专利名称：一种治疗心脑血管疾病的制剂及其制备方法和质量控制方法本发明的背景来源于对血竭、广西血竭和剑叶龙血树的有关文献记载。龙血竭和剑叶龙血树主要含黄酮类成分，另含少量苷类、萜类和甾醇类成分；药理研究表明，广西血竭具有明显的抗血栓、增加纤溶和改善血液流变学等作用，其中黄酮类成分是活血化瘀的主要有效成分；多家医院用于治疗脑血栓、冠心病、糖尿病高血脂症有较好疗效。本发明对剑叶龙血树进行了系统的资源、化学成分和药理研究，发现剑叶龙血树提取物具有明显的抑制血小板聚集、抗心肌缺氧和改善血液流变学等作用。进而对剑叶龙血树的有效部位进行深入研究，旨在开发出高效、低毒的治疗心脑血管疾病的新药。心脑血管病在我国的死因构成比中居首位，其中冠心病在心血管病的位次已由50年代的第四位上升到80年代至目前的第一位。因此，寻找、开发安全有效的治疗和预防冠心病的药物是重大的课题之一。故本项目立足当地资源，开发出一种疗效确切的心脑血管用药。剑叶龙血树植物资源丰富，广布于云南和广西南部，且容易栽培，为其深入开发提供了良好物质基础。
本发明提供一种中药制剂，该制剂以百合科植物剑叶龙血树的药用部位为原料，经过提取步骤制备成的。本发明的制剂，其中剑叶龙血树的药用部位选自，剑叶龙血树的根、茎、含脂木材、树脂，优选的是含脂木材。本发明还包括用本发明的制剂制备预防和/或治疗心脑血管疾病的药物中的应用。
本发明还包括本发明的制剂的制备方法，其特征在于，经过以下步骤，a.将剑叶龙血树的药用部位粉碎，b.用水或碱性有机溶剂提取，
c.回收溶剂，提取液调节pH值到酸性，滤过，d.沉淀加水洗涤至中性，干燥，加有机溶剂提取，e.回收有机溶剂，提取液浓缩，干燥，粉碎得药物活性成分；f.以步骤e制得的药物活性成分为原料，按常规方法制成制剂。
本发明的制备方法具体可以是以下方法，取剑叶龙血树，粉碎成粗粉，加含0.2‰～0.7‰氢氧化钠的25～75％乙醇回流提取二次，每次加4～14倍量，每次0.5～2小时，滤过，滤液合并，回收乙醇，至无醇味，放冷，加5～20％的盐酸调节pH值为1～3，放置6～18小时，滤过，沉淀加水洗涤至中性，干燥，粉碎成粗粉，加醋酸乙酯回流提取二次，每次加3～12倍量，每次0.5～2小时，滤过，滤液合并，回收醋酸乙酯并减压浓缩至相对密度在80℃下为1.1～1.6的稠膏，85℃以下干燥，粉碎，过筛，得药粉；上述步骤得到的药粉为含有药物活性物质的提取物，按药用剂型添加辅料，制成制剂。
本发明的中药制剂具有活血祛瘀，通脉止痛之功效。可用于胸痹心痛，心血瘀阻证，症见心胸疼痛，如刺如绞，固定不移，甚则心痛彻背，或痛引肩背，常伴有胸闷心悸，短气，面色晦暗，口唇青紫。舌质紫暗，或有瘀斑，舌下脉络青紫，脉小弦或细涩；冠心病心绞痛见上述症候者亦适用之，还可以适用于血瘀型的脑血管疾病，如中风、头痛、眩晕等。本发明优选用于血瘀证型的心血管疾病的治疗应用。
用本发明的方法制成的剑叶龙血树提取物是本发明的药物制剂的活性成分提取物，其中含有黄酮类物质，经过对黄酮类物质的含量测定，总酚含量大于30％，优选的指标是总酚含量大于50％。
使用剑叶龙血树药用部位5000g可以制成活性成分提取物50～1250g，以上剑叶龙血树药用部位500g是以生药计算的，此剂量可制成药物制剂1000剂，所述1000剂指，制成的成品药物制剂，如制成胶囊制剂1000粒，片剂1000片，颗粒剂1000袋，口服液1000安瓶等，作为颗粒剂也可以制成大包装，如100～500袋，具体可以是100袋、125袋、200袋、250袋、500袋等，每袋可作为1次服用剂量。
以上剂量，可制成50～1000次服用剂量的制剂，如作为片剂，制成1000片，每次服用剂量可以是1～20片，共可服用50～1000次。如作为颗粒剂，制成125袋，每次服用1～2袋，共可服用62.5～125次。
本发明的中药制剂，是通过将剑叶龙血树经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为药物活性物质，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成的。所述活性物质可以通过提取中药原料得到，也可以通过其他方式得到，如通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等法得到，提取方法可以采取超声提取、微波提取、超临界提、大孔树脂提取等，这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根据制剂的不同需要，制成不同的浓度。提取时使用合适的溶剂，这些溶剂可选自，水、乙醇、甲醇、丙醇、丙酮、丁酮、醋酸乙酯、正丁醇等，溶液的碱化可以使用氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠等，PH值的范围为7～14。
