专利名称：一种由苦参素、灵芝和黄芪制成的药物组合物的制作方法肝炎是一种常见病和多发病，据不完全统计，我国肝炎患者和病毒携带者占总人口的10％。其中以病毒性肝炎为主，病毒性肝炎又可分为急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎和胆型肝炎。慢性肝炎又可分为迁延性肝炎和活动性肝炎。肝炎是一种传染性疾病，由于其流行性广、危害性大、发病率高，是目前国内外公认的疑难病症之一，以乙型肝炎为例，治愈率仅为10％，绝大部分转为慢性肝炎，严重的转化为肝腹水、肝癌。其中肝纤维化的形成和发展是影响预后和病情转危的关键病理变化之一，也是临床慢性肝病治疗中最为复杂的疑难问题。目前治疗慢性乙型肝炎的疗法主要有抗病毒药物疗法、免疫调控药物疗法、改善肝微循环疗法、保护疗法、中医辨证论治等。国内外近年来治疗肝炎的药物虽然有许多，但大多没有十分公认的疗效，并且疗效并不理想，另外治疗后病情易反复，且价格又十分昂贵。至今，市场上仍缺少抗肝炎疗效确切又副作用较小的药物。苦参素是从豆科植物苦豆子、苦参中提取的生物碱，主要成份是氧化苦参碱和极少量的氧化槐果碱。苦参素已收载入国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第16册363页(国家药典委员会编)，其中规定含氧化苦参碱(C15H24N2O2)不得少于98.0％。苦参素主要用于慢性乙肝的治疗及肿瘤放疗、化疗引起的白细胞低下及其他原因引起的白细胞减少症。苦参素具有良好的抗肝炎作用应用苦参素治疗慢性乙型肝炎的临床症状，如乏力、纳减和腹胀等，有效率在90％左右。氧化苦参碱的结构式如下 氧化苦参碱灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganodermasinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子实体。性甘，平，归心、肺、肝、肾经。具有补气安神，止咳平喘之功效，主要用于眩晕不眠，心悸气短，虚劳咳嗽。灵芝是家喻户晓的中药，俗称“仙草”。始载于《神农本草经》，被认为能“益心气”“安精魂”“补肝益气”“坚筋骨”，列为上品。《本草纲目》认为灵芝有“滋补强壮”“延年益寿”“利关节”“治耳聋”等功效。灵芝能够扶正固本，增强免疫功能，提高机体免疫力，在整体上双向调节人体机能平衡，调节机体内部活力，调节人体新陈代谢机能，提高自身免疫力，促进内脏或器官机能正常化。灵芝的主要有效成分为灵芝多糖，灵芝多糖有显著的增强免疫的作用。黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。甘，温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌之功效，主要用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白病，糖尿病。现代药理实验表明黄芪可促进免疫功能，主要有效成分为多糖和皂苷。黄芪多糖可显著提高机体的免疫力，增强人体细胞的生理代谢作用，显著促进骨髓造血细胞DNA合成，加快有核细胞分裂过程，对体内血糖水平有双向调节作用。黄芪皂苷具有抗肝损伤的作用，能减轻肝中毒引起的病变。目前利用苦参素、灵芝或其提取物和黄芪或其提取物的相互作用，配伍组方用于制备治疗肝脏疾病的药物中的应用还未见报道。
本发明药物组合物主要由苦参素、灵芝和黄芪制成，其重量份数为苦参素100～1600份、灵芝500～24000份、黄芪1000～80000份；优选为苦参素200～800份、灵芝1000～12000份、黄芪10000～40000份；最佳为苦参素400份、灵芝3000～9000份、黄芪20000份。上述药物组合物中灵芝、黄芪可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，总提取物再与苦参素和药学上可接受的辅料混合制成任一临床上或药学上可接受的剂型。“单独提取”是指，灵芝、黄芪每一味药材分别通过不同的工艺单独提取得到提取物，再将各提取物混合得到总提取物。“混合提取”是指，灵芝、黄芪两味药材一起提取得到总提取物。总提取物中所含的主要有效成分为多糖或多糖和总皂苷，总提取物中主要有效成分的含量不低于30％。灵芝可以用适宜的溶剂经过提取加工得到灵芝多糖，其中的溶剂优选酸水或乙醇，灵芝多糖的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法中的一种或几种，也可参照文献方法制备。
本发明提供了灵芝的优选的提取方法如下取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水4倍量润湿24h后煎煮三次，第一次加12倍量水煎煮3小时，第二次加10倍量水煎煮2小时，第三次加10倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15，滤过，滤液用Sevage法除蛋白，滤过，滤液加乙醇至含醇量为60％，搅匀，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，加适量的水搅拌溶解，滤过，滤液加乙醇至含醇量为85％，搅匀，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，加入适量丙酮、乙醇洗涤反复洗涤多次，抽滤，沉淀加适量水使溶解，超滤，收集分子量大于50000道尔顿的部分，浓缩，真空干燥，即得。
通过本工艺制备的灵芝多糖的得率为0.5～3％，灵芝多糖中多糖的含量不低于80％。
除采用上述方法外，灵芝还可通过以下方法制备，但不仅限于下述方法方法一取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿24h后加水煎煮三次，第一次加12倍量水提取3小时，第二、三次加10倍量水提取2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08，滤过，滤液用Sevage法除蛋白，滤过，滤液加乙醇使含醇量为70％，搅匀，冷藏放置24小时，滤过，收集滤饼，加适量的水搅拌溶解，滤过，滤液加乙醇使含醇量为85％，搅匀，冷藏放置24小时，滤过，收集滤饼，加入适量丙酮、乙醇洗涤反复洗涤多次，抽滤，沉淀加适量水使溶解，冷藏放置24小时，滤过收集滤液，浓缩，真空干燥，即得。
通过本工艺制备的灵芝多糖的得率为2～4％，灵芝多糖的含量不低于60％。
方法二取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿24h后煎煮二次，第一次3小时加水12倍量，第二次2小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，滤过，滤液用Sevage法除蛋白，滤过，滤液加乙醇使含醇量为65％，搅匀，冷藏放置24小时，滤过，收集滤饼，加适量水使溶解，滤过，滤液加乙醇使含醇量为80％，搅匀，冷藏放置24小时，滤过，收集滤饼，加适量水使溶解，冷藏放置48小时，滤过，滤液浓缩，真空干燥，即得。
通过本工艺制备的灵芝多糖的得率为3～5％，灵芝多糖的含量不低于50％。
