专利名称：一种鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法苦瓜起源于热带、亚热带地区，性喜高温，低温条件下生长发育不良，限制了苦瓜的种植范围和上市时节。目前的苦瓜品种在耐冷性方面还不能满足市场的需求，尤其是我国华北、东北及西北地区日光温室条件下，急切需要耐冷性强的品种。耐冷材料的鉴定和筛选是选育耐冷品种的关键。但从现有的报道来看，对耐冷性鉴定的研究以黄瓜、番茄和辣椒等材料居多，苦瓜在耐冷性鉴定方面的研究鲜有报道。尽管已有相关报道表明，苦瓜耐冷性与保护性酶系统·(SOD、CAT和POD)、可溶性糖、丙二醛等有关，但是这些生理指标的测定程序相对繁琐，并且需要一定的实验场所等。黄玉辉等利用光照培养箱中对4叶I心期的苦瓜幼苗进行10°C处理7天，并计算冷害指数。我们研究发现，在光照培养箱中10°C连续处理7天后，植株瘦弱，茎干变细长，叶片变小，没有明显的叶片萎焉或者失水现象，不能够显著区分苦瓜材料之间的耐冷性。
本发明提供了一种鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法，旨在解决目前的苦瓜品种在耐冷性方面还不能满足市场的需求，以及现有技术无法提供耐冷材料的鉴定和筛选的方法，阻碍了耐冷品种的选育的问题。本发明的目的在于提供一种鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法，该方法包括以下步骤步骤一，根据田间观察选取6份耐冷性不同的苦瓜材料，随机抽取发育成熟且颗粒饱满的苦瓜种子；步骤二，将苦瓜种子用纱布包裹，在50°C -55°C温水中烫种15分钟并不断搅拌，再用25°C的温水浸种24小时，将浸泡好的种子流水下清洗干净，置于30°C恒温箱中催芽至露白；步骤三，用36孔穴盘，在经百菌清消毒的营养土进行播种；步骤四，苦瓜苗龄为4叶I心时，在人工气候箱中冷害处理七天；步骤五，根据苦瓜在冷害处理过程的表型变化，将形态冷害程度划分为五级，采用叶色变化和冷害叶片数两个外观形态指标，进行定量分级，并制定苦瓜耐冷形态评价指标及指标等级的分级标准；步骤六，根据公式冷害指数=Σ (各级株数X级数)/总株数Χ5，计算冷害指数；步骤七，根据以上耐冷性调查分级结果及冷害指数，进行耐冷性评价鉴定，并确定耐涝等级及命名。进一步，在步骤一中，根据田间观察选取6份耐冷性不同的苦瓜材料的实现方法为在田间管理一致的情况下，对株高达2m的成株期苦瓜材料进行观察，利用自然界低温进行大田筛选，根据低温条件下死亡时间确定材料耐冷能力，最早死亡的为冷敏材料；最后死亡的为耐冷材料，其余为中等耐冷材料。进一步，在步骤三中，在营养土中基质与土的比例为2 I。进一步，在步骤三中，所述用36孔穴盘，在经百菌清消毒的营养土进行播种的实现方法为在每个穴孔中间插深约Icm穴，将已发芽的种子平放穴内，盖上I. 5-2cm厚的过筛细土，上铺双层湿报纸保湿。 进一步，在步骤四中，对苗龄为4叶I心的苦瓜冷处理的条件为白天/夜间为IO0C /5°C，光照处理白天/夜间为12小时/12小时。进一步，在步骤五中，苦瓜耐冷形态评价指标及指标等级的分级标准为O级无受害症状；1级叶片无皱缩,第一或第二叶叶缘发黄或略失水,第三叶和心叶无受害症状；2级叶片稍皱缩，第一叶和第二叶叶缘严重失水，第三叶叶缘发黄或略为失水,心叶无明显受害症状；3级叶片皱缩,第一叶和第二叶中部出现脱水斑,第三叶叶缘严重失水，心叶轻微失水；4级叶片严重皱缩，第一叶和第二叶脱水斑连接成片，叶片萎蔫，第三叶中部始显脱水斑，心叶失水明显，但常温下心叶尚能恢复；5级所有叶片严重失水萎蔫，幼苗在常温下不能恢复。进一步，在步骤七中，耐冷性评价鉴定的标准为极耐冷，O彡冷害指数< O. I ；耐冷，O. I彡冷害指数< O. 3 ；中等耐冷，O. 3彡冷害指数< O. 5 ；较不耐冷，O. 5彡冷害指数< O. 7 ；不耐冷，O. 7彡冷害指数彡I. O。