专利名称：由黄芪、红景天和菝葜制成的药物组合物及其制备方法 脑功能障碍包括脑组织缺血或缺氧损伤、记忆力障碍、痴呆等。脑组织对缺血、缺氧非常敏感。随着社会老年化趋势和人均寿命的延长，缺血性脑血管疾病的发病率明显上升，严重危害人类健康，给社会和家庭带来沉重负担。脑缺血和再灌注引起的认知功能障碍也日益受到人们的重视。记忆力障碍包括记忆力衰退和记忆力低下等。痴呆是常见的老年病，也是当今医药界公认的难治病。据世界卫生组织报道，65岁以上的老年人中，有10％的人智能出现障碍，而其中60％的人发生痴呆，而且随着年龄的增长，痴呆发生率呈大幅度上升的趋势。老年痴呆根据症状发展的快慢可分为慢性和急性两大类，其中慢性痴呆约占80％左右，包括老年性痴呆、血管性痴呆和两者同时存在的混合性痴呆。引起痴呆的病因有很多，其中最主要的是阿尔茨海默病(AD)和血管性痴呆(VD)，血管性痴呆主要是由脑血管病所致。痴呆以记忆力障碍为最常见的表现。目前，用于改善脑功能的药物较多，但是一般配方较单一，很难具有多方面协同作用，不能同时具有增强大脑功能、延缓大脑衰老、改善痴呆症状和提高智力的功效，并且长期使用容易发生蓄积中毒与副作用。 黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。味甘，性温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌的功效。黄芪的主要有效成分为黄芪多糖和黄芪总皂苷。现代药理实验表明，黄芪提取物对大鼠和小鼠脑缺血再灌注具有保护作用，能提高小鼠耐氧能力，能改善免疫抑制小鼠的学习记忆能力和免疫功能。 红景天为景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.F.et Thoma)H.Ohba的干燥根及根茎。味甘、苦，性平，归肺、心经，具有益气活血、通脉平喘的功效。红景天的含有多种活性成分，主要有效成分为红景天苷、酪醇和红景天素等。现代药理实验表明，红景天具有抗疲劳、抗衰老、抗氧化等功能，能提高小鼠耐氧能力；红景天提取物可以提高小鼠的学习能力；红景天素对老龄大鼠有明显抗老化作用，对阿尔茨海默病模型大鼠具有防治、保护和抗痴呆效应。 菝葜为百合科植物菝葜Smilax china L.的干燥根茎。味甘、微苦涩，性平，归肝、肾经，具有祛风利湿、解毒散瘀的功效。菝葜的主要有效成分为菝葜总皂苷，包括薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元、菝葜皂苷元、异菝葜皂苷元等。现代药理实验表明，菝葜有良好的抗炎作用，对阿尔茨海默病有效。 目前，利用黄芪或其提取物、红景天或其提取物、菝葜或其提取物的相互作用，配伍组方，制备用于改善脑功能的药物，尚未见报道。
为了满足临床需要，提高脑功能障碍患者的生命质量，本发明提供了一种主要用于改善脑功能的药物组合物及其制备方法，主要由黄芪或其提取物、红景天或其提取物和菝葜或其提取物制成，对脑缺血或脑缺氧损伤有显著保护作用，能显著提高老年性痴呆、血管性痴呆大鼠的学习记忆能力，产生了意想不到的效果。 本发明药物组合物由黄芪、红景天和菝葜制成，其重量份数为黄芪400～10000份、红景天100～2000份、菝葜150～3000份，优选为黄芪1000～5000份、红景天200～1000份、菝葜300～1500份，进一步优选为黄芪2000份、红景天400份、菝葜600份。
本发明药物组合物中的黄芪、红景天、菝葜可以用适宜的溶剂和方法单独或混合提取加工得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一临床上或药学上可接受的剂型。“单独提取”是指，黄芪、红景天、菝葜每一味药材分别通过不同的工艺单独提取得到提取物，再将各提取物混合得到总提取物。“混合提取”是指，黄芪、红景天、菝葜三味药材一起提取得到总提取物；或者其中的两味药材一起提取得到提取物，再与另一味药材的提取物混合得到总提取物。所得的总提取物中的主要有效成分为黄芪总皂苷、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷，或者为黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷，主要有效成分的总含量不低于30％，最好不低于50％。
上述黄芪、红景天、菝葜的提取制备方法中，所用的溶剂是指药学上常用的溶剂，可以是水或乙醇等；所用的方法是指中药提取的一般方法，可以是煎煮法、回流提取法、浸渍法、渗漉法或连续提取法等。例如，黄芪可以用水提醇沉的方法制备得到黄芪总皂苷或黄芪多糖，红景天可以用乙醇回流提取或水提醇沉的方法制备得到红景天提取物，菝葜可以用乙醇回流提取或水提醇沉的方法制备得到菝葜总皂苷。本发明提供了黄芪(以总皂苷或多糖为主要有效成分)、红景天(以红景天苷为主要有效成分)、菝葜(以总皂苷为主要有效成分)的优选提取制备工艺。
原料药的具体制备方法如下 因为黄芪总皂苷和黄芪多糖在改善脑功能方面均有活性，所以黄芪的“单独提取”方法因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分别如下 以总皂苷为主要有效成分的黄芪的优选提取制备工艺，如下 取黄芪药材，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷得率为0.5～2％，总皂苷的含量不低于50％，其中黄芪甲苷的含量不低于2.0％。
黄芪还可以通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺 工艺一取黄芪药材，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为60％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷得率为2～4％，总皂苷的含量不低于40％，其中黄芪甲苷的含量不低于1％。
工艺二取黄芪药材，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理1次使含乙醇量为60％，冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，并减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷得率为3～5％，总皂苷含量的不低于30％，其中黄芪甲苷的含量不低于1％。
以多糖为主要有效成分的黄芪的优选提取制备工艺，如下 取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，合并提取液，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，滤过，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，滤过，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。通过本工艺制备的黄芪多糖得率为0.5～2％，多糖的含量不低于50％。
黄芪还可以通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺 工艺一取黄芪药材，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.23，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，收集沉淀，真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪多糖得率为2～4％，多糖的含量不低于40％。