现代药理学实验表明，黄芪中的黄芪多糖具有提高免疫力活性，黄芪总皂苷具有保肝活性，因此黄芪的“单独提取”方法因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分别如下本发明组合物中以多糖为主要有效成分的黄芪的制备方法如下取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物的得率为0.5～2％，其中多糖的含量不低于50％。
除采用上述方法外，黄芪也可通过以下方法制备，但不仅限于下述方法方法一取黄芪药材，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.23，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，收集沉淀，真空干燥即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物的得率为2～4％，其中多糖的含量不低于40％。
方法二取黄芪药材，加10倍量80％乙醇提取4小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液合并，过滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，过滤，滤液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物的得率为3～4％，其中多糖的含量不低于30％。
本发明组合物中以总皂苷为主要有效成分的黄芪的制备方法如下取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物的得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，其中黄芪甲苷含量不低于2.0％。
除采用上述方法外，黄芪也可通过以下方法制备，但不仅限于下述方法方法一取黄芪，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为60％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，减压浓缩、真空干燥，即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物的得率为3～5％，总皂苷含量不低于30％，其中黄芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理1次使含乙醇量为60％，冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，并减压浓缩、真空干燥，即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物的得率为2～4％，总皂苷含量为不低于40％，其中黄芪甲苷含量不低于1％。
本发明药物组合物，可用灵芝多糖、黄芪多糖或黄芪总皂苷分别代替灵芝和黄芪投料制得，按照提取物相对于药材的得率(灵芝多糖的得率为0.5～3％，黄芪多糖或总皂苷的得率均为0.5～2％)计算，可以有以下两种不同配比，其重量份数分别为配比1苦参素100～1600份、灵芝多糖2.5～700份、黄芪多糖5～1600份；优选为苦参素200～800份、灵芝多糖5～350份、黄芪多糖50～800份；最佳为苦参素400份、灵芝多糖15～250份、黄芪多糖100～400份。
配比2苦参素100～1600份、灵芝多糖2.5～700份、黄芪总皂苷5～1600份；优选为苦参素200～800份、灵芝多糖5～350份、黄芪总皂苷50～800份；最佳为苦参素400份、灵芝多糖15～250份、黄芪总皂苷100～400份。
上述配比中，灵芝多糖中多糖的含量不低于50％，最好不低于80％；黄芪多糖中多糖的含量不低于30％，最好不低于50％；黄芪总皂苷中总皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，其中的黄芪甲苷的含量不低于1.0％，最好不低于2.0％。灵芝多糖、黄芪多糖和黄芪总皂苷均可参照前述方法自制。
本发明药物组合物具有保肝、抗病毒、提高免疫力、抗炎等作用，可以用于治疗急慢性肝炎和活动性肝硬化。
本发明还进一步要求保护包括上述药物组合物作为必需的活性成分与药学上可接受的载体的药物组合物，为临床上或药学上可接受的任一剂型；可以肠胃外、口服、经皮给药等方式施用于需要这种治疗的患者，优选为口服制剂、注射剂。
用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供静脉滴注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。
制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，可选用水性溶剂或非水性溶剂。最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9％氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、填充剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、乳酸、枸橼酸-枸橼酸钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；常用的增溶剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充剂包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂为苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射剂常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
用于口服时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂，以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂，依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂，包括滴丸、糖丸、小丸等。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂，可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。口服混悬剂系指难溶性固体药物，分散在液体介质中，制成供口服的混悬液体制剂，也包括干混悬剂或浓混悬液。糖浆剂系指含有药物的浓蔗糖水溶液。
制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。常用填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；常用粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；常用崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；常用润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。
