衣原体抗原制作方法_G·格兰迪专利（衣原体,抗原）-早鸽网

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衣原体抗原制作方法

专利名称

衣原体抗原制作方法
发明者

G·格兰迪, O·芬科, R·M·格里范蒂尼
公开日

2012年5月2日
申请日期

2010年3月8日
优先权日

2009年3月6日
申请人

诺华有限公司
文档编号

A61K39/118GK102438650SQ201080019379
关键字

衣原体抗原
权利要求

1.一种用于治疗或诊断的蛋白质，所述蛋白质含有SEQ ID NO 2,SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 6, SEQ ID N08、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 50,SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 136 或 SEQ ID NO 140 其中任意一个的氨基酸序列2.一种蛋白质，其特征在于，所述蛋白质与权利要求1所述蛋白质具有50%或更高的序列相同性3.一种包含权利要求1或2所述氨基酸序列的片段的蛋白质4.如权利要求3所述的蛋白质，其特征在于，所述片段包含权利要求1或2所述氨基酸序列的至少8个连续氨基酸5.一种用于治疗或诊断的抗体，所述抗体与权利要求1-4中任一项所述的蛋白质结合6.一种用于治疗或诊断的核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1-5中任一项所述的蛋白质或抗体7.如权利要求6所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含SEQID NO=USEQ ID NO 3,SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 13,SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 47, SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 53、SEQ ID NO 135 或 SEQ ID NO 139中任意一个的氨基酸序列8.如权利要求6所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含SEQID NO=USEQ ID NO 3,SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 13,SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 47, SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 53、SEQ ID NO 135 或 SEQ ID NO 139中任意一个的核苷酸序列的片段9.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含与权利要求6-8中任一项所述的核酸分子互补的核苷酸序列10.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含的核苷酸序列与权利要求6-9中任一项所述的核酸分子具有50%或更高的序列相同性11.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子能在高度严紧条件下与权利要求6-10 中任一项所述的核酸分子杂交12.一种用于治疗或诊断的载体，所述载体包含权利要求6-11中任一项所述的核酸13.一种用于治疗或诊断的宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求6-12中任一项所述的核酸或载体14.一种用于治疗或诊断的组合物，所述组合物包含上述权利要求中任一项所述的蛋白、抗体、核酸分子、载体或宿主细胞15.上述权利要求中任一项的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物用作疫苗组合物16.上述权利要求中任一项的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物用作药物17.上述权利要求中任一项的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物用于治疗预防或诊断衣原体18.如权利要求17所述的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物用于治疗、预防或诊断沙眼衣原体19.上述权利要求中任一项的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物用于在哺乳动物中引起免疫应答20.上述权利要求中任一项的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物用于引起能中和衣原体感染的抗体21.如权利要求1-19中任一项所述的蛋白或核酸，其特征在于，所述免疫应答是 CD4+Thl细胞介导的应答22.权利要求1-13中任一项的蛋白、抗体、核酸、载体或宿主细胞在药物生产中的应用，所述药物用于治疗或预防衣原体细菌，特别是沙眼衣原体造成的感染23.一种治疗、预防或诊断患者中衣原体的方法，所述方法包括施用治疗有效量的上述权利要求中任一项所述的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物24.上述权利要求中任一项的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物用作与一种或多种额外衣原体抗原或其编码核酸联用的药物25.如权利要求M所述的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述联用包含 CT279+CT601、CT372+CT443、CT733+CT153、CT456+CT381、 CT279+CT153+CT733+CT601、CT279+CT601+CT372+CT443、CT823+CT733+CT043+CT456、 CT387+CT812+CT869, CT387+CT812C+CT869 (或其变体)26.如权利要求M或25所述的蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物，其特征在于，所述蛋白、抗体、核酸、载体、宿主细胞或组合物和所述一种或多种额外衣原体抗原或其编码核酸联合制备用于于同时、单独或依序给予27.—种诊断衣原体感染的方法，所述方法包括(a)产生针对权利要求1-4中任一项所述的蛋白的抗体；(b)在适合形成抗体-抗原复合物的条件下，将步骤(a)的抗体与怀疑感染衣原体的生物样品接触；以及(c)检测所述复合物，其中所述复合物的检测指示衣原体感染
技术领域