工艺二取黄芪药材，加10倍量80％乙醇提取4小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，每次2小时，每次加水10倍量，合并提取液，滤过，滤液加乙醇使含醇量达85％，滤过，滤液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪多糖得率为3～4％，多糖的含量不低于35％。
红景天可以通过以下工艺提取制备，但不仅限于下述工艺 工艺一取红景天药材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小时，第二次加8倍量，回流1小时，第三次加8倍量，回流1小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，加2倍量水，搅匀，冷藏24小时以上，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，浓缩液用半量石油醚提取三次，弃去石油醚，再用等量正丁醇提取四次，合并提取液，减压回收，真空干燥或喷雾干燥，即得。通过本工艺制得的红景天提取物得率为6～8％，总酚性物质不低于50％，其中红景天苷不低于3％。
工艺二取红景天药材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小时，第二次加8倍量，回流1小时，第三次加8倍量，回流1小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，加2倍量水，搅匀，冷藏24小时以上，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，取浓缩液，上大孔树脂柱或聚酰胺柱，先用浓缩液重量30倍量的水洗脱，弃去洗脱液，再用30倍量80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收，真空干燥或喷雾干燥，即得。通过本工艺制得的红景天提取物得率为6～8％，总酚性物质不低于50％，其中红景天苷不低于3％。
工艺三取红景天药材，加60％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小时，第二次加8倍量，回流1小时，第三次加8倍量，回流1小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，加2倍量水，搅匀，冷藏24小时以上，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，加乙醇使乙醇含量为80％，搅匀，冷藏24小时以上，滤过，滤液减压回收乙醇，真空干燥或喷雾干燥，即得。或者将滤液减压回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，用等量正丁醇提取四次，合并提取液，减压回收，真空干燥或喷雾干燥，即得。通过本工艺制得的红景天提取物得率为6～8％，总酚性物质不低于50％，其中红景天苷不低于3％。
工艺四取红景天药材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小时，第二次加8倍量，回流1小时，第三次加8倍量，回流1小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，加2倍量水，搅匀，冷藏24小时以上，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，用等量正丁醇提取四次，合并提取液，减压回收，真空干燥或喷雾干燥，即得。通过本工艺制得的红景天提取物得率为6～8％，总酚性物质不低于50％，其中红景天苷不低于4％。
以总皂苷为主要有效成分的菝葜的优选提取制备工艺，如下 取菝葜药材，切成薄片，加70％乙醇回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml含生药2g，放冷，加1/2体积的正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇提取液，减压回收溶剂，并真空干燥，取浸膏粉加适量水溶解，加于已处理好的树脂柱上，先用水3～4BV/小时冲洗至近无色，再用70％乙醇以2～3BV/小时冲柱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备的菝葜总皂苷得率为1～3％，菝葜总皂苷的含量不低于50％。
菝葜还可通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺 工艺一取菝葜药材，切成薄片，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.35～1.40，加于已处理好的树脂柱上，先用水3～4BV/小时冲洗至近无色，再用70％乙醇以2～3BV/小时冲柱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备的菝葜总皂苷得率为3～4％，菝葜总皂苷的含量不低于30％。
工艺二取菝葜药材，切成薄片，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.35～1.40，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，滤过，收集沉淀，真空干燥，即得。通过本工艺制备的菝葜总皂苷得率为4～6％，菝葜总皂苷的含量不低于20％。
本发明药物组合物，还可以由黄芪总皂苷或者黄芪多糖代替黄芪、红景天提取物代替红景天、菝葜总皂苷代替菝葜投料制得，按照提取物相对于药材的得率计算，本发明药物组合物可以有以下两种不同配比，重量份分别为 配比1黄芪总皂苷2～200份、红景天提取物6～160份、菝葜总皂苷2～90份，优选为黄芪总皂苷5～100份、红景天提取物12～80份、菝葜总皂苷3～45份，进一步优选为黄芪总皂苷10～40份、红景天提取物24～32份、菝葜总皂苷6～18份。
配比2黄芪多糖2～200份、红景天提取物6～160份、菝葜总皂苷2～90份，优选为黄芪多糖5～100份、红景天提取物12～80份、菝葜总皂苷3～45份，进一步优选为黄芪多糖10～40份、红景天提取物24～32份、菝葜总皂苷6～18份。
上述药物组合物中，黄芪总皂苷的主要有效成分为总皂苷，总皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，黄芪甲苷的含量不低于1.0％，最好不低于2.0％；黄芪多糖的主要有效成分的为多糖，多糖的含量不低于35％，最好不低于50％；红景天提取物的主要有效成分为总酚性物质，总酚性物质的含量不低于50％，其中红景天苷的含量不低于3％；菝葜总皂苷的主要有效成分为总皂苷，总皂苷的含量不低于20％，最好不低于50％。
本发明药物组合物，药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。上述组成，若以克为单位，可以制成10～1000次用量的制剂，如作为水针或粉针，可制成10～2000支，每次用量1～10支。如作为片剂或胶囊剂，可制成10～2000片，每次服用1～10片。上述组成是按重量份作为配比的，如大规模生产可以以千克或吨为单位，小规模生产也可以以克为单位。上述重量份数对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组合物，主要用于制备改善脑功能的药物。药理药效研究表明，本发明药物组合物可以显著提高对东莨菪碱造成记忆障碍的小鼠、正常小鼠、老年性痴呆大鼠、血管性痴呆大鼠的学习记忆能力，显著提高小鼠的常压耐缺氧能力；可用于提高学习记忆能力，保护脑缺血或缺氧损伤，治疗老年性痴呆、血管性痴呆等。
