一种兼具抗抑郁和促睡眠功效的萱草天然粉剂的制备方法[0002]萱草(Hemerocallis citrina),又名黄花菜,是百合科萱草属多年生草本植物。萱草的花蕾味鲜质嫩，营养丰富，可作为干制蔬菜食用。同时，民间常以萱草入药，认为其具除热通淋、清热凉血的功效，可令人开胸宽膈，心平气和，无有忧郁。[0003]现代快节奏的生活所带来的巨大压力常常导致人们身心疲惫，导致抑郁与失眠症状相继或同时出现，相较于目前市场上常见的诸多用于减轻疲惫感、醒脑提神的产品的被动效果，通过直接的抵抗不良的精神抑郁状态的发生，同时改善睡眠质量来缓解人们的疲惫和恢复充沛的精力，效果往往更明显且事半功倍。据世界卫生组织报道，抑郁影响了世界近20%的人，到2020年将成为世界第二大病原性残疾。对14个国家进行的调查，指出超过27%的人有睡眠障碍，其中17%的人属于失眠，并且这一现象呈现出愈演愈烈的态势；同时据中国睡眠研究会的统计，中国成年人失眠发生率高达38.2%。抑郁与失眠症状对人们精神状态的不良影响，极大的降低了人们的学习工作效率，造成长期性的巨大的个人乃至社会负担，影响人民的生活和社会的和谐。[0004]近年来，黄酮类物质的神经活性广受关注，主要包括提高认知能力、降低老年痴呆发病率、改善阿兹海默症症状等。最新研究表明萱草所具有的抗抑郁和促睡眠作用与其所含的黄酮类物质具有密切关系，而通过改善黄酮类物质的水溶性，可以有效提高其生物可利用率。然而，萱草的神经活性特点与黄酮类物质组成的关系尚不明确，特别是针对性萃取具有高效神经活性的特定的天然黄酮组合物并同时改善其水溶性的技术尚未见报道。
[0005]本发明的目的在于提供一种兼具抗抑郁和促睡眠功效的萱草天然粉剂及其制备方法，旨在通过特定的提取方法，制备包含特定天然黄酮组合物的萱草天然粉剂，其兼具良好的抗抑郁和促睡眠的功效；同时改善其中黄酮类物质的水溶性，使其可以在室温下以5wt % -1Owt %的比例完全溶解于水中，且可保持长时间的物态稳定。[0006]为了实现上述目的，本发明采用以下的技术方案:[0007]—种兼具抗抑郁和促睡眠功效的萱草天然粉剂的制备方法，包括如下步骤:
[0008](1)将萱草花加入乙醇与甘油的混合溶剂中进行提取，得到萱草花提取液；上述混合溶剂中乙醇的体积分数为72% -82%，甘油的体积分数为0.5% -1.5%，余量为水；
[0009](2)将步骤(1) 得到的萱草花提取液过滤，滤液经减压浓缩、冷冻干燥后得到萱草天然粉剂。
[0010]其中:
[0011]步骤(1)中的萱草花一般预先进行破碎处理，然后再进行提取。[0012]步骤(1)中萱草花与混合溶剂的料液比为lg:5-50ml。
[0013]步骤(1)中乙醇和甘油的品级为食品级。
[0014]步骤⑵中减压浓缩的温度为50_90°C。
[0015] 一种优选的兼具抗抑郁和促睡眠功效的萱草天然粉剂的制备方法，步骤(1)中提取的温度为5-50°C，提取时间为l_24h，提取次数为1-3次。本发明中多次提取的具体实现方式为:在经过第1次提取后，将得到的萱草花提取液过滤，分离料渣，根据上述提取条件在料渣中重新加入乙醇与甘油的混合溶剂后再次进行提取，根据实际需要重复该提取步骤。
[0016]进一步优选的兼具抗抑郁和促睡眠功效的萱草天然粉剂的制备方法，步骤(1)中提取的温度为25°C，提取时间为12h，提取次数为2次。
[0017]一种利用上述制备方法制备得到的萱草天然粉剂，该萱草天然粉剂中包含由特定组分组成的黄酮组合物、多糖和蛋白等，其中的黄酮组合物包括6 Iwt % -8 Iwt %的芦丁、15wt % -30wt %的橙皮苷、Iwt % -3wt %的槲皮苷、Iwt % _3wt %的槲皮素和Iwt % _3wt %的异槲皮苷。
[0018]一种优选的萱草天然粉剂，该萱草天然粉剂中包含由特定组分组成的黄酮组合物，该黄酮组合物包括74wt%的芦丁、21wt%的橙皮苷、2wt%的槲皮苷、2wt%的槲皮素和Iwt %的异槲皮苷。
[0019]本发明的有益效果如下:
[0020](I)将本发明的提取方法得到的萱草提取物，进一步制备得到的萱草天然粉剂中包含特定天然黄酮组合物，相比于其他提取方法得到的产品，其具有更好的抗抑郁活性和促睡眠的功效。本发明得到的萱草天然粉剂具有独一的神经活性和剂量关系，可以兼具特殊的抗抑郁和促睡眠活性。并且，本发明所涉及的提取物的神经活性适应范围广，对于缓解现代人快节奏高压力生活所带来的种种不适感有重要的广谱改善作用。
[0021](2)本发明所采用的溶剂，除了具体限定乙醇的体积分数外，还添加了体积分数为1% -2.5%的甘油，使最终得到的萱草天然粉剂可以在室温下以5wt% -1Owt %的比例溶解于水中，且保持物态稳定。
[0022](3)本发明的萱草天然粉剂具有独特的天然萱草花香，且水溶性优良，可单独食用也可作为营养增补剂，其所涉及的神经活性适应范围广，对于缓解现代人快节奏高压力生活所带来的种种不适感有重要的广谱改善作用。



[0023]图1为在小鼠悬尾实验中不同萱草天然粉剂的抗抑郁效果；
[0024]图2为在小鼠强迫游泳实验中不同萱草天然粉剂的抗抑郁效果；
[0025]图3为在小鼠悬尾实验中不同给药剂量萱草天然粉剂的抗抑郁效果；
[0026]图4为在小鼠强迫游泳实验中不同给药剂量萱草天然粉剂的抗抑郁效果；
[0027]图5为在小鼠睡眠实验中不同给药剂量萱草天然粉剂下小鼠的睡眠潜伏期；
[0028]图6为在小鼠睡眠实验中不同给药剂量萱草天然粉剂下小鼠的睡眠时间；
[0029]图中，*、林和林*分别代表经方差分析与空白对照存在ρ〈0.05、ρ〈0.01和p〈0.001的显著区别，#、##和###分别代表经方差分析与阳性对照存在p〈0.05、p〈0.01和p〈0.0Ol的显著区别。

[0030]下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明不限于以下实施例。
[0031]下述实施例中所采用的乙醇和甘油均为食品级，购自美国陶氏化学公司。
[0032]下述实施例中的动物实验选用ICR小鼠，体重22_36g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。实验动物饲养于农业部转基因生物食用安全监督检验测试中心，饲养温度:20-26°C，湿度:40%-70%，实验动物饲喂常规饲料。每组动物实验由12只小鼠组成，每只小鼠只使用一次。
[0033]下述实施例中采用高效液相色谱法检测萱草天然粉剂中的黄酮成分，色谱条件如下:色谱柱:Purospher STAR RP-18 (150mmX4.6mm, 5 μ m);流动相:流动相A为体积分数为5%的乙酸水溶液，流动相B为甲醇；采用梯度洗脱方式:0-17分钟:95%A-88.5% A ； 17-28分钟:88.5% A-88.3% A ;28-57 分钟:88.3% A-28.3% A ;57-60 分钟:28.3% A-95% A ;流速:0.8ml/min ;柱温:40°C ;进样量:10μ I ;检测波长:254nm。根据槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷、芦丁和橙皮苷在该色谱条件下的标准曲线，计算其在萱草天然粉剂中的含量。
[0034]根据国标标准GB/T5413.29-2010，测定下述实施例中萱草天然粉剂的溶解度。溶解度定义为每百克样品经规定的溶解过程后全部溶解的质量，具体过程如下:称取5.0Og试样于50ml烧杯中，用25_30°C的水25ml,分数次将试样溶解于离心管中，加塞,将离心管放于30°C水浴中保温5min后取出，上下充分振摇3min，使试样充分溶解。于离心机中以1000r/min转速离心10min使不溶物沉淀,倾出上清液并用棉栓拭清管壁,再加入30°C的水25ml,加塞,上下充分振摇3min,使沉淀悬浮,再于离心机中以1000r/min转速离心10min,倾出上清液并用棉栓拭清管壁。用少量水将沉淀物洗入已恒量的称量皿中，先在水浴上蒸干，再于IOCTC干燥Ih,置于干燥器中冷却30min,称量,再于IOCTC干燥30min后,取出冷却称量，至前后两次质量相差不超过2mg。
[0035]试样的溶解度按下式计算:
[0036]