进一步，根据以上耐冷性分级调查结果和耐冷性分级评价结果，参照苦瓜耐冷性鉴定标准品种进行耐冷性鉴定，耐冷性鉴定标准品种定为台湾品种“亮玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;台湾品种“碧玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;四川地方品种“白皮苦瓜”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 2 ;湖南品种“湘研-3”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 25 ;四川品种“2号小白苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 3 O. 4 ;广东品种“槟城苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;广东品种“长绿苦瓜”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;湖南品种“湘研-2”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 45 O. 5 ;泰国品种“青皮苦瓜”为不耐冷品种,耐冷性指数为O. 75 O. 8 ;湖南品种“鼎牌苦瓜”为不耐冷品种，耐冷性指数为O. 8 O。本发明提供的鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法，根据田间观察选取6份耐冷性不同的苦瓜材料，随机抽取发育成熟且颗粒饱满的苦瓜种子；将苦瓜种子用纱布包裹，在500C -55°C温水中烫种15分钟并不断搅拌，再用25°C的温水浸种24小时，将浸泡好的种子流水下清洗干净，置于30°C恒温箱中催芽至露白；用36孔穴盘，在经百菌清消毒的营养土进行播种；苦瓜苗龄为4叶I心时，在人工气候箱中冷害处理七天；根据苦瓜在冷害处理过程的表型变化，将形态冷害程度划分为五级，采用叶色变化和冷害叶片数两个外观形态指标，进行定量分级，并制定苦瓜耐冷形态评价指标及指标等级的分级标准；根据公式冷害指数=Σ (各级株数X级数)/总株数X 5，计算冷害指数；根据以上耐冷性调查分级结果及冷害指数，进行耐冷性评价鉴定，并确定耐涝等级及命名；该鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法的利用，使得评价、鉴定、筛选耐冷性苦瓜育种中间材料的工作具有了更强的操作性，减少了因个体主观性及经验的差异而导致的误差，提高了科学性及准确性，提高了苦瓜耐冷育种的客观性和效率；可根据苦瓜品种的耐冷性指数高低，设立以耐冷性为基本量度的苦瓜耐冷秋冬和早春设施栽培品种准入条件和标准，明确其是否可作为秋冬和早春设施栽培品种使用，可在耐低温苦瓜设施栽培专用育种中对育种材料的耐冷性进行准确把握和评估，对材料的利用提供科学依据，鉴定并筛选出适宜于秋冬和早春设施栽培的品种，淘汰耐冷性差的品种，促进了耐低温苦瓜设施专用品种选育工作的开展和研究，加快了苦瓜育种工作的进程。 图I是本发明实施例提供的鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法的实现流程图；图2是本发明实施例提供的苦瓜冷害分级标准的示意图；图3是本发明实施例提供的苦瓜叶片冷害程度的示意图。图中1、叶片无受害；2、叶片边缘轻微失水；3、叶片失水严重，无皱缩；4、叶片中度失水，轻微皱缩；5、叶片严重失水，皱缩；6、叶片严重失水，严重皱缩。I.5-2cm厚的过筛细土，上铺双层湿报纸保湿。 在本发明实施例中，在步骤S104中，对苗龄为4叶I心的苦瓜冷处理的条件为白天/夜间为10°c /5°C，光照处理白天/夜间为12小时/12小时。