本发明药物组合物，可以制成任一临床上或药学上可接受的剂型，优选注射剂和口服制剂，可以以口服或胃肠外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。
用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供静脉滴注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。
用于口服时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂，以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂，依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂，包括滴丸、糖丸、小丸等。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂，可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。口服混悬剂系指难溶性固体药物，分散在液体介质中，制成供口服的混悬液体制剂，也包括干混悬剂或浓混悬液。糖浆剂系指含有药物的浓蔗糖水溶液。
上述药物组合物的制剂，可采用现有制药领域中的常规方法生产，必要时可以添加各种药学上可接受的辅料，包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，可选用水性溶剂或非水性溶剂。最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9％氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、填充剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、乳酸、枸橼酸-枸橼酸钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；常用的增溶剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充剂包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂为苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射剂常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。常用填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；常用粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；常用崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；常用润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。
本发明药物组合物，具有下列优点 (1)提供了一种新的复方改善脑功能的药物，满足临床需要。
(2)对本发明药物组合物中药物组份的用量进行了大量摸索研究，通过本发明药物组合物对东莨菪碱造成记忆障碍的小鼠及正常小鼠学习记忆的影响的研究，筛选出具有显著疗效的重量配比。
(3)药理药效研究表明，本发明药物组合物可以显著降低AD大鼠Y-迷宫实验达到学会标准的训练次数，显著降低大脑皮层脂褐素含量；显著降低VD大鼠Y-迷宫实验达到学会标准的训练次数，显著延长一次性被动回避实验的步入潜伏期；显著提高小鼠的常压耐缺氧能力，显著延长小鼠常压缺氧状态下的存活时间；并且本发明药物组合物的效果优于黄芪或其提取物、红景天或其提取物、菝葜或其提取物单独给药的效果，具有协同增效的作用，产生了意想不到的效果。
(4)本发明药物组合物，可以以黄芪、红景天、菝葜投料，也可以以黄芪提取物、红景天提取物、菝葜总皂苷为原料，可制成任一临床上或药学上可接受的剂型。
(5)对本发明药物组合物制成的制剂或所用的提取物，进行了鉴别、含量测定、稳定性研究等，有效成分明确、含量高，制剂稳定性好，便于控制产品质量，保证临床用药安全。
(6)提供了优选的制备工艺，简便易行，且制剂质量高，适应于工业化大生产。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物组合物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学实验和稳定性实验。本发明药物组合物具有下列有益效果，但不应将此理解为本发明药物组合物仅具有下列有益效果。
以下实验例中用HHB1代替以黄芪总皂苷、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分的药物组合物，用HHB2代替以黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分的药物组合物。以下实验例中所用的黄芪总皂苷为实施例1制备所得，所用的黄芪多糖为实施例2制备所得，所用的红景天提取物为实施例3制备所得，所用的菝葜提取物为实施例4制备所得。
实验例1本发明药物组合物对小鼠学习记忆影响 受试动物健康小鼠，320只，体重20～25g，雄性，随机分为32组，每组10只。供试品生理盐水市购 黄芪总皂苷片自制，相当于原药材10g 黄芪多糖片自制，相当于原药材10g 红景天片自制，相当于原药材2g 菝葜片自制，相当于原药材3g (黄芪+红景天+菝葜)1片自制，见表1-1(以黄芪总皂苷、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分) (黄芪+红景天+菝葜)2片自制，见表1-1(以黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分) 表1-1本发明药物组合物对东莨菪碱造成记忆获得障碍模型小鼠学习记忆的影响(

n＝10) 与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01； 与黄芪总皂苷注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与黄芪多糖注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01； 与红景天注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01；与菝葜注射液组相比较gp＜0.05，hp＜0.01。
实验方法小鼠随机分为32组，每组10只，分别为对照组、模型组和各给药组。对东莨菪碱造成记忆获得障碍的影响各给药组按表1-1灌胃给药(给药剂量按原药材计)，对照组及模型组给于等量生理盐水，给药30d，每天一次。给药第29d采用跳台法、避暗法进行训练，训练前20min每组腹腔注射东莨菪碱1mg/kg，对照组及模型组注射生理盐水。24h后测试潜伏期长短，作为记忆指标。
实验结果及结论 结果见表1-1。与对照组相比较，黄芪总皂苷片、黄芪多糖片、红景天片和菝葜片可显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05)；黄芪4～100g、红景天1～20g、菝葜1.5～30g制成的(黄芪+红景天+菝葜)1片和(黄芪+红景天+菝葜)2片可显著或极显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05，p＜0.01)，黄芪10～50g、红景天2～10g、菝葜3～15g制成的片的作用更好。本发明药物组合物的效果优于单用黄芪、红景天或菝葜的效果，提示本发明药物组合物具有协同改善药物致记忆获得障碍小鼠的脑功能的作用。
