每组选取20只动物继续试验。(三)行为检测在术后 24h)，按 Bederson 等[Lundy EF. 501ik BS, Frank RS et alMorphometric evaluation of brain infarcts in rats and gerbils. J Pharamacol Method, 1986,16 201]的方法并加以改进，对动物进行行为评分。1.提鼠尾离开地面约一 尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘 屈曲、肩内旋或既有腕肘的屈曲又有内旋者，记为1分。2.将动物置于平滑地面上，分别推 双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力记0分；如向手术对侧推动时阻力下降 者，记为1分。3.将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有 力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停 地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障 碍越严重。(四)结果分析对行为测试打分值进行组间比较，t检验。结果显示，假手术组未见行为异常改变，MCAO模型组、银杏内酯K的不同计量组在 术后24h均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力下降，肩抗力下降。银杏内酯K注射液各剂量组的大鼠在术后Mh，其神经症状均有不同程度的改 善，统计学处理，差异显著(P < 0. 05)。(四)脑栓塞范围测定造模后Mh，每组取10只大鼠断头取血取脑，去除嗅球、小脑，生理盐水洗净，滤纸 吸尽水分，-20°C冷藏IOmin后，将大脑沿冠状面切成厚约5mm脑片，置红四氮唑(TTC) 磷酸盐缓冲液中37°C避光温孵15min，洗去染色液，再用10 %中性甲醛溶液固定Mh，取出 称总染重，然后切取栓塞区称重，计算栓塞范围。结果进行组间比较，t检验。结果见表1。栓塞范围=栓塞区重/总染重X100%。表-1银杏内酯K注射液对MCAO大鼠脑组织梗死面积的影响组别剂量(mg/kg)例数梗死百分率(％)MCAO 组-1224. 6±3.2银杏内酯K注射液组8YZ**11.5 ± 2.1412#15.1 ± Li212*20.7 ±1.8金纳多注射液组62**12.4 ± 2.假手术组—10—注与模型组比较，*P< 0. 05，**P < 0. 01(五)缺血区脑组织SOD、MDA测定造模后Mh，每组取10只大鼠断头处死，迅速取手术侧皮质和侧皮基底核0. 4g 左右，称重，加冰冷生理盐水研磨成10%组织勻浆，勻浆液在2000r/mi基底节η下离心 IOmin,取上清液_20°C冷藏。羟胺法测定S0D、TBA法测定MDA。结果进行组间比较，t检验。 结果见表2。表-2银杏内酯B注射液对局灶性脑缺血大鼠脑组织SOD、MDA的影响组别剂量(mg/kg)SOD 活性(U/ mgprot) MDA (nmol/mgprot)模型对照组-1019. 44±92. 9910. 19±1. 33银杏内酯K注射液组8699. 57±75. 49*8.16±1. 79*4658. 36 ±74. 48*8..28±1. 30*2627. 71 ±44. 17*8. 78±1. 59*金纳多注射液组6654. 0± 122. 40*8.55±1.65*假手术组-506. 52±159. 207. 05±2. 37与模型组比较，*Ρ< 0. 05，**P < 0. 01结果显示，术后Mh，除假手术组未见异常改变外，MCAO模型组、银杏内酯K各给药 组的大鼠均有不同程度梗塞灶、银杏内酯K注射液各剂量组可明显减少梗塞程度，与模型组相比具有显著差异(P < 0.01)。结果显示，术后Mh，大鼠脑组织SOD、MDA的变化明显，银杏内酯K注射液各剂量 组与MCAO模型组相比具有显著差异(P<0. 05)。本发明表明，银杏内酯K注射液可显著减 少大鼠局灶性腩缺血的梗塞范围，明显提高脑组织中的SOD活性，明显降低脑组织中MDA的 含量。银杏内酯K注射液(8mg/kg)组对大鼠局灶性脑缺血的梗塞范围的抑制作用更强一 些，说明银杏内酯K对脑缺血的保护作用呈剂量依赖性。具体实施方法实施例1GK40， OOOmgPEG -2001000 ml
制得1000支配制称取GK置容器中，加入溶剂PEG，搅拌或超声震荡溶解，至全量，混合均勻； 经过滤、灌封、灭菌，即得。实施例2
GK20’ OOOmg
PEG - 3001000 ml
氣化钠500g
注射用水适量制得 1000 瓶配制称取GK置容器中，加入溶剂PEG，搅拌或超声震荡溶解，至全量，加注射用水 至100L，混合均勻；经过滤、灌封、灭菌，即得。实施例

本发明涉及一种银杏内酯针剂的制备方法，该方法是把银杏内酯K溶于聚乙二醇，加或不加乙醇成混合溶剂，加或不加表面活性剂，经搅拌或加热，及后处理即得产品。本发明优点是工艺简单、成本低廉、不需冻干设备，性质稳定，方便贮运，药效可靠。本发明产品主要用于治疗心脑血管病、高血压、哮喘等疾病。