本发明的药物制剂中的活性物质提取物，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1～99.9％，其余为药物可接受的载体。本发明的药物制剂，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，注射剂的每支等，单位剂量中，含有活性物质的量为50～1250mg，优选的是150～800mg。
本发明的药物制剂可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、糖浆剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、注射剂、栓剂、霜剂、喷雾剂、滴丸剂、贴剂、缓释制剂、控释制剂等。
本发明的药物制剂，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。
适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或合剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇-油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。
对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
本发明的药物制剂，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的制剂在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服1～4次，每次1～20剂，如1～20粒或片。
本发明的药物制剂样品用留样观察法，在模拟上市包装条件下，置常温和自然条件下放置一年半，按临床研究用质量标准检查，除当月检验外，前三个月每月检验一次，以后每半年检查一次，结果表明各项指标均符合质量标准规定，且与0月比较未见明显变化，初步表明，产品质量稳定。
本发明还提供本发明制剂的质量控制方法，该法同时可以用来控制以其为原料的中成药的内部质量，如上述方法生产的片剂、胶囊、注射液、颗粒、滴丸、贴片、丸剂等药物制剂的质量。本发明的药物制剂的质量控制方法，包括以下步骤a.鉴别b.检查c.含量测定其中鉴别采用以下方法(1)取片剂或胶囊剂约0.5g，加氯仿10ml，振摇10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取龙血素A和龙血素B对照品，加氯仿制成每1ml各含0.25mg的溶液，作为对照品溶液，按照中国药典2000年版一部附录VIB规定的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以比例为8∶3∶1的石油醚-酯酸乙酯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取片剂或胶囊剂约5mg，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取7，4’-二羟基黄酮对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。按照中国药典2000年版一部附录VIB规定的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以比例为8∶1的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；其中检查采用以下方法(1)干燥失重取片剂或胶囊剂1.0g，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(中国药典2000年版一部附录IX G)；(2)炽灼残渣 取片剂或胶囊剂1.0g，依法检查(中国药典2000年版一部附录IX J)，遗留残渣不得过3.0％；(3)重金属 取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查(中国药典2000年版一部附录IX E第二法)，含重金属不得过百万分之二十；其中含量测定采用以下方法对于总酚，含量测定的方法为(1)7，4’-二羟基黄酮标准曲线的制备 精密称取干燥至恒重的7，4’-二羟基黄酮对照品10mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作储备液。