实验例2本发明药物组合物对正常小鼠学习记忆的影响 受试动物健康小鼠，270只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为27组，每组10只。
供试品 氯化钠注射液(对照组)250ml∶2.25g，山东长富洁晶药业有限公司 黄芪总皂苷注射液自制，相当于原药材10g 黄芪多糖注射液自制，相当于原药材10g 红景天注射液自制，相当于原药材2g 菝葜注射液自制，相当于原药材3g (黄芪+红景天+菝葜)1注射液自制，见表1-2(以黄芪总皂苷、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分) (黄芪+红景天+菝葜)2注射液自制，见表1-2(以黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分) 实验方法小鼠随机分为27组，每组10只，分别为对照组和各给药组。对照组腹腔注射给予氯化钠注射液，受试药物按表1-2所示剂量用氯化钠注射液稀释至所需浓度腹腔注射给药，每天一次，连续给药30天。进行正常小鼠水迷宫实验小鼠第一次从近处(A处)开始训练，第二次延长(从B处)开始训练，连续训练3次，至80％以上动物可以到达终点；末次，从起点开始训练。计算各组动物的错误次数和到达终点的时间。
实验结果及结论结果见表1-2。与对照组相比较，各给药组小鼠在水迷宫实验中，平均到达终点的时间及错误次数均低于对照组。黄芪总皂苷注射液、黄芪多糖注射液、红景天注射液和菝葜注射液可显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05)；黄芪4～100g、红景天1～20g、菝葜1.5～30g制成的(黄芪+红景天+菝葜)1注射液和(黄芪+红景天+菝葜)2注射液对可显著或极显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05，p＜0.01)，黄芪10～50g、红景天2～10g、菝葜3～15g制成的注射液的作用更好。
表1-2本发明药物组合物对正常小鼠学习记忆的影响(

n＝10) 与对照组相比较*p＜0.05，**p＜0.01； 与黄芪总皂苷注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与黄芪多糖注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01； 与红景天注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01；与菝葜注射液组相比较gp＜0.05，hp＜0.01。
与黄芪总皂苷注射液组相比较，各个配比的(黄芪+红景天+菝葜)1注射液可显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05)。与黄芪多糖注射液组相比较，各个配比的(黄芪+红景天+菝葜)2注射液可显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05)。与红景天注射液相比较，各个配比的(黄芪+红景天+菝葜)1注射液和(黄芪+红景天+菝葜)2注射液可显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05)。与菝葜注射液相比较，各个配比的(黄芪+红景天+菝葜)1注射液和(黄芪+红景天+菝葜)2注射液可显著提高小鼠的学习记忆能力(p＜0.05)。
实验结果表明，本发明药物组合物可显著提高正常小鼠的学习记忆能力，并且，相同给药剂量下，各个配比的(黄芪+红景天+菝葜)1注射液和(黄芪+红景天+菝葜)2注射液的作用均优于黄芪总皂苷注射液、黄芪多糖注射液、红景天注射液和菝葜注射液单独使用的效果。提示，黄芪、红景天、菝葜具有协同提高学习记忆能力的作用。
实验例3本发明药物组合物对新生大鼠脑缺氧缺血再灌注损伤的保护作用 受试动物7日龄新生大鼠，体重180～200g，雌雄兼用。
供试品生理盐水市购 黄芪总皂苷胶囊自制，相当于原药材10g 黄芪多糖胶囊自制，相当于原药材10g 红景天胶囊自制，相当于原药材2g 菝葜胶囊自制，相当于原药材3g HHB1胶囊自制，相当于黄芪10g、红景天2g、菝葜3g(以黄芪总皂苷、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分) HHB2胶囊自制，相当于黄芪10g、红景天2g、菝葜3g(以黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分) 实验方法小鼠随机分为13组，每组10只，分别为对照组、假手术组、脑缺氧缺血再灌注组(HIR)和各给药组。脑缺氧缺血再灌注模型的制备7日龄新生鼠仰卧固定于手术板上，酒精局部消毒，分离双侧颈总动脉，应用微型血管夹夹闭双侧颈总动脉1h，同时置于恒温37℃、含8％氧的缺氧箱内缺氧2h。缺氧缺血后用6/0丝线缝合颈部切口，返回母鼠身边继续喂养直至处死。假手术组分离出双侧颈总动脉后随即缝合颈部切口，正常对照组不予任何处理。给药方法供试药物用生理盐水稀释至所需浓度，新生大鼠脑缺氧缺血后立即按表1-3所示剂量灌胃给药，24h后相同剂量重复灌胃给药。正常对照组、假手术组和HIR组灌胃给予等体积的生理盐水。标本制备各组脑缺氧缺血再灌注48h后断头取脑，脑组织置于10％中性福尔马林中固定2～3d。经常规脱水，石蜡包埋后，取相当于耳间线前2mm水平做冠状位脑组织切片，片厚4微米，HE染色，显微镜下待检。按下表计算缺氧缺血新生大鼠脑病理评分。
缺氧缺血新生大鼠脑病理评分标准 实验结果及结论脑缺氧缺血再灌注48h后，正常对照组和假手术组大鼠的病理评估总分均为1，脑组织正常，无异常变化。HIR组大鼠的脑组织损伤严重，病理评估总分平均为35.21。与HIR组相比较，各给药组大鼠的脑组织损伤均显著或极显减轻，病理评估总分均显著或极显著下降(p＜0.05，p＜0.01)。与单用黄芪、红景天或菝葜组相比较，本发明药物组合物组各剂量组的效果更好，提示，黄芪、红景天、菝葜具有协同抗脑缺血缺氧再灌注损伤的作用。
表1-3各组脑组织切片的病理评估(

n＝10) 与对照组相比较#p＜0.05；与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01； 与黄芪总皂苷注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与黄芪多糖注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01； 与红景天注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01；与菝葜注射液组相比较gp＜0.05，hp＜0.01。
实验例4本发明药物组合物对实验性老年性痴呆(AD)大鼠的作用 受试动物健康大鼠，120只，体重180～200g，雌雄兼用，随机分为12组，每组10只。
