专利名称：月季花用于制备抗真菌药物增效剂产品的用途的制作方法月季花为蔷薇科蔷薇属植物月季的花，其根、叶也入药。月季花味甘、性温，入肝经，有活血调经、消肿解毒之功效。由于月季花的祛瘀、行气、止痛作用明显，故常被用于治疗月经不调、痛经等病症。未见其与抗真菌药物联合使用抗真菌的报道。
本发明提供一种月季花用于制备抗真菌药物增效剂产品的用途。经体外细胞实验证实，其对氟康唑、伊曲康唑、酮康唑等抗真菌药物有明显的增效作用，对于临床耐药性菌株，当抗真菌药物和月季花提取物合用时，能明显降低抗真菌药物的用药剂量，增强对耐药真菌的抑制作用。因此月季花可用于制备抗真菌药物增效剂产品，用于不同深部和浅部真菌感染的治疗。图I为本发明实施例3中ICR小鼠感染白念珠菌0304103后的生存曲线图。在图I中，横坐标为感染天数(d)，纵坐标为累积存活率(％ )。 发明效果本发明为月季花开辟了新的用途，将其用于抗真菌药物的增效剂，不仅能提高药物的抗真菌作用，而且在临床治病真菌耐药性日趋普遍，耐药程度日趋严重的情况，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，具有良好的临床应用前景。实施方式以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例I :月季花和氟康唑联用对不同临床真菌株的作用材料和方法I.试药月季花的药材原料是蔷薇科植物月季的干燥花。提取过程把粉碎后的药材粉末加入IOOOml圆底烧瓶中，加入70%乙醇水浴回流2h，回流液过滤，放入已称重的烧瓶中，50°C左右减压旋蒸至粘稠浸膏状。在烧瓶中加入蒸馏水，加热使充分溶解(取出少许作为水提液，得到lg/ml的生药浓度)，再加入与蒸馏水等量的无水乙醇，加热充分混匀，合并提取液混匀，得O. 5g/ml的生药浓度，取少许到EP管中做体外实验。氟康唑注射液辉瑞制药有限公司，批号9149102。各试药置于-20。°C保存。实验前，将药物取出置于35°C温箱融化，充分混匀，分别进行药效学检验。2.菌株临床株耐药白念珠菌(100、904、953)，近平滑念珠菌(90018)，克柔念珠菌(4996)，热带念珠菌(2718)，均由上海长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌等球状菌于30°C培养2周后，分别挑取单克隆 再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4°C保存备用。3.培养液RPMI 1640液体培养液RPMI1640 (Gibco BRL) 10g，NaHOT3 2. Og,吗啡啉丙磺酸(MOPS)(Sigma) 34. 5g(0. 165M)，加三蒸水 900ml 溶解，IN NaOH 调 pH 至 7. 0(25°C )，三蒸水定容至1000ml, O. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌，分装后于4°C保存备用。沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA)蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，以三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。YEPD 培养液酵母浸膏IOg,蛋白胨20g,葡萄糖20g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。4.仪器设备Multiskan MK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems产品)隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)Sff-CT-IF型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)5.菌液制备实验前，用接种圈从4°C保存的SDA培养基上挑取白念珠菌、热带念珠菌等球状菌少量，接种至Iml YEPD培养液，于30°C，200rpm振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至ImlYEro培养液中，用上述方法再次活化，16h后，用血细胞计数板计数，以RPMI 1640培养液调整菌液浓度至I X IO3 5 X 103CFU/ml。6.药敏板制备取无菌96孔板，于每排I号孔加RPMI 1640液体培养基100 μ I作空白对照；3 12号孔各加新鲜配制的菌液99 μ I ;2号孔分别加菌液196μ I和6. 4mg/ml氟康唑2 μ I ；12号孔不含药物，只加菌液100 μ I作阳性生长对照。调配不同浓度的月季花提取物。在2号孔加相应浓度的月季花提取物2 μ 1，3 11号孔各加I μ I。对2 11号孔进行10级倍比稀释，使各孔的最终氟康唑浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0. 5,0. 25和O. 125 μ g/ml，而月季花提取物的浓度保持恒定，各孔中DMSO含量均低于1%。将各药敏板于30°C恒温箱培养。7. MIC8。值判定在30°C恒温箱中，念珠菌培养48h后，用酶标分析仪于630nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80%以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC8tl (真菌生长80%被抑制时的药物浓度)。当药物的MIC8tl值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计=MICm值高于最高浓度64 μ g/ml时,计为“> 64 μ g/ml” ；MIC80值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“彡O. 125yg/ml”。上述实验均平行操作2到3次，当MIC8tl值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC8tl值；当MIC8tl值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。实验结果见表I表I月季花与氟康唑合用对不同临床菌株的MIC8tl值(μ g/ml)


本发明涉及医药技术领域，是月季花用于制备抗真菌药物增效剂产品的用途。经体外实验，月季花提取物与氟康唑、伊曲康唑和酮康唑等抗真菌药合用，能不同程度地提高对浅表部和深部真菌感染的治疗效果，并能使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用。因此可用作抗真菌药物的增效剂。