高产l-赖氨酸的生产菌株及其应用制作方法

黄鹤, 杨晟

2014年3月26日

2012年9月12日

2012年9月12日

中国科学院上海生命科学研究院, 上海工业生物技术研发中心

C12N15/54GK103667165SQ201210337506

菌株 赖氨酸 高产 应用 生产

1.一种重组的宿主细胞，其特征在于，所述重组的宿主细胞含有编码选自下组的天冬氨酸激酶的外源性基因 (a)氨基酸序列如SEQID NO2所示的天冬氨酸激酶；或 (b)包含(a)所限定的序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且基本具有(a)所限定的天冬氨酸激酶功能的由(a)衍生的天冬氨酸激酶2.如权利要求1所述的重组的宿主细胞，其特征在于，所述重组的宿主细胞含有的外源性基因如SEQ ID NO1所示；或者 所述天冬氨酸激酶的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示，但其中305位的A取代为N、V或I，或343位的H取代为I或F3.如权利要求1或2所述的重组的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞来自埃希氏菌属(Escherichia)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、短杆菌属(Brevibacterium sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus)、沙雷氏菌属(Serratia)或弧菌属(Vibrio)4.如权利要求3所述的重组的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是大肠杆菌(E.Coli)或谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)5.一种重组的宿主细胞， 其特征在于，所述重组的宿主细胞含有编码抗赖氨酸负反馈抑制的天冬氨酸激酶的外源性基因，其中所述的天冬氨酸激酶来源于链球菌，优选地，所述链球菌是肺炎链球菌6.以上权利要求中任一项所述的重组的宿主细胞在生产L-赖氨酸中的应用7.—种生产L-赖氨酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤 (a)培养权利要求1-5中任一项所述的宿主细胞,使之产生L-赖氨酸；和 (b)从培养体系中分离L-赖氨酸8.一种多肽，其特征在于，所述多肽 (a)包含SEQID N02所示序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且 (b)基本具有包含SEQID N02所示序列的多肽的功能9.如权利要求8所述的多肽，其特征在于，所述多肽包含SEQID N02所示序列，但其中305位的A取代为N、V或I，或343位的H取代为I或F10.权利要求8或9所述的多肽或氨基酸序列如SEQID NO 2所示的多肽在生产L-赖氨酸中的应用11.如权利要求6或10所述的应用，其特征在于，所述的重组的宿主细胞或所述的多肽还用于产生苏氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸或缬氨酸12.—种生产L-赖氨酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤 (a)利用权利要求8或9所述的多肽或氨基酸序列如SEQID N02所示的多肽作为天冬氨酸激酶(EC 2.7.2.4)，催化从L-天冬氨酸生成L-赖氨酸过程中以下反应，进而获得L-赖氨酸 13.—种产生L-天冬氨酰-4-基磷酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤(a)培养权利要求1-5中任一项所述的宿主细胞，从而产生L-天冬氨酰-4-基磷酸；和 (b)从培养体系中分离L-天冬氨酰-4-基磷酸 或者所述方法包括以下步骤 (al)利用权利要求8或9所述的多肽或氨基酸序列如SEQ ID N02所示的多肽作为天冬氨酸激酶(EC 2.7.2.4)，催化从L-天冬氨酸生成L-天冬氨酰_4_基磷酸；和(b I)从反应体系中分离L-天冬氨酰-4-基磷酸14.编码权利要求8或9所述多肽的基因15.包含权利要 求14所述基因的载体

[0001]本发明属于生物

本发明提供一种天冬氨酸激酶(a)其氨基酸序列如SEQ?ID?NO2所示；或(b)包含(a)所限定的序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且基本具有(a)所限定多肽功能的由(a)衍生的多肽。本发明的天冬氨酸激酶能有效生产L-赖氨酸，并且抗L-赖氨酸负反馈抑制的能力高。本发明还提供包含编码所述天冬氨酸激酶的基因的重组宿主以及利用所述宿主或天冬氨酸激酶产生L-赖氨酸的方法。本发明的天冬氨酸激酶或包含本发明天冬氨酸激酶的宿主细胞还用于产生苏氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸或缬氨酸。本发明还提供利用所述天冬氨酸激酶或宿主细胞产生L-天冬氨酰-4-基磷酸的方法。

高产L-赖氨酸的生产菌株及其应用