在本发明实施例中，在步骤S105中，苦瓜耐冷形态评价指标及指标等级的分级标准为O级无受害症状；1级叶片无皱缩,第一或第二叶叶缘发黄或略失水,第三叶和心叶无受害症状；2级叶片稍皱缩，第一叶和第二叶叶缘严重失水，第三叶叶缘发黄或略为失水,心叶无明显受害症状；3级叶片皱缩,第一叶和第二叶中部出现脱水斑,第三叶叶缘严重失水，心叶轻微失水；4级叶片严重皱缩，第一叶和第二叶脱水斑连接成片，叶片萎蔫，第三叶中部始显脱水斑，心叶失水明显，但常温下心叶尚能恢复；5级所有叶片严重失水萎蔫，幼苗在常温下不能恢复。在本发明实施例中，在步骤S107中，耐冷性评价鉴定的标准为极耐冷，O彡冷害指数< O. I ；耐冷，O. I彡冷害指数< O. 3 ；中等耐冷，O. 3彡冷害指数< O. 5 ；较不耐冷，O. 5彡冷害指数< O. 7 ;不耐冷，O. 7彡冷害指数彡I. O。在本发明实施例中，根据以上耐冷性分级调查结果和耐冷性分级评价结果，参照苦瓜耐冷性鉴定标准品种进行耐冷性鉴定，耐冷性鉴定标准品种定为台湾品种“亮玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;台湾品种“碧玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;四川地方品种“白皮苦瓜”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 2 ;湖南品种“湘研-3”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 25 ;四川品种“2号小白苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 3 O. 4 ;广东品种“槟城苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;广东品种“长绿苦瓜”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;湖南品种“湘研-2”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 45 O. 5 ;泰国品种“青皮苦瓜”为不耐冷品种,耐冷性指数为O. 75 O. 8 ;湖南品种“鼎牌苦瓜”为不耐冷品种，耐冷性指数为O. 8 O。
下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。本发明实施例提供了一种鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法，该方法包括以下步骤(I)冷处理苦瓜苗龄为4叶I心时在人工气候箱中进行冷处理，温度处理白天/夜间为10°c /5°C，光照处理白天/夜间为12小时/12小时，连续处理7天；如图2及图3所示，苦瓜耐冷形态评价指标及指标等级的分级标准为O级.无受害症状；I级.叶片无皱缩,第一或第二叶叶缘发黄或略失水,第三叶和心叶无受害症状；2级.叶片稍皱缩，第一叶和第二叶叶缘严重失水，第三叶叶缘发黄或略为失水，心叶无明显受害症状；
3级.叶片皱缩,第一叶和第二叶中部出现脱水斑,第三叶叶缘严重失水,心叶轻微失水；4级.叶片严重皱缩，第一叶和第二叶脱水斑连接成片，叶片萎蔫；第三叶中部始显脱水斑，心叶失水明显，但常温下心叶尚能恢复；5级.所有叶片严重失水萎蔫，幼苗在常温下不能恢复。(3)根据以上耐冷性调查分级结果，进行耐冷性评价鉴定，鉴定标准定为极耐冷，O彡冷害指数< O. I ；耐冷，O. I彡冷害指数< O. 3 ；中等耐冷，O. 3彡冷害指数< O. 5 ；较不耐冷，O. 5彡冷害指数< O. 7 ；不耐冷，O. 7彡冷害指数彡I. O ；根据冷害指数，依据以下评价方案确定7级制的耐涝等级及命名(4)根据公式冷害指数=Σ (各级株数X级数)/总株数Χ5，计算冷害指数。