一种盐酸溶菌酶口腔喷剂及其制备方法[0003]口腔溃疡是口腔粘膜疾病中发病率最高的一种疾病，普通感冒、消化不良、精神紧张、郁闷不乐等情况均能偶然发生，好发于唇、颊、舌缘等，在粘膜的任何部位均能出现，但在角化完全的附着龈、硬腭则少见。年龄不拘，发病年龄估计在10~20岁之间，女性较多。一年四季均能发生，溃疡有自限性，能在10天左右自愈。若口疮经常发生或此起彼伏称复发性口疮。其病损呈溃疡性损害，溃疡具有周期性、复发性及自限性等特点。虽然至今仍不能完全明确口腔溃疡的确切病因，但专家认为口腔溃疡的发生是多种因素综合作用的结果。免疫、遗传和环境可能是口腔溃疡发病的“三联因素”，即遗传背景与适当的环境因素(包括精神神经体质、心理行为状态、生活工作和社会环境等)可引发异常的免疫反应而出现口腔溃疡特征性病损。也有人提出“二联因素”论，即外源性因素(病毒和细菌)和内源性诱导因素(激素的变化、精神心理因素、营养缺乏、系统性疾病及免疫功能紊乱)相互作用而致病。[0004]盐酸溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β -1, 4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。盐酸溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。[0005]目前在国内盐酸溶菌酶制剂主要以口服固体制剂(肠溶片、普通含片)，肠溶片临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡等；普通盐酸溶菌酶含片临床用于急慢性咽喉炎、口腔黏膜溃疡及咳痰困难。由于普通盐酸溶菌酶含片中的盐酸溶菌酶相当不稳定，在制备过程中需要对颗粒进行烘干，其酶活性不同程度的降低；疗效欠佳。
[0006]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂，本发明还提供盐酸溶菌酶口腔喷剂的制备方法。[0007]本发明的技术方案如下:[0008]一种治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂，组成如下，均为质量份:
[0009]A:盐酸溶菌酶100~220份；
[0010]B:白糖20~32份、甘油10~16份、轻丙基甲基纤维素5~8份、甘氨酸6~10份、注射用水900~1980份；
[0011]先将白糖、甘油与注射用水搅拌加热溶解，再将羟丙基甲基纤维素与注射用水搅拌加热溶解后、将两溶液搅拌混合降温至室温后，在搅拌下将已用注射用水溶解混合好的盐酸溶菌酶、甘氨酸液体，加入上述溶液中，混合均匀，得澄清的胶体溶液；将上述胶体溶液分装于喷瓶中，即得。
[0012]优选的，本发明的治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂，组成如下，均为质量份:
[0013]A:盐酸溶菌酶100~160份；[0014]B:白糖20~26份、甘油10~13份、轻丙基甲基纤维素5~7份、甘氨酸6~8份、注射用水900~1440份。
[0015]进一步优选的，本发明的治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂，组成如下，均为质量份:
[0016]A:盐酸溶菌酶100份；
[0017]B:白糖20份、甘油10份、羟丙基甲基纤维素5份、甘氨酸6份、注射用水900份；
或者
[0018]A:盐酸溶菌酶160份；
[0019]B:白糖26份、甘油13份、羟丙基甲基纤维素7份、甘氨酸8份、注射用水1440份；或者
[0020]A:盐酸溶菌酶130份；
[0021]B:白糖23份、甘油11份、羟丙基甲基纤维素6份、甘氨酸7份、注射用水1170份。
[0022]本发明的治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂的制备方法，步骤如下:
[0023](I)称取盐酸溶菌酶、白糖、甘油、羟丙基甲基纤维素、甘氨酸以及注射用水备用；
[0024](2)在I号溶解罐中加入已称取的白糖、甘油与注射用水，开启搅拌，加热升温至40~60°C，使其完全溶解后备用；
[0025](3)在2号溶解罐中加入已称取的羟丙基甲基纤维素与注射用水，充分搅拌，加热升温70~90°C，使其完全溶解后备用；
[0026](4)将步骤(3)中2号溶解罐中的溶液抽入步骤(2)中I号溶解罐中搅拌均匀后备用;
[0027](5)在3号溶解罐中加入已称取的盐酸溶菌酶、甘氨酸与注射用水，开启搅拌，加热升温至20~40°C，使其完全溶解后备用；
[0028](6)将步骤(5)中3号溶解罐中的溶液抽入步骤(2)中I号溶解罐中在室温下搅拌均匀，得澄清的胶体溶液；将上述胶体溶液分装于喷瓶中，全检、包装即得。[0029]优选的，本发明的治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂的制备方法，步骤如下:
[0030](I)称取盐酸溶菌酶、白糖、甘油、羟丙基甲基纤维素、甘氨酸以及注射用水备用；
[0031](2)在I号溶解罐中加入已称取的白糖、甘油与注射用水，开启搅拌，加热升温至50~60°C，使其完全溶解后备用；
[0032](3)在2号溶解罐中加入已称取的羟丙基甲基纤维素与注射用水，充分搅拌，加热升温80~90°C,使其完全溶解后备用；
