专利名称：新型胰高血糖素类似物的制作方法 对血糖水平的精确控制对人以及其它哺乳动物都极其重要。十分确定的是胰岛素和胰高血糖素两种激素对于维持适当的血糖水平很重要。胰岛素通过葡萄糖的外周摄取增加和自肝脏输出的葡萄糖减少来降低血糖水平而作用于肝脏和外周组织，与此同时，胰高血糖素通过糖异生和糖原分解上调来提高血糖水平而主要作用于胰腺和肝脏。另据报告，胰高血糖素增加脂解作用，诱导酮症并降低血浆中的血浆甘油三酯水平[Schade和EatondciaDi abeto Iogi ca, 1977,74,62]。 人胰高血糖素是长度为29个残基的线性肽，胰高血糖素的大小和序列的独特组合导致在制备和使用中处理肽相当困难。该分子太小而不能拥有大量且稳定性的三级结构，但又大到足以参与相变，例如形成β折叠样聚集体或原纤维结构。因此，除了胰高血糖素在pH 3-9范围内的固有低溶解度外，处理溶液中的胰高血糖素的问题还起因于将完全随机的构象与更有特色的结构分开的相当小的能量屏障，所述更有特色的结构包括例如结合受体所需的结构及能够形成原纤维的结构。在处理胰高血糖素溶液过程中，必须在酸性和碱性制剂之间做出选择，因为在PH 3-9的溶解度极低。由于在天然胰高血糖素中存在易于碱催化的脱酰胺的若干残基，在高PH (>10)时仅可短时间处理胰高血糖素。市售胰高血糖素(Eli Lilly和Novo Nordisk)作为冻干固体供应,在使用前必须溶解。其该溶液必须在制备后马上注射，因为当其溶解于简单水性制剂时，胰高血糖素容易聚集并原纤化。胰高血糖素溶液在溶解后若干小时可变粘或混浊，因而变得不适于注射。对可能需要快速起作用以消解低血糖的患者或亲属而言，溶解过程本身是个大问题，因为患者可能在精神上受到低血糖的影响，亲属可能未受到关于溶解过程的训练。胰高血糖素除了用于治疗急性低血糖(例如“胰岛素休克”)的周知用途外，最重要的应用基于其对平滑肌的解痉作用，其在临床上与若干成像方法尤其是腹部的X射线联合使用。公开了不同的基于胰高血糖素的类似物和GLP-I/胰高血糖素受体协同激动剂的若干专利申请是本领域已知的，例如专利W02008/086086、W02008/101017、W02007/056362、W02008/152403和W096/29342。公开于这些专利的一些GLP-I/胰高血糖素受体协同激动剂涉及相对于天然人胰高血糖素的特定突变。所公开的其它胰高血糖素类似物在天然人胰高血糖素的特定位置上是聚乙二醇化的(例如W02007/056362)或者是酰化的(例如W096/29342)。用于防止低血糖的胰高血糖素公开于例如专利申请US 7314859中。本发明肽提供在溶液中的物理稳定性得到改进的新型改良胰高血糖素肽。发明简述 本发明涉及在溶液中的物理稳定性得到改进的新型胰高血糖素肽，涉及所述肽在治疗中的用途，涉及包括将所述肽给予患者的治疗方法，并涉及所述肽在制备用于治疗糖尿病、肥胖症和相关疾病和病况例如低血糖的药物中的用途。在第一实施方案(实施方案I)中，本发明涉及包含SEQ ID I的胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酰胺、羧酸或前药，其中第25位的氨基酸残基即X25代表His、Lys、Ile、Leu、Ala、Met、Cys、Asn、Val、Ser> Gin、Asp、Glu、Thr 或(p) Tyr0本发明进一步涉及本发明化合物在治疗中的用途，涉及包含本发明化合物的药物组合物和本发明化合物在制备药物中的用途。附图阐述 图I显示来自实施例I的胰高血糖素类似物的ThT测定的结果，其显示所述化合物在物理应力下未形成原纤维。图2显示来自实施例2的胰高血糖素类似物的ThT测定的结果。I) 250 μΜ实施例2的胰高血糖素类似物、10 mM Hepes缓冲液、pH 7. 5 ；2) 290 μΜ胰高血糖素、50 mM甘氨酸、pH 2. 5;和3) I. 45 mM胰高血糖素、50 mM甘氨酸、pH 2.5。 发明阐述 本发明涉及在25位具化学修饰的胰高血糖素肽，所述化学修饰出人意料地改进所述胰高血糖素肽在水溶液中的物理或化学稳定性。本发明的其它实施方案包括如下实施方案 2.实施方案I的胰高血糖素肽，其包含式[I]氨基酸序列
His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-X25-LeU-Met-Asn-Thr [I] O3.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表His、Lys或(P) Tyr。4.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表Lys。5.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表His。6.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表(P) Tyr。7.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X27代表Leu。8.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表Tyr，X27代表Leu。9.实施方案2的胰高血糖素肽，其中X25代表Arg，条件是X27代表Leu。10. 一种胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酰胺、羧酸或前药，其中第25位的氨基酸残基即 X25 代表 His、Arg、Lys、lie、Leu、Ala、Met、Pro、Cys> Asn、Val、Ser> Gin、Asp、GlU、Thr或(p)Tyr ;其中所述胰高血糖素肽为胰高血糖素受体的激动剂。11. 一种胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酰胺、羧酸或前药，其中第25位的氨基酸残基即 X25 代表 His、Arg、Lys、lie、Leu、Ala、Met、Cys> Asn、Val、Ser> Gin、Asp、Glu、Thr 或(p)Tyr ；
其中所述胰高血糖素肽为胰高血糖素受体的激动剂，且EC5tl < I nM，例如O. InM。12.实施方案10-11的胰高血糖素肽，其包含式[I]氨基酸序列 His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-A
Ia-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-X25-Leu-Met-Asn-Thr[I]。13.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表His、Arg、Lys或(p)Tyr014.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表His。15.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表Arg。
16.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表Lys。17.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表(P) Tyr018.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X27代表Leu。19.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表Tyr，X27代表Leu。20.实施方案10-12中任一个的胰高血糖素肽，其中X25代表Arg，X27代表Leu。21.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X15代表Glu。22.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X21代表Glu。23.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X28代表Ser或Glu。24.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X28代表Ser。25.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X28代表Glu。26.选自以下的前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽
[Glu21, Arg25, Leu27]胰高血糖素
H-HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQEFVQRLLN T-OH ；
[(O-磷酸)Tyr25, Leu27]胰高血糖素


本发明涉及具有改进的溶解度和稳定性的胰高血糖素肽激动剂，涉及所述肽在治疗中的用途，涉及包括将所述肽给予有需要的患者的治疗方法，并涉及所述肽在制备药物中的用途。就低血糖、糖尿病和肥胖症以及与低血糖、糖尿病和肥胖症有关的各种疾病或病况的治疗而言，本发明的胰高血糖素肽尤其引人关注。