供试品氯化钠注射液(对照组)250ml∶2.25g，山东长富洁晶药业有限公司 黄芪总皂苷注射液自制，2ml，含黄芪总皂苷130mg(相当于原药材10g) 黄芪多糖注射液自制，2ml，含黄芪多糖128mg(相当于原药材10g) 红景天注射液自制，2ml，含红景天总酚性物质146mg(相当于原药材2g) 菝葜注射液自制，2ml，含菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) HHB1注射液自制，5ml∶337mg，含黄芪总皂苷130mg(相当于原药材10g)、红景天提取物156mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) HHB2注射液自制，5ml∶335mg，含黄芪多糖128mg(相当于原药材10g)、红景天提取物146mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) 实验方法大鼠随机分为12组，每组10只，分别为对照组、模型组和各给药组。对照组大鼠腹腔注射氯化钠注射液1ml，每天1次，连续6周。模型组大鼠腹腔注射半乳糖50mg/kg，每天1次，连续6周。各给药组大鼠腹腔注射半乳糖50mg/kg，每天1次，连续6周；第2周末开始按表1-4腹腔注射给药，连续4周。进行大鼠Y-型迷宫实验，计数大鼠达到学会标准的训练次数。取大鼠大脑皮层组织，测定皮层脂褐素(Lipofuscin)的含量。
实验结果及结论结果见表1-4。与对照组相比较，模型组大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数显著升高(p＜0.05)，大脑皮层脂褐素含量显著升高(p＜0.05)，说明老年性痴呆(AD)大鼠造模成功。与模型组相比较，各给药组均降低AD大鼠达到学会标准的训练次数，降低大脑皮层脂褐素含量。黄芪总皂苷注射液、黄芪多糖注射液均降低AD大鼠达到学会标准的训练次数，降低大脑皮层脂褐素含量，但是无显著性差异。红景天注射液显著降低AD大鼠达到学会标准的训练次数(p＜0.01)，显著降低大脑皮层脂褐素含量(p＜0.01)；菝葜注射液显著降低AD大鼠达到学会标准的训练次数(p＜0.05)，显著降低大脑皮层脂褐素含量(p＜0.05)；各剂量HHB1注射液和HHB2注射液均极显著降低AD大鼠达到学会标准的训练次数(p＜0.01)，极显著降低大脑皮层脂褐素含量(p＜0.01)。
表1-4本发明药物组合物对AD大鼠模型的影响(

n＝10) 与对照组相比较#p＜0.05；与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01； 与黄芪总皂苷注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与黄芪多糖注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01； 与红景天注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01；与菝葜注射液组相比较gp＜0.05，hp＜0.01。
实验结果表明，本发明药物组合物可显著降低AD大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数，显著降低大脑皮层脂褐素含量，并且效果与给药剂量相关，高剂量组的效果最好。各剂量HHB1注射液的效果均优于黄芪总皂苷注射液、红景天注射液和菝葜注射液单独使用的效果，各剂量HHB2注射液的效果均优于黄芪多糖注射液、红景天注射液和菝葜注射液单独使用的效果。提示，黄芪总皂苷或黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷具有协同提高AD大鼠的学习记忆能力的作用。
实验例5本发明药物组合物对血管性痴呆(VD)大鼠的作用 受试动物健康大鼠，体重180～200g，雌雄兼用。
供试品氯化钠注射液250ml∶2.25g，山东长富沽晶药业有限公司 黄芪总皂苷注射液自制，2ml，含黄芪总皂苷130mg(相当于原药材10g) 黄芪多糖注射液自制，2ml，含黄芪多糖128mg(相当于原药材10g) 红景天注射液自制，2ml，含红景天总酚性物质146mg(相当于原药材2g) 菝葜注射液自制，2ml，含菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) HHB1注射液自制，5ml∶337mg，含黄芪总皂苷130mg(相当于原药材10g)、红景天提取物146mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) HHB2注射液自制，5ml∶335mg，含黄芪多糖128mg(相当于原药材10g)、红景天提取物146mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) 实验方法VD模型大鼠以10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，伏卧固定于立体定向仪，行背侧颈正中切口，暴露第一颈椎横突翼小孔，用直径0.5mm的电凝针烧灼双侧翼小孔内的椎动脉，造成永久性闭塞，再仰卧固定，行腹侧颈正中切口，分离双侧颈总动脉，“4”号丝线穿线备用。24h后乙醚麻醉，用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉5min，共夹闭3次，每次间隔1h。局部伤口以庆大霉素处理，然后缝合，常规饲养观察。假手术组处理步骤同上，但不进行椎动脉烧灼和颈总动脉夹闭。术后5天，造模大鼠进行避暗实验，记录5min钟内错误次数，超过5次者，提示存在学习与记忆不良等智能障碍，纳入观察对象，对未出现学习与记忆不良的动物，则予以剔除。选取的造模成功的大鼠110只，随机分为11组，每组10只，分别为模型组和各给药组。假手术组和模型组腹腔注射氯化钠注射液1ml，各给药组大鼠按表1-5腹腔注射给药，每天1次，连续4周。进行大鼠Y-型迷宫实验，计数大鼠Y-型迷宫达到学会标准的训练次数。进行一次性被动回避实验将一盏40w白炽灯悬于踏板上方40cm处，将大鼠放在踏板上尾对门洞记录其进入暗箱前在踏板上停留时间，即步人潜伏期，实验在连续3天内完成。
表1-5本发明药物组合物对VD大鼠的影响(

n＝10) 与对照组相比较#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01； 与黄芪总皂苷注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与黄芪多糖注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01； 与红景天注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01；与菝葜注射液组相比较gp＜0.05，hp＜0.01。
实验结果及结论实验结果见表1-5。与假手术组相比较，模型组大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数极显著升高(p＜0.05)，一次性被动回避实验的步入潜伏期极显著缩短(p＜0.01)，说明血管性痴呆(VD)大鼠造模成功。与模型组相比较，各给药组均降低VD大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数，延长一次性被动回避实验的步入潜伏期。黄芪总皂苷注射液显著降低VD大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数(p＜0.05)，显著延长一次性被动回避实验的步入潜伏期(p＜0.05)；红景天注射液显著降低VD大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数(p＜0.01)，显著延长一次性被动回避实验的步入潜伏期(p＜0.01)；黄芪多糖注射液、菝葜注射液均降低VD大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数，延长一次性被动回避实验的步入潜伏期，但是无显著性差异；各剂量HHB1注射液和HHB2注射液均极显著降低VD大鼠Y-型迷宫实验达到学会标准的训练次数(p＜0.01)，极显著延长一次性被动回避实验的步入潜伏期(p＜0.01)。