根据以上耐冷性分级调查结果和耐冷性分级评价结果，参照苦瓜耐冷性鉴定标准品种进行耐冷性鉴定，耐冷性鉴定标准品种定为台湾品种“亮玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;台湾品种“碧玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;四川地方品种“白皮苦瓜”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 2 ;湖南品种“湘研-3”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 25 ;四川品种“2号小白苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 3 O. 4 ;广东品种“槟城苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;广东品种“长绿苦瓜”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;湖南品种“湘研-2”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 45 O. 5 ;泰国品种“青皮苦瓜”为不耐冷品种,耐冷性指数为O. 75 O. 8 ;湖南品种“鼎牌古瓜”为不耐冷品种，耐冷性指数为O. 8 O. 9 ;该方法的具体实施步骤如下(I)种子取样根据田间观察(在田间管理一致的情况下，对株高达2m的成株期苦瓜材料进行观察，利用自然界低温进行大田筛选，根据低温条件下死亡时间确定材料耐冷能力，最早死亡的为冷敏材料；最后死亡的为耐冷材料，其余为中等耐冷材料)选取6份耐冷性不同的苦瓜材料(表一)，随机抽取发育成熟且颗粒饱满的苦瓜新种子；
(2)浸种催芽将苦瓜种子用纱布包裹，50°C -55°C温水烫种15分钟并不断搅拌，再用25°C的温水浸种24小时。将浸泡好的种子流水下清洗干净，置于30°C恒温箱中催芽
至露白。(3)播种用36孔穴盘，用百菌清消毒的营养土(基质土= 2 I)进行播种。播种时，在每个穴孔中间插深约Icm穴，将已发芽的种子平放穴内，盖上I. 5-2cm厚的过筛细土，上铺双层湿报纸保湿。(4)冷处理苦瓜苗龄为4叶I心时在人工气候箱中冷处理，温度处理白天/夜间为10°C /5°C，光照处理白天/夜间为12小时/12小时，连续处理7天；(5)苦瓜耐冷形态评价指标及指标等级的确定根据苦瓜在冷处理过程中的表型变化，选择叶片形态、叶片失水情况。
O级.无受害症状；I级.叶片无皱缩,第一或第二叶叶缘发黄或略失水,第三叶和心叶无受害症状；2级.叶片稍皱缩，第一叶和第二叶叶缘严重失水，第三叶叶缘发黄或略为失水，心叶无明显受害症状；3级.叶片皱缩,第一叶和第二叶中部出现脱水斑,第三叶叶缘严重失水,心叶轻微失水；4级·叶片严重皱缩，第一叶和第二叶脱水斑连接成片，叶片萎蔫；第三叶中部始显脱水斑，心叶失水明显，但常温下心叶尚能恢复；5级.所有叶片严重失水萎蔫，幼苗在常温下不能恢复。(6)苦瓜苗期耐冷等级的确定根据公式冷害指数=Σ (各级株数X级数)/总株数X5。据冷害指数，依据以下评价方案确定5级制的耐涝等级及命名极耐冷，OS冷害指数<0.1;耐冷，O. I彡冷害指数< O. 3 ；中等耐冷，O. 3彡冷害指数<0.5;较不耐冷，O. 5彡冷害指数<0.7;不耐冷，O. 7彡冷害指数彡I. O ；根据以上耐冷性分级调查结果和耐冷性分级评价结果，参照苦瓜耐冷性鉴定标准品种进行耐冷性鉴定，耐冷性鉴定标准品种定为台湾品种“亮玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;台湾品种“碧玉”为极耐冷标准品种，植株无受害情况，耐冷性指数为O O. I ;四川地方品种“白皮苦瓜”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 2 ;湖南品种“湘研-3”为耐冷品种，耐冷性指数为O. I O. 25 ;四川品种“2号小白苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 3 O. 4 ;广东品种“槟城苦瓜”为中等耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;广东品种“长绿苦瓜”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 4 O. 45 ;湖南品种“湘研-2”为较不耐冷品种，耐冷性指数为O. 45 O. 5 ;泰国品种“青皮苦瓜”为不耐冷品种,耐冷性指数为O. 75 O. 8 ;湖南品种“鼎牌苦瓜”为不耐冷品种，耐冷性指数为O. 8 O. 9 ;
该鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法的利用，使得评价、鉴定、筛选耐冷性苦瓜育种中间材料的工作具有了更强的操作性，减少了因个体主观性及经验的差异而导致的误差，提高了科学性及准确性，提高了苦瓜耐冷育种的客观性和效率；可根据苦瓜品种的耐冷性指数高低，设立以耐冷性为基本量度的苦瓜耐冷秋冬和早春设施栽培品种准入条件和标准，明确其是否可作为秋冬和早春设施栽培品种使用。采用该鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法，可在耐低温苦瓜设施栽培专用育种中对育种材料的耐冷性进行准确把握和评估，对材料的利用提供科学依据，促进了耐低温苦瓜设施专用品种选育工作的开展和研究，加快了苦瓜育种工作的进程。同时，可对目前生产中苦瓜品种是否适宜作秋冬和早春设施栽培低温环境中种植进行量化评价，鉴定并筛选出适宜于秋冬和早春设施栽培的品种，淘汰耐冷性差的品种，以免由于选用品种不当造成的损失。 本发明实施例提供的鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法，根据田间观察选取6份耐冷性不同的苦瓜材料，随机抽取发育成熟且颗粒饱满的苦瓜种子；将苦瓜种子用纱布包裹，在500C -55°C温水中烫种15分钟并不断搅拌，再用25°C的温水浸种24小时，将浸泡好的种子流水下清洗干净，置于30°C恒温箱中催芽至露白；用36孔穴盘，在经百菌清消毒的营养土进行播种；苦瓜苗龄为4叶I心时，在人工气候箱中冷害处理七天；根据苦瓜在冷害处理过程的表型变化，将形态冷害程度划分为五级，采用叶色变化和冷害叶片数两个外观形态指标，进行定量分级，并制定苦瓜耐冷形态评价指标及指标等级的分级标准；根据公式冷害指数=Σ (各级株数X级数)/总株数X 5，计算冷害指数；根据以上耐冷性调查分级结果及冷害指数，进行耐冷性评价鉴定，并确定耐涝等级及命名；该鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法的利用，使得评价、鉴定、筛选耐冷性苦瓜育种中间材料的工作具有了更强的操作性，减少了因个体主观性及经验的差异而导致的误差，提高了科学性及准确性，提高了苦瓜耐冷育种的客观性和效率；可根据苦瓜品种的耐冷性指数高低，设立以耐冷性为基本量度的苦瓜耐冷秋冬和早春设施栽培品种准入条件和标准，明确其是否可作为秋冬和早春设施栽培品种使用，可在耐低温苦瓜设施栽培专用育种中对育种材料的耐冷性进行准确把握和评估，对材料的利用提供科学依据，鉴定并筛选出适宜于秋冬和早春设施栽培的品种，淘汰耐冷性差的品种，促进了耐低温苦瓜设施专用品种选育工作的开展和研究，加快了苦瓜育种工作的进程。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。


本发明属于植物栽培与育种技术领域，提供了一种鉴定苦瓜苗期耐冷能力的方法，使评价、鉴定、筛选耐冷性苦瓜育种中间材料的工作具有了更强的操作性，减少了因个体主观性及经验的差异而导致的误差，提高了苦瓜耐冷育种的客观性和效率；可根据苦瓜品种的耐冷性指数高低，设立以耐冷性为基本量度的苦瓜耐冷秋冬和早春设施栽培品种准入条件和标准，明确是否可作为秋冬和早春设施栽培品种使用，可在耐低温苦瓜设施栽培专用育种中对育种材料的耐冷性进行准确把握和评估，对材料的利用提供科学依据，鉴定并筛选出适宜于秋冬和早春设施栽培的品种，淘汰了耐冷性差的品种，促进了耐低温苦瓜设施专用品种选育工作的开展和研究，加快了苦瓜育种工作的进程。