专利名称：半夏提取物及其制备方法、药物组合物和用途的制作方法半夏是天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit的干燥块茎，是西南地区的常用药，具有悠久的药用历史。根据苗族民间用药经验，其块茎可药用，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等功能。半夏既可单用，也可入复方。在苗族民间，半夏与旋复花、代赭石、人参、生姜、炙甘草、大枣等配伍，具有降逆化痰、益气和胃的功能，用于治疗胃气虚弱、痰浊内阻所致胃气上逆、心下痞硬、噫气不除，及反胃、呕吐、呃逆等症。目前，半夏的提取一般采用的是常规的水提醇沉法或醇提法，但对于半夏提取物的药理学研究尚未见报道。申请人经过广泛深入的研究发现，通过将半夏用有机溶剂、含水有机溶剂或水在一定条件下提取得到的半夏提取物具有显著的镇咳、祛痰、镇吐作用，抗溃疡的作用，促进胆汁分泌作用，抗心律失常作用，抗肿瘤作用，抗早孕作用；并显示出良好的治疗呼吸系统疾病、消化系统疾病、循环系统疾病和肿瘤以及抗早孕的作用。
本发明的目的在于提供一种半夏提取物及其制备方法、药物组合物和用途。本发明半夏提取物具有显著的镇咳、祛痰、镇吐作用；抗大鼠幽门结扎性溃疡、消炎痛性溃疡及应激性溃疡的作用；对家兔有促进胆汁分泌作用；抗心律失常作用；抗肿瘤作用；抗早孕作用。特别是对矽肺、咳嗽、痰饮、胃溃疡、呕吐、皮质酮减少症、心律失常、肿瘤、早孕具有治疗作用。本发明是这样构成的半夏提取物的制备方法为将新鲜采集的半夏块茎晾干粉碎，得到半夏粗粉，然后用有机溶剂、含水有机溶剂、或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到半夏提取物。所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙醚、石油醚或汽油。具体的说，半夏水提取物的制备方法为取半夏适量，粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至60℃测相对密度为1.30，放冷，加入乙醇使含醇量为70％，静置过夜，取上清液减压浓缩至相对密度为1.25的稠膏，75℃减压干燥，即得。半夏醇提取物的制备方法为取半夏适量，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得。
按上述半夏提取物制备方法提取得到的半夏提取物。
由上述半夏提取物组成的药物组合物包括作为活性成分的半夏提取物和一种或多种药用载体或赋形剂。
本发明半夏提取物用于制备治疗呼吸系统疾病的药物。
所述的呼吸系统疾病为矽肺、咳嗽或痰饮。
本发明半夏提取物用于制备治疗消化系统疾病的药物。
所述的消化系统疾病为胃溃疡、呕吐或皮质酮减少症。
本发明半夏提取物用于制备治疗循环系统疾病的药物。
所述的循环系统疾病为心律失常。
本发明半夏提取物用于制备治疗肿瘤疾病的药物。
本发明半夏提取物用于制备治疗早孕疾病的药物。
本发明半夏提取物可单独或以药物组合物的形式使用，因此还涉及含有作为活性成份的有效剂量的半夏提取物以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90％重量的半夏提取物。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。如果需要，可将半夏提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明的半夏提取物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、检剂、膏剂、贴剂、注射剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片、多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氮化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成检剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分半夏提取物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分半夏提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明半夏提取物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。
为了验证本发明制备方法的合理性，申请人对半夏的提取工艺进行了试验研究和筛选，具体如下一、半夏水提取工艺的研究影响煎煮的主要因素有药材粉碎粒度、煎煮次数、加水量及煎煮时间等，申请人经过研究发现通过以下方法优选出的提取工艺可以认为是半夏的最佳水提取工艺，所得的提取物疗效最好。
取半夏药材适量，按下表1试验，以出膏率及半夏的药理活性评分作为评价指标进行提取工艺的优选，结果见表2、表3表1半夏提取工艺研究的因素水平表

表2 半夏提取工艺优选结果表

表3 正交试验方差分析表

注F0.05(2，2)＝19.00研究结果表明各因素对半夏水提取工艺影响大小的顺序为C＞B＞A＞D，其中B、C两个因素有显著性差异，B2＞B3＞B1，C2＞C3＞C1，因此，提取次数选2次，加水量选10倍；A、D两个因素没有显著性差异，但考虑到生产实际，选择粗粉，以方便过滤提取液，煎煮时间第一次定为2小时，第二次定为1.5小时。
因此，半夏水提取物的最佳提取工艺为取半夏适量，粉碎成粗粉，加10倍量的水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液。
半夏药材经水提浓缩后，除杂相当关键，申请人采用不同浓度的乙醇进行醇沉以除去杂质，方法如下取半夏粗粉，按优选的水提煎煮条件煎煮提取，减压浓缩(60-75℃，-0.08Mpa)至相对相密度1.30(60℃)，摇匀，量取一定量浓缩液，加乙醇，使乙醇含量为60％、70％、80％，醇沉24小时，取上清液减压回收乙醇，挥干，减压干燥(65-80℃，-0.08Mpa)，称醇提物重量；醇沉物减压干燥(65-80℃，-0.08Mpa)，称杂质重量。测定醇提物的药理活性，试验结果见表4。
表4除杂工艺研究结果表