实验结果表明，本发明药物组合物可显著降低VD大鼠达到学会标准的训练次数，显著延长一次性被动回避实验的步入潜伏期，并且效果与给药剂量相关，高剂量组的效果最好。且本发明药物组合物各剂量组的效果均优于黄芪总皂苷注射液、黄芪多糖注射液、红景天注射液和菝葜注射液单独使用的效果。提示，黄芪总皂苷或黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷具有协同提高VD大鼠的学习记忆能力的作用。
实验例6本发明药物组合物对小鼠常压耐缺氧的影响 受试动物健康小鼠，100只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为10组，每组10只。
供试品氯化钠注射液(对照组)250ml∶2.25g，山东长富沽晶药业有限公司 黄芪总皂苷注射液自制，2ml，含黄芪总皂苷130mg(相当于原药材10g) 黄芪多糖注射液自制，2ml，含黄芪多糖128mg(相当于原药材10g) 红景天提取物注射液自制，2ml，含红景天总酚性物质146mg(相当于原药材2g) 菝葜注射液自制，2ml，含菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) HHB1注射液自制，5ml∶337mg，含黄芪总皂苷130mg(相当于原药材10g)、红景天提取物146mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) HHB2注射液自制，5ml∶335mg，含黄芪多糖128mg(相当于原药材10g)、红景天提取物146mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) 实验方法小鼠随机分为10组，每组10只，分别为对照组和各给药组。各组小鼠按表1-6腹腔注射给药，每天1次，连续7天。末次给药1h后，分别置于经容量标定125ml的广口瓶中，瓶内置10g钠石灰以吸收CO2和水份，瓶盖涂以凡士林密封，记录小鼠的死亡时间。
实验结果及结论结果见表1-6。与对照组相比较，各给药组均可延长小鼠的存活时间。黄芪总皂苷注射液、黄芪多糖注射液、菝葜注射液显著延长小鼠的存活时间(p＜0.05)，红景天注射液极显著延长小鼠的存活时间(p＜0.01)，各剂量组HHB1注射液和HHB2注射液极显著延长小鼠的存活时间(p＜0.01，)。
实验结果表明，本发明药物组合物可显著延长小鼠的存活时间，并且效果与给药剂量相关，高剂量组的效果最好。且本发明药物组合物组的效果均优于黄芪总皂苷注射液、黄芪多糖注射液和红景天注射液单独使用的效果。提示，黄芪总皂苷或黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷具有协同保护脑缺氧损伤的作用。
表1-6本发明药物组合物对小鼠常压耐缺氧的作用(

n＝10) 与对照组相比较*p＜0.05，**p＜0.01； 与黄芪总皂苷注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与黄芪多糖注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01； 与红景天注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01；与菝葜注射液组相比较gp＜0.05，hp＜0.01。
实验例7HHB1注射液、HHB2注射液稳定性实验 供试品hHB1注射液自制，5ml∶337mg，含黄芪总皂苷130mg(相当于原药材10g)、红景天提取物146mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) HHB2注射液自制，5ml∶335mg，含黄芪多糖128mg(相当于原药材10g)、红景天提取物146mg(相当于原药材2g)、菝葜总皂苷61mg(相当于原药材3g) 考察项目性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量。
长期实验置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；12个月末增加无菌和热原检查。
实验结果温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月，各项指标均无明显变化；长期实验12个月末，热原、无菌检查均符合规定。
结论上述考察结果表明，HHB1注射液、HHB2注射液的各项指标均比较稳定，可以长期储存，适应于工业大生产。

，对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。
以下实施例中用HHB1代替以黄芪总皂苷、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分的药物组合物，用HHB2代替以黄芪多糖、红景天总酚性物质、菝葜总皂苷为主要有效成分的药物组合物。实施例中所用的黄芪总皂苷为实施例1制备所得，所用的黄芪多糖为实施例2制备所得，所用的红景天提取物为实施例3制备所得，所用的菝葜总皂苷为实施例4制备所得。
实施例1黄芪总皂苷的制备以及鉴别和含量测定 黄芪总皂苷的制备 取黄芪药材50kg，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。
分别制备三批黄芪总皂苷，提取物得率见表2-1。
黄芪总皂苷的鉴别 鉴别实验一取本品10mg，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。
鉴别实验二取本品10mg，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，置蒸气中熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
分别对上述三批黄芪总皂苷进行鉴别实验，结果均符合要求。
黄芪总皂苷的含量测定 总皂苷的含量测定 对照品溶液的制备精密称取于105℃干燥至恒重的黄芪甲苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芪甲苷干品0.1mg)。
供试品溶液的制备取本品100mg，精密称定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次10ml，弃去水液，正丁醇至水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，置25ml纳氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml、高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，在538nm波长处测定吸光度，计算，即得。
黄芪甲苷的含量测定 色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。
对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密称取本品40mg，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。
分别对上述三批黄芪总皂苷进行含量测定，结果见表2-1。
表2-1 黄芪总皂苷的含量测定结果和得率 实施例2黄芪多糖的制备以及鉴别和含量测定 黄芪多糖的制备 取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，合并提取液，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，滤过，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，滤过，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
