一种用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽的制作方法[0002]转基因技术是借助基因工程和分子生物学手段，将人工分离和修饰的外源基因导入到生物体基因组中，使其在水生生物体内整合和表达，由于导入外源基因的表达，引起生物体性状的修饰，产生具有新的遗传特性的水产生物。这种利用现代生物技术手段进行的遗传改良的基因设计和基因操作技术称之为转基因技术。在水产水生动物中已经发展了显微注射法、电穿孔法、精子载体法、基因枪法、脂质体法、胚胎干细胞载体法、逆转录病毒载体法、体细胞核移植技术、激光转移技术等。各种方法各有优缺点，可根据不同的水生动物和不同目的，选择不同的方法使用。而电穿孔法进行鱼类基因转移法由于具有操作简单方便，一次可处理大批量卵，可获得大量的转基因实验群体等优点而被广泛实施，电穿孔法的原理是使精子产生一定大小的孔并维持一段时间，以便外源基因得以进入，而“开孔”的关键因子主要有脉冲幅度(强度)、脉冲数(影响放电时间)和循环数。[0003]而现有技术的问题在于电穿孔装置中的两个放电电极是点状放电，产生的作用电场较弱，导致鱼卵与外源质粒DNA的整合效率低。实用新型内容[0004]本实用新型的目的是为了解决现有进行鱼类基因转移的电穿孔装置作用电场较弱和整合效率低的问题，而提供一种用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽。[0005]本实用新型用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽由底板、2块槽壁板a、2块槽壁板b和电脉冲仪组成，底板、槽壁板a与槽壁板b围成长方体水槽,2块槽壁板a垂直设置于底板的长边沿上，2块槽壁板b垂直设置于底板的短边沿上并在槽壁面上均开有电极孔，电脉冲仪上的阳极电极和阴极电极分别插入电极孔中，该用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽还有2条钼金丝，第一钼金丝和第二钼金丝沿底板的长边平行布置，其中第一钼金丝的右端与阳极电极相连，第二钼金丝的左端与阴极电极相连。[0006]本实用新型用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽的应用过程是将虹鳟鱼精子和外源基因放入长方体水槽中，调节好各级参数，然后施加一定强度的电脉冲，外源质粒DNA在电脉冲作用下进入精子，达到与精子融合的目的，将融合外源基因的精子与虹鳟鱼卵受精，受精后的虹鳟鱼卵放入孵化槽中孵化。[0007]本实用新型用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽包含如下优点:
[0008]1、操作技术简单，只要控制各级参数及脉冲强度即可；
[0009]2、该虹鳟鱼样品槽结构简单，成本低，实验生产过程不受地点限制，可随时进行改进;
[0010]3、一次可处理大批量受精卵，与正常虹鳟鱼卵受精一样，应用于虹鳟鱼精子和外源基因的融合，可使整合效率达到6%?12% ；
[0011]4、在该虹鳟鱼样品槽中处理虹鳟鱼精子，精子不会发生变态，在低压下可促进外源基因进入精子，再通过卵受精孔进入虹鳟鱼卵。
[0012]5、两个钼金丝增加了点状电极的相对作用面积，提高了效率。



[0013]图1是本实用新型用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽的结构示意图。

[0014]一:本实施方式用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽由底板1、2块槽壁板a2、2块槽壁板b3和电脉冲仪9组成，底板1、槽壁板a2与槽壁板b3围成长方体水槽，2块槽壁板a2垂直设置于底板I的长边沿上，2块槽壁板b3垂直设置于底板I的短边沿上并在槽壁面上均开有电极孔5，电脉冲仪9上的阳极电极7和阴极电极8分别插入电极孔5中，该用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽还有2条钼金丝，第一钼金丝6-1和第二钼金丝6-2沿底板I的长边平行布置，其中第一钼金丝6-1的右端与阳极电极7相连，第二钼金丝6-2的左端与阴极电极8相连。
[0015]本实施方式用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽可适用于各种鱼类精子的电穿孔外源基因转移实验，底板，槽壁板a与槽壁板b围成的电泳槽可一次处理大批量卵子用于外源基因的转移实验，具有操作简便、整合效率高等诸多优点，特别是对那些其它方法难以奏效的细胞具有明显优势。
[0016]二:本实施方式与一不同的是在底板1、槽壁板a2与槽壁板b3围成的长方体水槽上方加盖顶板4。
[0017]三:本实施方式与一或二不同的是底板1、槽壁板a2、槽壁板b3和顶板4的材质均为有机玻璃。
[0018]四:本实施方式与一至三之一不同的是底板1、槽壁板a2和槽壁板b3相互之间通过胶水连接围成长方体水槽。
[0019]五:本实施方式与一至四之一不同的是长方体水槽的长宽比为5: I。
[0020]实施例一:本实施例用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽由底板1、2块槽壁板a2、2块槽壁板b3、顶板4、2条钼金丝和电脉冲仪9组成，底板1，槽壁板a2，槽壁板b3与顶板4围成长方体水槽，2块槽壁板a2垂直设置于底板I的长边沿上，2块槽壁板b3垂直设置于底板I的短边沿上并在槽壁面上均开有电极孔5，电脉冲仪9上的阳极电极7和阴极电极8分别插入电极孔5中，第一钼金丝6-1和第二钼金丝6-2沿底板I的长边平行布置，其中第一钼金丝6-1的右端与阳极电极7相连，第二钼金丝6-2的左端与阴极电极8相连。
[0021]本实施例长方体水槽的长为5厘米，宽为I厘米，高为1.5厘米，两根钼金丝位于槽底部的长边处作为放电电极，并与填充其中的生物液形成回路。
[0022]向长方体水槽中放入虹鳟鱼精子和外源基因，调节好各级参数，然后施加200?300V的电脉冲，使外源质粒DNA在电脉冲作用下进入精子，达到与精子融合的目的。然后将融合外源基因的精子与虹鳟鱼卵受精，受精后的虹鳟鱼卵放入孵化槽中孵化。[0023]该用于外源基因导入的虹鳟鱼样品槽结构简单，组装方便，应用于虹鳟鱼精子和外源基因的融合，可使整合效率达到6%?12%。