本发明涉及沙眼衣原体(Chlamydia trahomatis)蛋白质及其应用的领域
背景技术

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权力要求
说明书
法律状态

专利名称：衣原体抗原的制作方法疫苗开发被认为是控制沙眼衣原体(C. trachomatis)感染的关键。抗沙眼衣原体的疫苗显示在生殖道粘膜中引起T-细胞和/或B-细胞免疫。抗沙眼衣原体的保护性免疫看来依赖于Thl-极化细胞介导的免疫应答，特别是分泌IFN γ的⑶4+淋巴细胞。例如，小鼠中⑶4+T细胞耗尽引起保护性免疫缺失，而过继转移衣原体特异性CD4+T细胞赋予抗沙眼衣原体攻击的保护。此外，最近研究报道小鼠中的沙眼衣原体感染引起CD4-Thl保护性免疫应答，表明关键衣原体抗原由MHC II型途径加工和呈递(Brunham RC 和 Rey-Ladino J(2005) ,Nat Rev Immunol 5:149-1611 ；Su H 禾口 Caldwell HD(1995), Infect Immun 63:3302-3308)。尽管B细胞和抗体在确定原发性感染中没有决定性作用，它们可能对增强保护效应T细胞应答很重要，并需要用于通过多种机制控制再感染如抗体介导的中和与调理来控制再感染。由于针对沙眼衣原体感染的免疫保护可能由接种靶向CD4+T细胞并能引起B细胞应答的沙眼衣原体蛋白所介导，鉴定这些蛋白质特别重要。因此，本发明的目的是提供用于衣原体疫苗的其它抗原。
本发明提供鉴定衣原体抗原用于治疗、预防和/或诊断衣原体感染。具体地，本发明提供用于治疗、预防或诊断衣原体感染(以及，特别是沙眼衣原体感染)的一种或多种(例如 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、 27、28、29 或 30 种)以下沙眼衣原体抗原例如 CT733、CT153、CT601、CT279、CT443、CT372、 CT456、CT381、CT255、CT341、CT716、CT745、CT812、CT869、CT387、CT166、CT175、CT163、 CT214、CT721、CT127、CT043、CT823、CT600、CT711、CT114、CT480、CT089、CT734 和 CT016，例如 CT733、CT153、CT601、CT279、CT443、CT372、CT456、CT381、CT255、CT341、CT716 和 CT745 中的一种和多种。具体地，本发明提供用于治疗、预防和/或诊断衣原体感染(以及，特别是沙眼衣原体感染)的蛋白质。用蛋白质免疫优选能引起特异性CD4+Thl细胞介导的抗衣原体应答。在一种实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示序列。该蛋白质也称为“CT733”并标注为沙眼衣原体的假拟蛋白。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO 3 和SEQ ID NO 4所示序列。该蛋白质也称为“CT153”并标注为沙眼衣原体的MACPF/膜攻击复合体(MAC)/穿孔蛋白。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :5和SEQ ID NO :6所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT601”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :7和SEQ ID NO :8所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT279”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :9和SEQ ID NO: 10所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT443”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 12所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的 “CT372”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:13和SEQ ID N0:14所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT456”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO 15和SEQ ID NO 16所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT381”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:39和SEQ ID N0:40所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT255”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:41和SEQ ID N0:42所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT341”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:43和SEQ ID N0:44所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT716”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:45和SEQ ID N0:46所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT745”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸序列和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:47和SEQ ID NO :48所示序列。该蛋白质也称为沙眼衣原体的 “CT387”并标注为假定蛋白。