本发明的优点在于1、提供了一种新的制备治疗肝脏疾病的药物的中药复方，满足了临床急需。
2、对本发明药物组合物进行了药理学研究，结果表明本发明药物组合物可极显著降低免疫性肝损伤小鼠血清的ALT和AST，对小鼠免疫性肝损伤有显著的保护作用；对鸭乙型肝炎病毒均有极显著的抑制作用；对慢性肝炎有很好的改善作用；对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠血清TGFβ1水平显著降低，大鼠肝组织胶原面积明显减少。其效果明显优于灵芝、黄芪和苦参素单独给药，提示三者有协同增效的作用。
3、通过本发明组合物不同配比灌胃和注射给药对小鼠免疫性肝损伤保护作用的研究，筛选出了本发明组合物的优选配比。
4、本发明组合物中的灵芝和黄芪既可由灵芝、黄芪投料制得，也可由灵芝多糖、黄芪多糖或黄芪总皂苷直接投料，并提供了其制备方法，满足了大生产的需要。
5、对本发明组合物提取物主要有效成分的含量分别进行了限定，便于控制产品的质量。
6、对本发明组合物进行了急性毒性实验，结果表明本发明组合物毒性小，安全范围大。
7、对本发明药物组合物进行的稳定性实验结果表明各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全。
以下通过实验例来进一步阐述本发明药物的有益效果。苦参素、灵芝多糖和黄芪多糖的组合物以下简称KLH组合物I，苦参素、灵芝多糖和黄芪总皂苷的组合物以下简称KLH组合物II。实验例中所用的灵芝多糖取自实施例1，黄芪多糖取自实施例2，黄芪总皂苷取自实施例3。
实验例1 KLH组合物合并用药药效学研究供试品0.9％生理盐水，自制；化学纯CCl4，成都联合化工试剂研究所；苦参素注射液，2ml∶0.2g，天津市生物化学制药厂；灵芝注射液，自制，5ml，含灵芝多糖91.8mg(相当于灵芝6g)；黄芪多糖注射液，自制，5ml，含黄芪多糖214.0mg(相当于黄芪20g)；黄芪总皂苷注射液，自制，5ml，含黄芪总皂苷212.0mg(相当于黄芪20g)；KLH组合物I注射液(苦参素+灵芝+黄芪)不同配比，自制，制备方法参照实施例4；KLH组合物II注射液(苦参素+灵芝+黄芪)不同配比，自制，制备方法参照实施例4。
试剂卡介苗(BCG)，上海生物制品研究所；脂多糖(LPS)，Sigma公司。
受试动物ICR种小鼠，体重16～20g，雌雄各半。
实验方法取小鼠240只，将小鼠随机分为生理盐水对照组、模型组、苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组、KLH组合物I不同配比组和KLH组合物II不同配比组，每组10只。除对照组每鼠尾静脉注射生理盐水0.2ml外，其它各组每鼠尾静脉注射0.2ml卡介苗(含5×107活菌)。次日起开始治疗，对照组和模型组小鼠每天腹腔注射生理盐水0.5ml，其它各组腹腔注射相应药物，给药量见表1。12天后，除对照组给予生理盐水0.2ml/只尾静脉注射外，其余各鼠均由尾静脉注射脂多糖0.2ml/7.5μg/只。12小时后，眼眶取血，常规分离血清，应用IFCC推荐法测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。
表1 KLH组合物对免疫性肝损伤小鼠血清ALT和AST(n＝10)的影响
注与生理盐水对照组相比，ΔΔp＜0.01；与模型组相比，**p＜0.01；与苦参素组相比，ap＜0.01；与灵芝组相比，bp＜0.01；与黄芪多糖组相比，cp＜0.01；与黄芪总皂苷组相比，dp＜0.01。
实验结果由表1可知1)与生理盐水对照组相比，模型组小鼠血清ALT和AST活性极显著增高(p＜0.01)，说明造模成功。
2)与模型组相比，各给药组均能极显著降低免疫性肝损伤小鼠血清的ALT和AST(p＜0.01)。
3)与苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组单用药物组相比，KLH组合物I各剂量组注射液效果更显著(p＜0.01)；与苦参素组、灵芝组、黄芪总皂苷组单用药物组相比，KLH组合物II各剂量组注射液效果更显著(p＜0.01)，说明苦参素、灵芝与黄芪三者有协同增效的作用。
结论由实验结果可知，苦参素、灵芝与黄芪三者合用有协同增效作用。尤其当苦参素∶灵芝∶黄芪＝400∶6000∶20000时效果最好。
实验例2 KLH组合物对免疫性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性的影响供试品0.9％生理盐水，自制；化学纯CCl4，成都联合化工试剂研究所；苦参素胶囊，0.1g/粒，宁夏博尔泰力药业股份有限公司；灵芝胶囊，自制，含灵芝多糖91.8mg/粒(相当于灵芝6g)；黄芪多糖胶囊，自制，含黄芪多糖214.0mg/粒(相当于黄芪20g)；黄芪总皂苷胶囊，自制，含黄芪总皂苷212.0mg粒(相当于黄芪20g)；KLH组合物I胶囊(苦参素+灵芝+黄芪)不同配比，自制，制备方法参照实施例9；KLH组合物II胶囊(苦参素+灵芝+黄芪)不同配比，自制，制备方法参照实施例9。
试剂卡介苗(BCG)，上海生物制品研究所；脂多糖(LPS)，Sigma公司。
受试动物ICR种小鼠，体重16～20g，雌雄各半。
实验方法取小鼠360只，将小鼠随机分为生理盐水对照组、模型组、苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组、KLH组合物I不同配比组和KLH组合物II不同配比组，每组10只。除生理盐水对照组每鼠尾静脉注射生理盐水0.2ml外，其它各组每鼠尾静脉注射0.2ml卡介苗(含5×107活菌)。次日起开始治疗，对照组和模型组每鼠每天灌胃生理盐水0.5ml，其它各组每天灌胃给药相应药物，所给药物给药前用生理盐水溶解稀释成适宜的浓度，给药量见表2。12天后，除对照组给予生理盐水0.2ml/只尾静脉注射外，其余各鼠均由尾静脉注射脂多糖0.2ml/7.5μg/只。12小时后，眼眶取血，常规分离血清，应用IFCC推荐法测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。
实验结果由表2结果可知1)与生理盐水对照组相比，模型组小鼠血清ALT和AST活性极显著增高(p＜0.01)，说明造模成功。
2)与模型组相比，各给药组均能极显著降低免疫性肝损伤小鼠血清的ALT和AST(p＜0.01)。
3)与苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组单用药物组相比，KLH组合物I各剂量组注射液效果更显著(p＜0.01)，与苦参素组、灵芝组、黄芪总皂苷组单用药物组相比，KLH组合物II各剂量组注射液效果更显著(p＜0.01)，说明苦参素、灵芝与黄芪三者有协同增效的作用。
表2 KLH组合物对免疫性肝损伤小鼠血清ALT和AST(n＝10)的影响
注与生理盐水对照组相比，ΔΔp＜0.01；与模型组相比，**p＜0.01；与苦参素组相比，ap＜0.01；与灵芝组相比，bp＜0.01；与黄芪多糖组相比，cp＜0.01；与黄芪总皂苷组相比，dp＜0.01。