研究结果表明醇沉浓度为70％时，除去的杂质最多，同时药理活性最高，因此，选用70％的乙醇浓度作为去除杂质的浓度。
浓缩工艺的研究申请人考察了减压浓缩和常压浓缩两种方法，经过优选发现，减压浓缩和常压浓缩两种方法比较，减压浓缩较常压浓缩快，节约时间，且药理活性比常压浓缩高，因此，选择减压浓缩作为本提取物制备的浓缩方法。
干燥工艺申请人研究发现，干燥温度对提取物的药理活性有一定的影响，本提取物在75℃减压干燥的药理活性最好，因此，选择75℃减压干燥作为本提取物的干燥方法。
二、半夏醇提取工艺的研究影响提取的主要因素有提取次数、溶媒用量、溶媒浓度及提取时间等，申请人经过研究发现通过以下方法优选出的提取工艺可以认为是半夏的最佳醇提取工艺，所得的提取物疗效最好。
取半夏药材适量，粉碎成细粉，按表5进行试验，结果见表6、表7表5 半夏醇提取工艺研究的因素水平表

表6 半夏醇提取工艺优选结果表

表7 正交试验方差分析表

注F0.05(2，2)＝19.00研究结果表明各因素对半夏醇提取工艺影响大小顺序为C＞B＞A＞D，通过直观分析，选择C2、B2、A2、D2作为最佳提取工艺，即半夏适量，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得半夏醇提取物。
为了确保本发明的效果，申请人对所述半夏提取物进行了生物活性实验，具体如下观察指标半夏提取物对小鼠的止咳作用(潜伏期观察法)；半夏提取物对小白鼠的化痰作用(气管段酚红法)；半夏提取物的平喘作用(喷雾致喘法)；半夏提取物对硫酸铜致家鸽呕吐试验；半夏提取物对慢性髓性白血病细胞的生长抑制作用试验；半夏提取物对鼠抗生育作用的实验研究。
该生物活性实验所采用的半夏提取物为用乙醇作为提取溶剂得到的提取物。
1.半夏提取物对小鼠的止咳作用(潜伏期观察法)方法与结果取昆明种小鼠30只，按体重随机分为3组，第一组灌服半夏提取物溶液10g/kg，第二组灌服等容积生理盐水，第三组腹腔注射磷酸可待因0.03g/kg。灌胃给药1h，腹腔注射给药0.5h后，将小鼠放入250ml的广口瓶中，注入二氧化硫。观察小鼠咳嗽动作(腹肌收缩、张大嘴、有时可有咳声)，记录小鼠咳嗽的潜伏期(由注入二氧化硫开始至发生咳嗽所需的时间为潜伏期)，并记录镇咳率。结果见表8表8 半夏提取物对小鼠的止咳作用(X±SD)(n＝10)

注*P＜0.05结果表明半夏提取物溶液与生理盐水对照组比较，咳嗽潜伏期延长，说明有显著的止咳作用。镇咳率为121％。
2.半夏提取物对小白鼠的化痰作用(气管段酚红法)方法与结果取昆明种小鼠，按体重随机分为2组，给药组灌服15g/kg半夏提取物，对照组给同体积生理盐水。半小时后，腹腔注射酚红0.1ml(5mg)/10g体重。半小时后处死动物，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放进2ml生理盐水的试管中，再加0.1mlNaOH，用721型分光光度计、波长546nm，测OD值。计算酚红含量(μl/ml)，与对照组比较。结果见表9表9 半夏提取物对小白鼠气管段酚红排泌量的影响(X±SD)(n＝10)