分别制备三批黄芪多糖，得率见表2-2。
黄芪多糖的鉴别 (1)取本品约0.2mg，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
分别对上述三批黄芪多糖进行鉴别实验，结果均符合要求。
黄芪多糖的含量测定 标准溶液的制备称取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。
标准曲线的绘制精密量取标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml共6份，分别置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，铝片0.3g，碳酸氢钠0.15g，混合蒸馏，收集182℃馏分，配制成5％水溶液)1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5分钟，置水浴中加热15分钟，取出，迅速冷却至室温，另以2.0ml水同上平行操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸收值，计算回归方程。
测定法取本品0.5g置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法自“加水至2.0ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算多糖的含量。
分别对上述三批黄芪多糖进行含量测定，结果见表2-2。
表2-2黄芪多糖的含量测定结果和得率 实施例3红景天提取物的制备以及鉴别和含量测定 红景天提取物的制备 取红景天药材20kg，粉碎成粗粉，加70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至每2ml含1g生药材，用2倍量石油醚脱脂，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，加于事先处理好的大孔树脂，依次用水和不同浓度的乙醇洗脱，减压回收乙醇至相对密度为1.03～1.06(60℃)，喷雾干燥，即得。
分别制备三批红景天提取物，得率见表2-3。
红景天提取物的鉴别 取本品0.1g，加甲醇10ml，超声处理30min，摇匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红景天药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
对上述三批红景天提取物进行鉴别实验，结果均符合要求。
红景天提取物的含量测定 总酚的含量测定 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含没食子酸0.05mg的溶液，即得。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml棕色量瓶中，各加磷钼钨酸试液1ml，再分别加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，以相应的试剂为空白，紫外-可见分光光度法，在760nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备精密称取红景天提取物25mg，置25ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，摇匀，使样品完全溶解，精密吸取2ml置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
测定法精密量取供试品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得。
红景天苷的含量测定 色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15∶85)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取红景天苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密称取本品0.1g，研匀，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
对上述三批红景天提取物进行含量测定，结果见表2-3。
表2-3红景天提取物的含量测定结果和得率 实施例4菝葜总皂苷的制备以及鉴别和含量测定 菝葜总皂苷的制备 取菝葜药材30kg，切成薄片，加70％乙醇回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml含生药2g，放冷，加1/2体积的正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇提取液，减压回收溶剂，并真空干燥，取浸膏粉加适量水溶解，加于已处理好的树脂柱上，先用水3～4BV/小时冲洗至近无色，再用70％乙醇以2～3BV/小时冲柱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
分别制备三批菝葜总皂苷，得率见表2-4。
菝葜总皂苷的鉴别 取本品0.1g，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加盐酸5ml，加热回流2小时，放冷，用40％氢氧化钠溶液调至中性，蒸至无醇味，残渣加热水40ml使溶解，用二氯甲烷振摇提取2次(40ml、30ml)，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
对上述三批菝葜总皂苷进行鉴别实验，结果均符合要求。
菝葜总皂苷的含量测定 菝葜总皂苷苷的含量测定 标准品溶液的制备精密称取菝葜皂苷元标准品10mg，置10ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
标准品曲线的绘制 精密吸取上述标准品溶液10、20、40、60、80、100μl置于25ml纳氏比色管中，挥去溶剂，加新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，分光光度法，在605±2nm处分别测定吸光度，以吸光度为纵坐标，菝葜皂苷元标准品的取样量为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。
测定法精密称取本品20mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液50μl，置25ml纳氏比色管中，置水浴蒸干，放冷，照标准曲线绘制项下的方法自“加新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算总皂苷的含量。
对上述三批菝葜总皂苷进行含量测定，结果见表2-4。