取储备液2ml，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液。分别精密量取0ml，1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3.0ml，置25ml量瓶中，分别加无水乙醇5.0ml，4.0ml，3.5ml，3.0ml，2.5ml和2.0ml。再分别依次加入0.1％～1％的十二烷基磺酸钠溶液2ml，0.1％～2％的铁氰化钾溶液1ml，0.1％～2％三氯化铁1ml，摇匀，至暗处放置2～10min后，加0.1M的盐酸定容至刻度，再至暗处放置20～35min。按照中国药典2000年版一部附录V B规定的分光光度法，以0号样品为空白对照，在780±5nm处测定吸收度，在以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；(2)测定 精密称取片剂或胶囊剂10mg，置25ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密吸取供试验品溶液5ml，置25ml量瓶中，按照标准曲线制备项下方法，自“依次加入0.1％～1％的十二烷基磺酸钠溶液2ml”起，依法测定，从标准曲线上读出重量，计算，即得，本品按干燥品计算，含总酚以7，4’-二羟基黄酮(C15H10O3)计算，不得少于50％；对于龙血素A和龙血素B，含量测定的方法为(1)照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定；
(2)色谱条件和系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-冰醋酸溶液(1→95)(33.5∶66.5)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按龙血素A和龙血素B峰计算应不低于3000；(3)对照品溶液的制备 精密称取80℃下减压干燥至恒重的龙血素A和龙血素B对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；(4)供试品溶液的制备 取本品约40mg，精密称定，加0.35％的氢氧化钠溶液25ml，微热使溶解，放冷，用醋酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，用水25ml洗涤，分取醋酸乙酯提取液，蒸发至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(5)测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含龙血素A(C17H18O4)，不得少于3.0mg；含龙血素B(C18H20O5)，不得少于4.0mg。
以下通过药效实验说明本发明的有益效果，所用药物为本发明实施例1的药物制剂，在此实验中称为血脉康。
药效学实验1、犬心肌缺血实验结果表明血脉康120mg/kg、60mg/kg、30mg/kg经十二指肠给药能明显降低犬冠状动脉结扎所致心肌梗塞的ΔN-ST和Δ∑-ST水平(P＜0.05，P＜0.01)；能明显减少血清中CPK、LD、LDH、MDA释放，增强SOD活性(P＜0.05，P＜0.01)；明显缩小心肌梗塞范围(P＜0.05，P＜0.01)。对心肌缺血犬的动脉收缩压(SAP)、动脉舒张压(DAP)、平均动脉压(MAP)影响均不显著(P＞0.05)。十二指肠给予血脉康高剂量组能抑制加快的心率，与模型组比较差异显著(P＜0.05)。提示血脉康能明显减轻心肌缺血程度。
2、犬心脏血流动力学试验结果表明血脉康120mg/kg、60mg/kg、30mg/kg与阴性对照组比较对犬血压(SAP、DAP、MAP)、心率无显著性差异(P＞0.05)。能明显增加冠脉流量、心输出量、每搏输出量、心脏指数、心搏指数(P＜0.05，P＜0.01)，降低外周阻力。
3、血脉康360mg/kg、180mg/kg、90mg/kg三个剂量对垂体后叶素所致的大鼠心肌缺血现象有明显保护作用(P＜0.01，P＜0.05)。
4、血脉康720mg/kg、360mg/kg、180mg/kg三个剂量连续7天灌胃给药，能明显延长因夹闭小鼠气管而导致的心肌缺氧的死亡时间(P＜0.01)。
5、血脉康360mg/kg、180mg/kg、90mg/kg三个剂量对血瘀证模型大鼠的血液流变学有明显影响，可以显著降低全血及血浆粘度，抑制血小板聚集(P＜0.01，P＜0.05)。