结论由实验结果可知，苦参素、灵芝与黄芪三者合用有协同增效作用。尤其当苦参素∶灵芝∶黄芪＝400∶6000∶20000时效果最好。
实验例3 KLH组合物抗乙肝病毒实验研究供试品0.9％生理盐水，自制；注射用阿昔洛韦，石药集团中诺药业(石家庄)有限公司；苦参素胶囊，0.1g/粒，宁夏博尔泰力药业股份有限公司；灵芝颗粒，自制，含灵芝多糖91.8mg/袋(相当于灵芝6g)；黄芪多糖颗粒，自制，含黄芪多糖214.0mg/袋(相当于黄芪20g)；黄芪总皂苷颗粒，自制，含黄芪总皂苷212.0mg/袋(相当于黄芪20g)；KLH组合物I颗粒剂(苦参素+灵芝+黄芪400mg+6g+20g)，自制，制备方法参照实施例10；KLH组合物II颗粒剂(苦参素+灵芝+黄芪400mg+6g+20g)，自制，制备方法参照实施例10。
实验动物市售1日龄北京鸭DHBV(鸭乙型肝炎病毒)阳性血清，复旦大学医学院微生物学教研室。
动物模型北京鸭经足静脉注射0.2mlDHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20℃保存待检。
实验方法筛选出感染成功的阳性鸭72只，随机分为12组，分别为空白对照组、阳性对照组、苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组、KLH组合物I低、中、高剂量组和KLH组合物II低、中、高剂量组，每组6只。空白对照组每日灌胃生理盐水20ml/kg，每日2次，连续14d；给药组灌胃给药相应药物，所给药物给药前用生理盐水溶解稀释成适宜的浓度，每日2次，剂量见下表，连续14d。阳性药物作为治疗对照组，以(阿昔洛韦)ACV按100mg/kg灌胃，2次/d，给药2周。分别于用药前1d(T0)、用药第7天(T7)，用药第14天(T14)和停药后第7天(P7)。自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-20℃保存待检。
DHBV-DNA检测方法取上述鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的变化，按缺口翻译试剂盒说明方法，用32p标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪上测定OD值(滤光片波长约490nm)，计算血清DHBV-DNA密度。
实验结果由表3结果可见1)与生理盐水对照组比较，阳性对照(阿昔洛韦)组在给药后第7天和第14天，与给药前的差异有显著性(p＜0.01)，但停药后有反跳现象，与给药前比较差异无显著性(p＞0.05)。
2)与生理盐水对照组比较，苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组四个单独给药组在给药后第7天和第14天，与给药前的差异有显著性(p＜0.05)，且停药后无反跳现象。
3)与生理盐水对照组比较，KLH组合物I三个不同剂量组、KLH组合物II三个不同剂量组在给药后第7天和第14天，与给药前的差异有显著性(p＜0.01)，且停药后无回升现象。
4)与苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组单独给药组比较，KLH组合物I三个不同剂量组在给药后第7天和第14天，与给药前的差异有显著性(p＜0.05)，与苦参素组、灵芝组、黄芪总皂苷组单独给药组比较，KLH组合物II三个不同剂量组在给药后第7天和第14天，与给药前的差异有显著性(p＜0.05)。
表3 KLH组合物对鸭体内DHBV-DNA的抑制作用
注与空白对照组相比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性对照组相比较，#p＜0.05；与苦参素组相比较，ap＜0.05；与灵芝组相比较，bp＜0.05；与黄芪多糖组相比较，cp＜0.05；与黄芪总皂苷组相比较，dp＜0.05。
结论各给药组对鸭体内DHBV-DNA的抑制作用在给药后第7天和第14天与给药前的差异与生理盐水组比较均有显著性，但阳性对照组停药后有反跳现象。本发明药物组合物疗效均优于单用苦参素、灵芝、黄芪多糖和黄芪总皂苷组，效果显著，且无反跳现象，说明苦参素、灵芝和黄芪三药合用，有协同增效作用。
实验例4 对大鼠慢性肝损伤的防护作用实验动物雄性Wistar大鼠，鼠龄8周，体重(207±21)g供试品0.9％生理盐水，自制；化学纯CCl4，成都联合化工试剂研究所；苦参素胶囊，0.1g/粒，宁夏博尔泰力药业股份有限公司；灵芝片，自制，含灵芝多糖91.8mg/片(相当于灵芝6g)；黄芪多糖片，自制，含黄芪多糖214.0mg/片(相当于黄芪20g)；黄芪总皂苷片，自制，含黄芪总皂苷212.0mg/片(相当于黄芪20g)；KLH组合物I注射液(苦参素+灵芝+黄芪400mg+6g+20g)，自制，制备方法参照实施例8；KLH组合物II注射液(苦参素+灵芝+黄芪400mg+6g+20g)，自制，制备方法参照实施例8。
实验方法将216只大鼠随机分为正常对照组、模型组、苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组、KLH组合物I各剂量组和KLH组合物II各剂量组，每组大鼠均18只。除正常对照组外，其余各组均用50％CCl4-橄榄油1mL/kg后大腿皮下注射，每周2次，共12周，造成大鼠慢性肝损伤，同时分别灌胃给予相应药物，所给药物给药前用生理盐水溶解稀释成适宜的浓度，每日1次。正常对照组灌胃等量生理盐水，每日1次。在实验的第4，9，12周各组随机处死6只大鼠。
标本的留取腹腔注射2.5％戊巴比妥溶液50mg/kg以麻醉，沿腹白线打开腹腔，从下腔静脉取血，分离血清，-20℃保存；取肝脏10％甲醛固定。
血清学指标检测ALT用全自动生化测定仪检测。
统计学处理数据以 表示，用F检验和t检验处理相应数据。
实验结果与正常对照组比较，模型组大鼠第4，9，12周的ALT水平均显著升高(p＜0.01)，说明造模成功；与模型组比较，苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组大鼠第4，9，12周的ALT水平均明显降低(p＜0.05)；KLH组合物I各剂量组和KLH组合物II各剂量组大鼠第4，9，12周的ALT水平均显著降低(p＜0.01)。
表4 KLH组合物对慢性肝损伤小鼠的保护作用
注与正常对照组相比，ΔΔp＜0.01；与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01；与苦参素组相比，ap＜0.05；与灵芝组相比，bp＜0.05；与黄芪多糖组相比，cp＜0.05；与黄芪总皂苷组相比，dp＜0.05。
结论血清ALT活性被广泛用作临床诊断肝脏炎性损伤和判断其临床疗效的敏感指标。由以上结果表明，KLH组合物I和KLH组合物II能抑制肝组织内炎症活动和纤维组织增生，从而对CCl4造成的大鼠慢性干损伤具有防治作用。
实验例5 KLH组合物抗大鼠肝纤维化作用受试动物健康雄性SD大鼠，120只，体重140～160g，随机分为12组，每组10只。
