一株兼具硝化功能的反硝化菌株及包含该菌株的多种活性微生物的水体改良剂及制备方法

丁重阳, 张梁, 石贵阳, 顾正华

2012年6月13日

2011年12月20日

2011年12月20日

江南大学

C12N1/20GK102492642SQ201110428358

硝化 及包 菌株 兼具 一株 功能

1.一株兼具硝化功能的反硝化菌株，分类命名为枯草芽孢杆菌subtilis) n-1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO =M 2011443 ；该菌株的发酵培养条件为温度30-40°C，通气量10. 3-2 vvm，搅拌速度200-1000 rpm, D0>30% ；该菌株的固体菌粉制备是将发酵液经过离心或者板框过滤固液分离，再添加抗热保护剂，进行闪蒸干燥或者喷雾干燥，得到固体菌粉，含水量2%-10%，活菌数2X 10"-2X IO12 cfu/g2.包含CCTCCNO =M 2011443菌株的多种活性微生物的水体改良剂，其特征在于配方中包含有(1)含有兼具硝化及反硝化功能的枯草芽孢杆菌CCTCC NO =M 2011443菌株；和(2)包含由以下两种或两种以上不同种类微生物枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、球形节杆菌、深红酵母、植物乳杆菌；所述水体改良剂配方中的活菌数水平为枯草芽孢杆菌 CCTCC M 2011443 1X 107_3X108 cfu枯草芽孢杆菌IXlO7-3 X IO8cfu地衣芽孢杆菌IXlO7-3 X IO8cfu短小芽孢杆菌IXlO7-3 X IO8cfu蜡状芽孢杆菌IXlO7-2 X IO9cfu巨大芽孢杆菌IXlO7-2 X IO9cfu沼泽红假单胞菌IXIO7-IXiO8 cfu球形节杆菌1 X 107-2X 108 cfu深红酵母1 X 107-3X 108 cfu植物乳杆菌1 X 106-3X 108 cfu总活菌数1X109-3X101Q cfu3.权利要求2所述水体改良剂的制备方法，其特征在于制备步骤为(1)菌株的发酵培养采用液体深层发酵的方式在机械搅拌式发酵罐中进行各个菌株的纯培养，各个菌株在其特定需求温度25-45°C下进行纯培养达到12-48小时后，得到高浓度的纯培养发酵菌液，菌液的单菌落活菌计数结果在1 X 108-5 X 101° cfu/mL或者cfu/g，发酵终点的PH为4. 0-9. 0 ；(2)固体菌粉的制备各个单菌落发酵结束后，离心去除发酵液，得到湿菌泥；其中各类芽孢杆菌，添加抗热保护剂以后，采用喷雾干燥方法，得到各自芽孢杆菌的孢子体产品， 产品活菌数达到1X10"-2X1012 cfu/g;除芽孢杆菌以外的其它菌种，离心得到湿菌泥后， 添加冻干保护剂，采用低温真空干燥方法，得到各个菌种的活菌体产品，产品活菌数达到 1X1010-2X1012 cfu/g ；最终固体菌粉产品中，保护剂所占质量比例为30%-90% ；所述固态微生态水体改良剂的抗热保护剂、冻干保护剂选用脱脂奶粉、半胱氨酸盐酸盐、乳糖、蔗糖、麦芽糊精、葡萄糖、海藻糖、山梨醇、甘露醇、麦芽糖醇、异抗坏血酸钠、抗坏血酸钠、谷氨酸单钠、硫酸锰、硫酸镁、酵母粉、大豆蛋白胨、牛肉浸粉中的一种或者几种(3)固态微生态水体改良剂的制备将按照上述固体菌粉制备方法得到的固体菌粉，按照配方中的活菌数水平称量完成，再兑以稀释剂，混合均勻后，即得到要求的固体水体改良剂产品；最终固体水体改良剂产品中，稀释剂所占质量比例为90%-99% ；所述固态微生态水体改良剂涉及的稀释剂选用葡萄糖、麸皮、米糠、豆粕粉、玉米粉、麦芽糊精、玉米粉、硅藻土、凹凸棒粉、石粉、绢云母粉、沸石粉、碳酸钙中的一种或者几种；或(4)液态微生态水体改良剂的制备方法各个单菌落的发酵液中添加常温菌种保护剂，进行各个菌株的活菌计数，将各个菌株按照配方中的活菌数进行称量配制，再兑以常温菌种保护剂，得到既定浓度的液态水体改良剂；最终液态微生态水体改良剂产品中，保护剂中固体成分占总产品重量比例为1%_3% ；所述液态微生态水体改良剂涉及的常温菌种保护剂选用甘蔗糖蜜、麦芽糊精、麸皮、豆粕粉、玉米粉、米糠粉、葡萄糖、硫酸锰、硫酸镁、氯化钙、硫酸铵、磷酸二氢钾、甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇、丙三醇、焦糖色素及水中的一种或几种

本发明涉及一株兼具硝化功能的反硝化菌株枯草芽孢杆菌、包含该菌株的多种微生物共同组成的适合不同养殖水体的水体改良剂的配方及制备方法该水体改良剂可以用于水产养殖、水质净化、废物处理、环境保护等领域，主要属于水产养殖和水体改良领域