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:49和SEQ ID N0:50所示序列。该蛋白质也称为沙眼衣原体的“CT812”并标注为多态性外膜蛋白。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:51和SEQ ID N0:52所示序列。该蛋白质也称为沙眼衣原体的“CT869”并标注为多态性外膜蛋白。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含 SEQ ID N0:53和SEQ ID NO力4所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT166”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID N0:55和SEQ ID NO 56所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT175”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :155和SEQ ID NO :156所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT163”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :159和SEQ ID NO :160所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT214”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :163和SEQ ID NO :164所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT721”。在另一实施方式中，所述蛋白质的核酸和/或氨基酸序列分别包含SEQ ID NO :167和SEQ ID NO :168所示序列。该蛋白也称为沙眼衣原体的“CT127”。在一些实施方式中，所述蛋白是上述蛋白的变体。例如，所述蛋白可包含在SEQ ID NO :2、4、6、8、10、12、14、16、18、19、20、21、22、23、24、40、42、44、46、48、50、52、54、56、136、 140、156、160、164 或 168 的序列中，例如在 SEQ ID NO :2、4、6、8、10、12、14、16、40、42、44 或 46的序列中的一种或多种突变(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多突变)。优选突变不引起显著蛋白构象改变，从而本发明的蛋白保留引起抗野生型衣原体蛋白免疫应答的能力。具有 SEQ ID NO :2、4、6、8、10、12、14、16、40、42、44、46、48、50、52、54 和 56 所示序列的蛋白为野生型蛋白。在一些实施方式中，所述一种或多种突变在所述蛋白的N末端部分，例如在所述蛋白的1和20残基之间、21和40残基之间、41和60残基之间、1和60残基之间，或在所述蛋白的1和40残基之间。在一些实施方式中，所述一种或多种突变存在于所述蛋白的C 末端部分，例如在所述蛋白的C末端20残基之间、离C末端21和40残基之间、离C末端41 和60残基之间、离C末端1和60残基之间，或在所述蛋白离C末端的1和40残基之间。优选地，所述氨基酸序列含有少于20个突变(例如，19、18、17、16、15、14、13、12、 11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1)。优选各突变涉及单个氨基酸并优选点突变。所述突变可各是独立的取代、插入或缺失。优选的突变是单氨基酸取代。相对于衣原体序列，所述蛋白也可包含一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9个等)单氨基酸缺失。相对于衣原体序列，所述蛋白也可包含一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9个等)插入(例如，各为1、2、3、4或 5个或更多氨基酸)。缺失、取代或插入可发生在N末端和/或C末端，或者可以出现在两末端之间。因此，截短是缺失的一个例子。截短可包括在N末端和/或C末端缺失多达40 个(或更多)氨基酸(例如，1-10、11-40、41-70、71-100个或更多氨基酸)。氨基酸取代可以是其它19种天然产生氨基酸中的任一个。优选地，取代突变是保守取代。或者，取代突变是非保守取代。保守取代通常定义为弓I入的氨基酸具有充分相似的化学性质，例如具有相关侧链(如碱性、带正电氨基酸可被另一碱性、带正电氨基酸取代)，以保留所述分子的结构和生物学功能。遗传编码的氨基酸通常分为四类(1)酸性，即天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性，即赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性，即丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不带电的极性氨基酸，即甘氨酸、天冬酰胺、谷胺酰胺、胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。有时将苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸一起称为芳族氨基酸。通常，这些家族中的单个氨基酸的替换不会对生物活性产生重要影响。表 1显示可用于本发明的保守取代的进一步示例。表 1本发明提供鉴定衣原体抗原用于治疗、预防和/或诊断衣原体感染。具体地，本发明提供来自沙眼衣原体的CT733、CT153、CT601、CT279、CT443、CT372、CT456、CT381、CT255、CT341、CT716、CT745、CT387、CT812、CT869、CT166、CT175、CT163、CT214、CT721、CT127、CT043、CT823和/或CT600用于治疗、预防或诊断衣原体感染。

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