[0033](4)将步骤(3)中2号溶解罐中的溶液抽入步骤(2)中I号溶解罐中搅拌均匀后备用;
[0034](5)在3号溶解罐中加入已称取的盐酸溶菌酶、甘氨酸与注射用水，开启搅拌，加热升温至30~40°C，使其完全溶解后备用；
[0035](6)将步骤(5)中3号溶解罐中的溶液抽入步骤(2)中I号溶解罐中在室温下搅拌均匀得澄清的胶体溶液；将上述胶体溶液分装于喷瓶中，全检、包装即得。
[0036]进一步优选的，本发明的治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂的制备方法，步骤如下:
[0037](I)称取盐酸溶菌酶、白糖、甘油、羟丙基甲基纤维素、甘氨酸以及注射用水备用；
[0038](2)在I号溶解罐中加入已称取的白糖、甘油与注射用水，开启搅拌，加热升温至600C，使其完全溶解后备用；
[0039](3)在2号溶解罐中加入已称取的羟丙基甲基纤维素与注射用水，充分搅拌，加热升温90°C,使其完全溶解后备用；
[0040](4)将步骤(3)中2号溶解罐中的溶液抽入步骤(2)中I号溶解罐中搅拌均匀后备用;
[0041](5)在3号溶解罐中加入已称取的盐酸溶菌酶、甘氨酸与注射用水，开启搅拌，加热升温至30°C，使其完全溶解后备用；
[0042](6)将步骤(5)中3号溶解罐中的溶液抽入步骤(2)中I号溶解罐中在室温下搅拌均匀得澄清的胶体溶液；将上述胶体溶液分装于喷瓶中，全检、包装即得。
[0043]本发明所述的治疗急慢性咽喉炎、口腔溃疡的盐酸溶菌酶口腔喷剂具有以下优
占-
^ \.[0044]本发明的盐酸溶菌酶口腔喷剂，采用盐酸溶菌酶为有效成分，与药用辅料混合溶解制成，本品每毫升中含盐酸溶菌酶100毫克(62.5万单位)。所得产品剂型为半透明胶体溶液，本发明盐酸溶菌酶口腔喷剂成型好，色泽均匀，从原料来源及经济角度来看制备成本价格低、易得，质量可控。
[0045]本发明所述的制备方法中盐酸溶菌酶口腔喷剂质量标准如下，但不限以下所述盐酸溶菌酶口腔喷剂标准。
[0046]盐酸溶菌酶口腔喷剂质量标准:
[0047]【性状】本品为类白色或乳白色半透明胶体溶液。
[0048]【鉴别】
[0049](I)取本发明实施例1的盐酸溶菌酶口腔喷剂0.1ml,然后加水2ml使溶解，加10%氢氧化钠溶液5滴与10%硫酸铜溶液I滴，混匀后显紫红色。[0050](2)取2ml本品，加醋酸一醋酸钠缓冲液(取无水醋酸钠6.7g,加水约900ml，振摇使溶解，用醋酸调节pH值至5.4，加水稀释至1000ml,摇匀)制成每Iml中含盐酸溶菌酶0.4mg的溶液，照分光光度法(中国药典2010年版二部附录IV A)测定，在280nm的波长处有最大吸收，吸收度应为0.39~0.49。
[0051]【效价测定】
[0052]取本发明实施例1的盐酸溶菌酶口腔喷剂5ml，加磷酸盐缓冲液(pH6.2)适量，移入200ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH6.2)至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH6.2)至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照盐酸溶菌酶原料项下的方法测定。
[0053]【用法与用量】喷剂含一次0.1ml, 一日4~6次。
[0054]【规格】100mg/ml(62.5万单位)。
[0055]【贮藏】密闭，在阴凉干燥处保存。
[0056]本发明的盐酸溶菌酶口腔喷剂安全、有效、质量可控、使用方便，该口腔喷剂不论是配方、剂型、还是在制备方法中都有显著的独到之处，具体为:
[0057]其中在本发明中，加入稳定剂甘氨酸，甘氨酸与盐酸溶菌酶络合，主要起到以下几方面的作用；
[0058]1、由于盐酸溶菌酶对温度很敏感，随着温度升高，盐酸溶菌酶酶活性降低，在盐酸溶菌酶口腔喷剂制备中，加入甘氨酸络合剂对盐酸溶菌酶活性起到保护作用；
[0059]2、临床作用持续缓慢释放盐酸溶菌酶以达到延长药效目的，所以口感好，使患者更乐于服用。口腔喷剂通过口腔使盐酸溶菌酶能够渗入口腔溃疡敏感组织里，起到抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用。
[0060]3、本发明盐酸溶菌酶口腔喷剂，使盐酸溶菌酶在口腔内专一地作用于肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β_1，4键，从而破坏细菌的细胞壁，使之松驰而失去对细胞的保护作用，最终使细菌溶解死亡；盐酸溶菌酶也可以直接破坏革兰氏阳性菌的细胞壁，而达到杀菌的作用，这主要是因为革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由胞壁质和磷酸质组成，其中胞壁质是由杂多糖和多肽组成的糖蛋白，这种多糖正是由N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β_1，4键联结的。对某些革兰氏阴性菌，如埃希氏大肠杆菌，伤寒沙门氏菌，也会受到盐酸溶菌酶的破坏。
[0061]结合盐酸溶菌酶口腔喷剂的处方，确定辅料，并对其用量进行筛选。使口腔喷剂质量可控，易于工业化生产。
[0062]盐酸溶菌酶对温度很敏感，温度在60°C的条件下，考察加入甘氨酸络合剂量对盐酸溶菌酶活性起到保护作用；结果见表1。
[0063]表1甘氨酸用量筛选结果单位(g)
[0064]