供试品0.9％生理盐水，自制化学纯CCl4，成都联合化工试剂研究所；苦参素注射液，2ml∶0.2g，天津市生物化学制药厂；灵芝注射液，自制，5ml，含灵芝多糖91.8mg(相当于灵芝6g)；黄芪多糖注射液，自制，5ml，含黄芪多糖214.0mg(相当于黄芪20g)；黄芪总皂苷注射液，自制，5m1，含黄芪总皂苷212.0mg(相当于黄芪20g)；KLH组合物I注射液(苦参素+灵芝+黄芪400mg+6g+20g)，自制，制备方法参照实施例4；KLH组合物II注射液(苦参素+灵芝+黄芪400mg+6g+20g)，自制，制备方法参照实施例4。
实验方法将120只大鼠随机分为12组，每组10只，分别为空白对照组、模型照组、苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组、KLH组合物I低、中、高剂量组和KLH组合物II低、中、高剂量组。用CCl4皮下注射法诱导大鼠肝纤维化模型，即用300ml/LCCl4石蜡油溶液，以3ml/kg做皮下注射，每周2次，共8周，空白对照组给予等量生理盐水皮下注射。各给药组在造模的同时腹腔注射给药，给药量见表5，CCl4模型组造模同时给予生理盐水腹腔注射，空白对照组给予等体积的生理盐水。各组动物在最后一次CCl4注射后48h处死，取血清和肝组织标本待验。
检测方法血清按照试剂说明书以酶联免疫吸附法(ELISA)监测TGFβ1水平，肝组织标本以中性福尔马林溶液固定、石蜡包埋，以多聚赖氨酸涂布的载玻片制作5μm组织切片，进行HE染色和Massion三重胶原染色作组织病理学检查；免疫组织化学(immunohistochemistry，IH)方法检测Smad 3蛋白表达水平，光学显微镜下观察结果。
表5 各组大鼠肝组织检查结果
注与空白对照组比较，##p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与苦参素组相比较，ap＜0.05；与灵芝组相比较，bp＜0.05；与黄芪多糖组相比较，cp＜0.05；与黄芪总皂苷组相比较，dp＜0.05。
实验结果由表5结果可见1)与空白对照组比较，模型组大鼠血清TGFβ1水平显著升高(p＜0.01)，说明肝纤维化的形成过程伴随有TGFβ1合成的显著增加，从而促进肝脏胶原纤维的合成与沉积；HE染色光镜下可见模型组大鼠肝细胞广泛脂肪变性、坏死(p＜0.01)，Masson染色见蓝色胶原纤维明显增加(p＜0.01)；免疫组织化检测表明模型组大鼠肝组织Smad3蛋白表达明显增强(p＜0.01)；以上结果均说明造模成功。
2)与模型组相比，苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组四个单独给药组TGFβ1水平、组织学积分和肝组织Smad3蛋白表达均明显降低(p＜0.05)，胶原面积显著降低(p＜0.01)；KLH组合物I各剂量组、KLH组合物II各剂量组TGFβ1水平、组织学积分、肝组织Smad3蛋白表达和胶原面积均显著降低(p＜0.01)。
3)与苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组单独给药组比较，KLH组合物I各剂量组TGFβ1水平、组织学积分、肝组织Smad3蛋白表达和胶原面积均明显降低(p＜0.05)，与苦参素组、灵芝组、黄芪总皂苷组单独给药组比较，KLH组合物II各剂量组TGFβ1水平、组织学积分、肝组织Smad3蛋白表达和胶原面积均明显降低(p＜0.05)。
结论与模型组相比，各给药组预防性治疗的大鼠血清TGFβ1水平显著减少，大鼠肝组织胶原面积明显减少，Smad3表达阳性率明显减少；且KLH组合物I各剂量组、KLH组合物II各剂量组的效果优于苦参素组、灵芝组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组四个单独给药组。
实验例6 小鼠注射给药急性毒性实验(1)实验方法供试品KLH组合物注射液I，剂型水针，规格10ml，来源于实施例4；KLH组合物注射液II，剂型水针，规格10ml，来源于实施例4。
受试动物小鼠，每组雌雄各5只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。
给药途径静脉注射、腹腔注射。
观察专案死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。
(2)实验结果按照急性毒性实验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行日最大给药量实验。给药剂量尾静脉注射0.2ml/10g，腹腔注射0.2ml/10g，一日2次。
死亡数未出现死亡。
一般状态未见异常变化。
体重于给药前1天，给药日，给药后2、4、6、8、10、12、14天测量；未见异常变化。
剖检心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。
(3)结论本实验中未出现死亡，KLH组合物注射液I、KLH组合物注射液II对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量为0.4ml/10g，相当于50kg体重人日最大用量20ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
实验例7 KLH组合物注射液稳定性实验供试品KLH组合物注射液I，剂型水针，规格10ml，来源于实施例4；KLH组合物注射液II，剂型水针，规格10ml，来源于实施例4。
考察项目性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量；并在加速实验6个月和长期实验期末增加无菌和热原检查。
1、影响因素实验强光照射实验取供试品，置照度为4500Lx的光照箱内放置10天。
高温实验取供试品，分别置于40℃、60℃条件下放置10天。
低温实验取供试品，在4℃冰箱中放置10天。
上述实验，分别于第5、10天取样测定。比较性状后测试各项指标，并将结果与0天比较。
结果光照4500Lx条件下放置10天，除有关物质略有升高外，其它各项指标均无明显变化。高温60℃条件下放置10天，外观变为淡黄色澄明液体，标示含量下降，有关物质略有升高。高温40℃、低温4℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。
2、加速实验方法置温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在实验期间分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在6个月末增加无菌和热原检查。
结果温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，除有关物质略有增加，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化，加速实验6个月末，热原、无菌检查均符合规定。
3、长期实验方法置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在18个月末增加无菌和热原检查。
结果温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月，各项指标均无明显变化，长期实验18个月末，热原、无菌检查均符合规定。