表2-4菝葜提取物的含量测定结果和得率 实施例5HHB注射液的制备 处方 HHB1注射液处方1 黄芪总皂苷 130g(相当于原药材10kg) 红景天提取物146g(相当于原药材2kg) 菝葜总皂苷 61g(相当于原药材3kg) 聚山梨酯-80 60g 注射用水加至5000ml 共制备 1000支 HHB1注射液处方2 黄芪总皂苷 325g(相当于原药材25kg) 红景天提取物73g(相当于原药材1kg) 菝葜总皂苷 30g(相当于原药材1.5kg) 聚山梨酯-80 60g 注射用水加至5000ml 共制备 1000支 HHB2注射液处方1 黄芪多糖320g(相当于原药材25kg) 红景天提取物73g(相当于原药材1kg) 菝葜总皂苷 30g(相当于原药材1.5kg) 聚山梨酯-80 30g 注射用水加至5000ml 共制备 1000支 HHB2注射液处方2 黄芪多糖128g(相当于原药材10kg) 红景天提取物146g(相当于原药材2kg) 菝葜总皂苷 61g(相当于原药材3kg) 聚山梨酯-80 30g 注射用水加至5000ml 共制备 1000支 具体步骤 提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；取配液量80％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入处方量的黄芪总皂苷(或者黄芪多糖)、红景天提取物和菝葜总皂苷，加热搅拌溶解完全；补加注射用水至全量；加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；经0.45μm的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；将溶液灌装、熔封于玻璃安瓿中；100℃流通蒸汽灭菌30分钟；趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏；灯检，成品全检，包装入库。
实施例6注射用HHB的制备 处方 注射用HHB1处方1 黄芪总皂苷 130g(相当于原药材10kg) 红景天提取物146g(相当于原药材2kg) 菝葜总皂苷 61g(相当于原药材3kg) 聚山梨酯-80 60g 甘露醇 200g 无菌注射用水加至3000ml 共制备 1000支 注射用HHB1处方2 黄芪总皂苷 260g(相当于原药材20kg) 红景天提取物146g(相当于原药材2kg) 菝葜总皂苷 61g(相当于原药材3kg) 聚山梨酯-80 60g 甘露醇 200g 无菌注射用水加至3000ml 共制备 1000支 注射用HHB2处方1 黄芪多糖128g(相当于原药材10kg) 红景天提取物146g(相当于原药材2kg) 菝葜总皂苷 61g(相当于原药材3kg) 聚山梨酯-80 30g 甘露醇 200g 无菌注射用水加至3000ml 共制备 1000支 注射用HHB2处方2 黄芪多糖256g(相当于原药材20kg) 红景天提取物146g(相当于原药材2kg) 菝葜总皂苷 61g(相当于原药材3kg) 聚山梨酯-80 30g 甘露醇 200g 无菌注射用水加至3000ml 共制备 1000支 具体步骤 首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理；按照处方量称取原料和辅料；取配液量80％的无菌注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后将黄芪总皂苷(或者黄芪多糖)、红景天提取物和菝葜总皂苷加入加热搅拌溶解完全，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量；加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；)经0.22μm的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞；将样品放入冻干机中冷冻干燥；-40℃预冻4小时，低温真空干燥-40℃～0℃18小时，然后升温至20℃真空干燥4小时；冻干结束，压塞，轧盖；成品全检，包装入库。
实施例7HHB氯化钠注射液的制备 处方 HHB1氯化钠注射液处方1 黄芪总皂苷 260g(相当于原药材20kg) 红景天提取物292g(相当于原药材4kg) 菝葜总皂苷 122g(相当于原药材6kg) 聚山梨酯-80 80g 氯化钠 900g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 HHB1氯化钠注射液处方2 黄芪总皂苷 130g(相当于原药材10kg) 红景天提取物292g(相当于原药材4kg) 菝葜总皂苷 244g(相当于原药材12kg) 聚山梨酯-80 80g 氯化钠 900g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 HHB2氯化钠注射液处方1 黄芪多糖255g(相当于原药材20kg) 红景天提取物292g(相当于原药材4kg) 菝葜总皂苷 122g(相当于原药材6kg) 聚山梨酯-80 40g 氯化钠 900g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 HHB2氯化钠注射液处方2 黄芪多糖127g(相当于原药材10kg) 红景天提取物292g(相当于原药材4kg) 菝葜总皂苷 244g(相当于原药材12kg) 聚山梨酯-80 40g 氯化钠 900g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 具体步骤 前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后将黄芪总皂苷(或者黄芪多糖)、红景天提取物和菝葜总皂苷加入加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全；合并上述溶液，补加注射用水至全量；加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；经0.45μm的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；灌装于100ml的输液瓶中；115℃热压灭菌30分钟；灯检，成品全检，包装入库。
实施例8HHB葡萄糖注射液的制备 处方 HHB1葡萄糖注射液处方1 黄芪总皂苷 260g(相当于原药材20kg) 红景天提取物292g(相当于原药材4kg) 菝葜总皂苷 122g(相当于原药材6kg) 聚山梨酯-80 80g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 HHB1葡萄糖注射液处方2 黄芪总皂苷 65g(相当于原药材5kg) 红景天提取物365g(相当于原药材5kg) 菝葜总皂苷 153g(相当于原药材7.5kg) 聚山梨酯-80 80g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 HHB2葡萄糖注射液处方1 黄芪多糖64g(相当于原药材5kg) 红景天提取物365g(相当于原药材5kg) 菝葜总皂苷 153g(相当于原药材7.5kg) 聚山梨酯-80 40g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 HHB2葡萄糖注射液处方2 黄芪多糖255g(相当于原药材20kg) 红景天提取物292g(相当于原药材4kg) 菝葜总皂苷 122g(相当于原药材6kg) 聚山梨酯-80 40g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 具体步骤 提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后将黄芪总皂苷(或者黄芪多糖)、红景天提取物和菝葜总皂苷加入加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；合并上述溶液，补加注射用水至全量；加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；经0.45μm的微孔滤膜精滤；检查溶液的澄明度，半成品化验；灌装于100ml的输液瓶中；115℃热压灭菌30分钟；灯检，成品