结果表明半夏提取物能够显著增加小白鼠气管段酚红排泌量，说明其具有良好的化痰作用。
3.半夏提取物的平喘作用(喷雾致喘法)方法与结果实验前一天由准备室预选体重150-200g幼年豚鼠若干只，分别置喷雾箱内，以53.3-66.6kPa(400-500mmHg)压力喷入1mg/ml磷酸组胺1ml(必要时将浓度提高到2mg/ml)喷入装置箱内，动物在吸入以上药液后经过一定的潜伏期，即产生哮喘反应，“哮喘”反应按程序可分为四级，I级呼吸加速，II级呼吸困难，III级抽搐，IV级跌倒。多数动物在90s以内即可出现III级或IV级反应；一般不超过150s，超过150s者可认为不敏感，不予选用。动物一出现抽搐，即拉开箱门取出动物，必要时辅以人工呼吸，以免动物因窒息而死亡。
次日将预选过的“哮喘”豚鼠随机分为2组，每组10只，甲组灌胃0.5g/ml半夏提取物10g/kg，乙组给相同剂量的生理盐水，给药15min重复给药一次，给药后30min，分别放入喷雾装置内按预选时的同样条件分别喷雾磷酸组胺。记录喷雾开始至症状出现的时间(以抽搐、跌倒为准)作为潜伏时间，如潜伏时间延长一倍为有效。结果见表10表10 半夏提取物的平喘作用(n＝10)

结果表明半夏提取物可延长引咳潜伏期，有效率为70％，而生理盐水有效率为10％。说明该提取物具有良好的平喘作用。
4.半夏提取物对硫酸铜致家鸽呕吐试验方法与结果家鸽40只，随机分为5组，每组8只空白对照组(给予同容积辅料)、阳性药组(抑眩宁0.63g/kg)、半夏提取物高、中、低3个剂量组(4、8、16g/kg)。ig给药，连续7d实验前动物禁食不禁水12h。末次给药后1h，给予4％的硫酸铜溶液1ml/kg，记录动物呕吐潜伏期和1h内呕吐次数。结果见表11表11 半夏提取物硫酸铜致家鸽呕吐的影响(X±s)


结果表明半夏提取物高、中剂量组对硫酸铜致家鸽呕吐潜伏期明显增加，呕吐次数明显减少，说明该提取物具有良好的止呕作用。
5.半夏提取物对慢性髓性白血病细胞的生长抑制作用试验方法与结果取对数生长的K592细胞，配成浓的细胞悬液，稀释成3～5×104cell/ml细胞悬液。取细胞悬液装成两瓶，每瓶4ml，甲瓶再加入半夏提取物溶液2ml，乙瓶(空白对照组)加入等量的培养液，在37℃培养箱内培养。将培养72h的实验组及空白组细胞置倒置的显微镜下，观察细胞形态及生长情况，同时作显微照相记录，按Toplin分级法，将细胞受损的形态致变定为5组(0-IV)。将照相记录后的细胞，制成细胞悬液，利用细胞记数板，显微镜下记数，按下式计算增殖抑制率。
增殖抑制率＝(空白组细胞数-实验组细胞数)/空白组细胞数×100％结果半夏提取物的增殖抑制率为72.3％，表明该提取物具有很好的抗肿瘤作用。
6.半夏提取物对鼠抗生育作用的实验研究(1)半夏提取物对小鼠抗早孕的作用方法与结果将有3个以上连续生理周期的小鼠以雌雄2∶1合笼，在次日清晨做阴道涂片，看到精子为第1天，在第5～9天中连续每天灌胃一次，在第10天解剖，称量并用组织固定液保存小鼠主要器官(子宫、卵巢、脾脏、肾上腺、胸腺)。实验采用了0.26g/kg和0.52g/kg两个剂量，对照组喂食等剂量的生理盐水。实验分组为每组8只雌性小鼠。
(2)半夏提取物对小鼠抗着床的作用将有3个以上连续生理周期的小鼠以雌雄2∶1合笼，在次日清晨做阴道涂片，看到精子为第1天，在第1～6天中连续每天灌胃一次，在第10天解剖。喂药的剂量、方法和解剖后的处理与抗早孕的实验方法相同。实验结果见表12表12 半夏提取物对小鼠抗早孕与抗着床效果比较

实验结果表明半夏提取物能够明显的降低小鼠产仔的代数与产仔数，能有效地控制小鼠的生育数量。
结论通过以上的试验结果表明，半夏提取物具有良好的镇咳、祛痰、镇吐作用；抗大鼠幽门结扎性溃疡、消炎痛性溃疡及应激性溃疡的作用；对家兔有促进胆汁分泌作用；抗心律失常作用；抗肿瘤作用；抗早孕作用。特别是对矽肺、咳嗽、痰饮、胃溃疡、呕吐、皮质酮减少症、心律失常、肿瘤、早孕具有治疗作用。