结论由上述考察结果得出结论，各项实验中，本发明药物组合物注射液比较稳定。

实施例1 灵芝多糖的制备取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水4倍量润湿过夜，次日煎煮三次，第一次加12倍量水煎煮3小时，第二次加10倍量水煎煮2小时，第三次加10倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15，滤过，滤液用Sevage法除蛋白，滤过，滤液加乙醇至含醇量为60％，搅匀，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，加适量的水搅拌溶解，滤过，滤液加乙醇至含醇量为85％，搅匀，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，加入适量丙酮、乙醇洗涤反复洗涤多次，抽滤，沉淀加适量水使溶解，超滤，收集分子量大于50000道尔顿的部分，浓缩，真空干燥，即得。
鉴别取本品50mg，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
标准曲线的制备 分别静密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(静密称取蒽酮0.1g，加80％硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入水浴中冷却15分钟，以相应的溶剂为空白，在625nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取本品20mg，置50ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得。
测定法精密吸取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线下测定方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液的葡萄糖的重量，计算，即得。
根据上述工艺，制得灵芝多糖三批样品，其得率和含量见下表。
表6 灵芝多糖得率和含量测定结果
实施例2 黄芪多糖的制备取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
鉴别(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
含量测定标准溶液的制备称取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。
标准曲线绘制精密量取标准溶液0.1ml～0.6ml共6份，分别置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，铝片0.3g，碳酸氢钠0.15g，混合蒸馏，收集182℃馏分，配制成5％水溶液)1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温，另以2.0ml水同上平行操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸收值，计算回归方程。
测定方法取黄芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法自“加水至2.0ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算多糖的含量。
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，其得率和含量见下表。
表7 黄芪多糖的得率和含量测定结果
实施例3 黄芪总皂苷的制备取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材1g，冷藏放置12小时，滤过，滤液减压浓缩、真空干燥，即得。
分别制得三批黄芪总皂苷，提取物得率和含量结果见下表6。
鉴别一取本品0.01g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。
鉴别二取本品0.01g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，凉干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
含量测定总皂苷的含量测定对照品溶液的制备 精密称取于105℃干燥至恒重的黄芪甲苷对照品约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芪甲苷干品0.1mg)。
供试品溶液的制备取本品0.1g，精密称定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次10ml，弃去水液，正丁醇至水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，置25ml纳氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，在538nm波长处测定吸光度，计算，即得。
黄芪甲苷的含量测定色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈—水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。
对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品0.04g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，其得率和含量见下表。
表8 黄芪总皂苷的得率和含量测定结果
实施例4 KLH组合物水针剂的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g注射用水 加至10000ml
共制备 1000支
KLH组合物I处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 45.9g(相当于灵芝3kg)黄芪多糖 428.0g(相当于黄芪40kg)聚山梨酯80 20g注射用水 加至10000ml
共制备 1000支KLH组合物II处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 50g注射用水 加至10000ml
共制备 1000支KLH组合物II处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 137.7g(相当于灵芝9kg)黄芪总皂苷 106.0g(相当于黄芪10kg)聚山梨酯80 50g注射用水 加至10000ml