毒理实验1、小鼠急性毒性试验本品经LD50预试表明本品无法求出小鼠的LD50值，最大给药量测定以最大药物浓度0.5g/ml，最大给药体积0.8ml/20g，灌胃给药二次。给药后连续观察14天，结果小鼠无一只死亡，给药后活动正常，未发现小鼠在进食、呼吸、心率、毛发色泽等方面的异常。表明血脉康最大给药量为40g/kg，为临床拟用剂量的1333.33倍(临床拟用剂量为0.03g/kg)。
2、大鼠长期毒性试验本品2.00g/kg，1.00g/kg，0.5g/kg原料药(相当于临床拟用剂量的66.7倍、33.3倍、16.67倍)，灌胃给药，每天给药1次，每周给药6天，共给药6个月。于给药后3个月、6个月及恢复期每组中各取10只、20只、10只大鼠，雌雄各半，进行系统检测。观察大鼠的一般表现、食耗量、体重变化；测量动物血液学指标、血液生化学指标。试验结果表明，血脉康高剂量(2.00g/kg原料药)6个月的白细胞和淋巴细胞、中剂量(1.00g/kg原料药)恢复期血小板、低剂量(0.5g/kg原料药)恢复期淋巴细胞与相应时间点对照组相比有明显差异(P＜0.05)，该药高剂量3个月的总蛋白、天门冬氨酸氨基转换酶、中剂量3个月的白蛋白、低剂量3个月的总蛋白与相应时间点对照组相比有明显差异(P＜0.05，P＜0.01)，但这些数值仍在正常范围内。除此之外，血液学及血液生化学其余数值与相应时间点对照组相比均无明显差异(P＞0.05)。系统尸解，对12种脏器指数及18种脏器病理组织学进行检测。结果未发现与服用该药有关的毒副作用。
3、Beagle犬长期毒性试验本品1.8g/kg，0.9g/kg，0.45g/kg原料药(相当于临床拟用剂量的60倍、30倍、15倍)，灌胃给药(ig)，每天一次，每周给药6天，于给药前、给药后1.5个月、给药后3个月、给药后6个月及恢复期(8个月)测量动物的心电图、血液学指标、血液生化学指标及尿常规指标，并于给药前及给药过程中观察动物的一般表现，记录食耗量和体重变化。于给药后3个月、6个月、恢复期每组分别对2只、4只、2只动物进行系统尸解，计算12种脏器指数，并对23种脏器进行病理组织学检测。结果表明，血脉康高剂量于给药前单核细胞绝对值明显高于对照组(P＜0.05)，淋巴细胞百分率明显低于对照组(P＜0.05)，给药1.5个月单核细胞绝对值明显高于对照组(P＜0.05)，红细胞比容明显低于对照组(P＜0.05)；中剂量于给药前中性粒细胞明显高于对照组(P＜0.05)，红细胞明显低于对照组(P＜0.05)，血红蛋白和红细胞比容明显低于对照组(P＜0.01)；低剂量于给药前白细胞及中性粒细胞明显高于对照组(P＜0.05，P＜0.01)，单核细胞明显低于对照组(P＜0.05)，红细胞明显低于对照组(P＜0.05)，血红蛋白和红细胞比容明显低于对照组(P＜0.01)，给药6个月淋巴细胞百分率明显高于对照组(P＜0.05)，恢复期红细胞明显高于对照组(P＜0.05)。血液生化学指标检测结果表明，高剂量组于给药前尿素和肌酐明显高于对照组(P＜0.05，P＜0.01)，给药1.5个月球蛋白明显低于对照组(P＜0.05)；中剂量组于给药前总胆红素明显低于对照组(P＜0.05)，恢复期总蛋白、尿素和球蛋白明显高于对照组(P＜0.05)；低剂量3个月谷丙转胺酶明显高于对照组(P＜0.05)，6个月谷丙转胺酶明显低于对照组(P＜0.05)。但以上这些数值均在正常范围之内。除此之外，该药对受试犬的一般表现、体重变化、其他血液学指标、心电图指标、各项尿常规指标、其他血液生化学指标、脏器指数及23个脏器组织学均无明显影响。

实施例1活性物质提取物的制备
取剑叶龙血树含脂木材500g，粉碎成粗粉，加含0.5‰氢氧化钠的70％乙醇回流提取二次，每次加8倍量，每次1小时，滤过，滤液合并，回收乙醇，至无醇味，放冷，加10％的盐酸调节pH值为2，放置10小时，滤过，沉淀加水洗涤至中性，干燥，粉碎成粗粉，加醋酸乙酯回流提取二次，每次加8倍量，每次1小时，滤过，滤液合并，回收醋酸乙酯并减压浓缩至相对密度为1.1～1.6(80℃)的稠膏，85℃以下干燥，粉碎，过筛，即得。
实施例2胶囊剂的制备制法实施例1得到的细粉为药物活性物质提取物，按药用剂型添加辅料，制成胶囊剂1000粒、实施例3片剂的制备制法实施例1得到的细粉为药物活性物质提取物，按药用剂型添加辅料，制成片剂1000片。
实施例4颗粒剂的制备制法实施例1得到的细粉为药物活性物质提取物，按药用剂型添加辅料，制成冲剂250袋。
实施例5口服液的制备制法实施例1得到的细粉为药物活性物质提取物，按药用剂型添加辅料，制成口服液1000支。
实施例6丸剂的制备制法实施例1得到的细粉为药物活性物质提取物，按药用剂型添加辅料，制成丸剂1000丸。


本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的制剂及其制备方法和质量控制方法，特别是涉及用剑叶龙血树经提取加工制成的中药制剂。