本发明的实施例2半夏乙醇提取物的制备取半夏块茎干品5kg，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得半夏乙醇提取物300g。
本发明的实施例3半夏石油醚提取物的制备将半夏块茎干品5kg粉碎后，用石油醚加热回流提取，每次用石油醚20L，提取3次，合并提取液，减压蒸发至干，得到石油醚提取物270g。
本发明的实施例4半夏乙酸乙酯水溶液提取物的制备将半夏块茎干品5kg粉碎后，用乙酸乙酯水溶液加热回流提取，每次用乙酸乙酯水溶液30L，提取2次，合并提取液，减压蒸发至干，得到乙酸乙酯水溶液提取物212g。
本发明的实施例5半夏三氯甲烷提取物的制备
将半夏块茎干品5kg粉碎后，用三氯甲烷渗滤提取，每次用三氯甲烷15L，提取4次，合并提取液，减压蒸发至干，得到三氯甲烷提取物231g。
本发明的实施例6含半夏提取物的药物组合物1按下述配比称取原料紫苑(蜜炙)300克，矮地茶300克，浙贝母280克，白前530克，百部280克，桔梗280克，苦杏仁250克，荆芥150克，薄荷150克，甘草150克。将上述配方中荆芥、薄荷二味蒸馏提取挥发油，挥发油用β-CD包合，包合物备用，药渣及提取液另置；另取浙贝母、百部和苦杏仁加70％乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至相对密度为1.30(60℃测)的稠膏，备用；然后取矮地茶等其余五味药材加水煎煮二次，第一次2小时，第二次加入荆芥、薄荷提取后的药渣煎煮1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05(60℃测)的清膏，作离心处理后，减压浓缩至相对密度为1.30(60℃测)的稠膏，再与上述醇提稠膏合并后进行真空干燥，然后和半夏提取物干浸膏混合粉碎后过筛，加入β-CD包合物及辅料，混匀，制粒，干燥，整粒，制成颗粒剂约1000克，即得。本制剂口服，每次5-10克，一日3次。用于治疗呼吸系统疾病如矽肺、咳嗽或痰饮等。
本发明的实施例7含半夏提取物的药物组合物2按下述配比称取原料柴胡300g、积实300g、木香300g、陈皮300g、半夏300g、蒲公英400g、山碴(炒焦)250g、焦槟榔150g、鸡矢藤250g、六神曲〔炒〕300。上述柴胡、积实、木香、陈皮提取挥发油，挥发油用β一环糊精包合，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与半夏等其余六味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度约1.10(50℃)，加乙醇使含醇量为65％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，并继续减压浓缩至相对密度为1.30(80℃)的清膏，加入甜菊素和糊精等辅料适量，充分混匀，用65％乙醇溶液制成颗粒，干燥，与上述挥发油β一环糊精包合物混合均匀，制成1000g，即得颗粒剂。本制剂口服，每次5-10g，每日3次。用于治疗消化系统疾病如胃溃疡、呕吐或皮质酮减少症。采用常规工艺，可将上述颗粒剂制成胶囊剂。
本发明的实施例8含半夏提取物的药物组合物3按下述配比称取原料瓜蒌100g、薤白100g、半夏100g、远志50g、红花50g、大枣50g，加水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，加乙醇至浓度为70％，静置过夜，取上清夜，浓缩，减压干燥，加入淀粉等辅料适量，采用常规工艺压制成500片。本制剂口服，每次2-4片，每日3次，用于治疗心血瘀阻所致的心律失常。
本发明的实施例9含半夏提取物的药物组合物4
按下述配比称取原料半夏10g，党参15g，黄芩10g，干姜9g，黄连6g，炙甘草6g，大枣5枚。此方按传统汤剂制备方法制备汤液，每日1剂，头煎加水500mL，煎取药液200mL，二煎加水300mL，煎取药液100mL，两煎相混，分多次少量温服，一般服用7～28剂。用于治疗消化道肿瘤症见乏力、食欲不振、心下痞满、呕吐、泄泻者。
本发明的实施例10半夏提取物单方制剂取半夏提取物250g，加入250g PEG2000，用胶体磨混匀，压制成1000粒软胶囊。本制剂口服，每次4粒，一日3次，用于早孕的治疗。


本发明公开了一种半夏提取物及其制备方法、药物组合物和用途。半夏提取物是将新鲜采集的半夏块茎晾干粉碎，得到半夏粗粉，然后用有机溶剂、含水有机溶剂或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到的。本发明半夏提取物具有良好的镇咳、祛痰、镇吐作用；抗大鼠幽门结扎性溃疡、消炎痛性溃疡及应激性溃疡的作用；对家兔有促进胆汁分泌作用；抗心律失常作用；抗肿瘤作用；抗早孕作用。特别是对矽肺、咳嗽、痰饮、胃溃疡、呕吐、皮质酮减少症、心律失常、肿瘤、早孕具有治疗作用。