共制备 1000支制备工艺提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全；将苦参素和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解；合并上述溶液，补加注射用水至全量；加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值；经0.45um的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；将溶液熔封于玻璃安瓿中；100℃流通蒸汽灭菌30分钟；趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏；灯检，成品全检，包装入库。
实施例5 KLH组合物粉针剂的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
KLH合物I处方2苦参素 200.0g灵芝多糖 45.9g(相当于灵芝3kg)黄芪多糖 428.0g(相当于黄芪40kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支KLH组合物II处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支KLH组合物II处方2苦参素 200.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支制备工艺首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理；按照处方量称取原、辅料；将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全，将苦参素和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解，合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量；加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值；经0.22um的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时；冻干结束，压塞，轧盖；成品全检，包装入库。
实施例6 KLH组合物氯化钠输液的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶KLH组合物I处方2苦参素 200.0g灵芝多糖 137.7g(相当于灵芝9kg)黄芪多糖 107.0g(相当于黄芪10kg)聚山梨酯80 20g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶KLH组合物Ⅱ处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶KLH组合物II处方2苦参素 800.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶制备工艺前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全，将苦参素和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解，将氯化钠用适量注射用水溶解完全，合并上述溶液，补加注射用水至全量；加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值；经0.45um的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；灌装于100ml的输液瓶中；115℃热压灭菌30分钟；灯检，成品全检，包装入库。
实施例7 KLH组合物葡萄糖输液的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶KLH组合物I处方2苦参素 800.0g灵芝多糖 45.9g(相当于灵芝3kg)黄芪多糖 428.0g(相当于黄芪40kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶KLH组合物II处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶KLH组合物II处方2苦参素 800.0g灵芝多糖 137.7g(相当于灵芝9kg)黄芪总皂苷 106.0g(相当于黄芪10kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶制备工艺提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全，将苦参素和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解，合并上述溶液；将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟；合并上述溶液，补加注射用水至全量；加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值；经0.45um的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；灌装于100ml的输液瓶中；115℃热压灭菌30分钟；灯检，成品全检，包装入库。
实施例8 KLH组合物片剂的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)淀粉 40g微晶纤维素 40g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 5.0g羧甲淀粉钠 10.0g
.共制备 2000片KLH组合物I处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 107.0g(相当于黄芪10kg)淀粉 40g微晶纤维素 40g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 5.0g羧甲淀粉钠 10.0g
.共制备 2000片KLH组合物II处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)淀粉 40g微晶纤维素 40g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 5.0g羧甲淀粉钠 10.0g
共制备 2000片KLH组合物II处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 424.0g(相当于黄芪40kg)淀粉 40g微晶纤维素 40g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 5.0g羧甲淀粉钠 10.0g
共制备 2000片制备工艺将灵芝多糖、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和若参素分别粉碎过100目筛备用；按照处方量称取原、辅料；将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用；将黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、苦参素、灵芝多糖、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；过20目筛制颗粒；60℃的条件下烘干；干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀；取样，半成品化验；按照化验确定的片重压片；成品全检，包装入库。
实施例9 KLH组合物胶囊剂的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)淀粉 20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁5.0g
共制备 2000粒KLH组合物I处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 45.9g(相当于灵芝3kg)黄芪多糖 107.0g(相当于黄芪10kg)淀粉 20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 5.0g
共制备 2000粒KLH组合物II处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)淀粉 20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 5.0g
共制备 2000粒
KLH组合物II处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 45.9g(相当于灵芝3kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)淀粉 20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 5.0g
共制备 2000粒制备工艺将灵芝多糖、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和苦参素分别粉碎过100目筛备用；按照处方量称取原、辅料；将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用；将黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、苦参素、灵芝多糖、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；过20目筛制颗粒；颗粒在60℃的条件下烘干；干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀；取样，半成品化验；按照化验确定的装量装入胶囊；成品全检，包装入库。
实施例10 KLH组合物颗粒剂的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包KLH组合物I处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 107.0g(相当于黄芪10kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包KLH组合物II处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包
KLH组合物II处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 137.7g(相当于灵芝9kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包制备工艺将蔗糖粉碎过100目筛备用，将灵芝多糖、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和苦参素分别粉碎过100目筛备用；按照处方量称取原、辅料；将灵芝多糖、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、苦参素与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，过20目筛制颗粒；颗粒在60℃的条件下烘干；干颗粒过18目筛整粒；取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量；包装，成品全检，包装入库。
实施例11 KLH组合物口服液体剂的制备KLH组合物I处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪多糖 214.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸钠 15g甜菊甙 20g纯化水 加至10000ml
共制备 1000支KLH组合物I处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 137.7g(相当于灵芝9kg)黄芪多糖 107.0g(相当于黄芪10kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸钠 15g甜菊甙 20g纯化水 加至10000ml
共制备 1000支KLH组合物II处方1苦参素 400.0g灵芝多糖 91.8g(相当于灵芝6kg)黄芪总皂苷 212.0g(相当于黄芪20kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸钠 15g甜菊甙 20g纯化水 加至10000ml
共制备 1000支
KLH组合物II处方2苦参素 400.0g灵芝多糖 137.7g(相当于灵芝9kg)黄芪总皂苷 106.0g(相当于黄芪10kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸钠 15g甜菊甙 20g纯化水 加至10000ml
共制备 1000支制备工艺将灵芝多糖加入配液量30％的水中加热搅拌溶解完全，将苦参素和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加入少量水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解，合并上述溶液；将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全；合并上述两个溶液，补加水至全量；过0.8um的微孔滤膜过滤；半成品化验；灌装，成品全检，包装入库。


本发明属于医药技术领域，公开了一种新的药物组合物及其制备方法，该药物组合物主要由苦参素、灵芝和黄芪制成，其重量配比为苦参素100～1600份、灵芝500～24000份、黄芪1000～80000份。或者由苦参素、灵芝多糖、黄芪多糖或黄芪总皂苷制成，其重量配比为苦参素100～1600份、灵芝多糖2.5～700份、黄芪多糖5～1600份；或者为苦参素100～1600份、灵芝多糖2.5～700份、黄芪总皂苷5～1600份。该药物组合物可以制成各种药学上可接受的剂型，优选注射剂或口服制剂。该药物组合物具有保肝、抗病毒、提高免疫力、抗炎等作用，可以用于制备治疗急慢性肝炎和活动性肝硬化的药物。