专利名称：一种确定转基因棉花漂移率及漂移距离的简单方法自1983年世界第一例转基因作物问世以来，全球转基因植物种植面积不断增长，2010年达到I. 48亿公顷，种植转基因作物的国家达到了 29个，主要转基因作物为大豆、玉米、棉花、油菜等，涉及到的外源基因主要是耐除草剂基因、抗虫基因等。随着转基因植物的广泛种植，其潜在的生态安全、食品安全问题日益引起人们的关注，人们普遍担心转基因作 物的广泛应用是否会破坏自然界的生态平衡，转基因食品长期使用会不会对人体健康产生不良影响。各国纷纷制定相应的法律法规对转基因产品进行监管。我国于2001年、2002年颁布实施《农业转基因生物安全管理条例》及《农业转基因生物标识管理办法》，启动了农业转基因生物的监瞀监管机制，明确要求5大类作物17小类加工品必须进行标识。转基因作物生态潜在的风险主要有三个ー是转基因植物本身带来的潜在风险，如转抗除草剂基因作物本身可演化为杂草，如加拿大转基因油菜在棉田中已经变成了杂草，而且很难治理；ニ是转基因植物通过基因漂移对其他物种带来的影响。主要表现为，耐除草剂基因发生漂移，有可能产生近缘或远缘杂交，导致基因漂移到杂草中，使杂草产生对除草剂的抗性，导致超级杂草的产生；三是靶标生物长期处于选择压カ下，可能会产生抗性，导致转基因作物抗性消失，从而使靶标生物的发生更为猖獗而且难于防治。鉴于此类风险的存在，转基因作物进行释放首先要进行环境安全性评价，主要包括对生物多祥性影响，生存竞争能力和基因流散风险。本专利涉及到基因漂移风险。目前国家颁布了一系列转基因植物环境安全性评价标准，如转基因玉米、棉花、油菜等。转基因棉花目前仅颁布了抗虫棉花检测标准，主要技术手段是利用生物学方法检测后代抗虫性，或利用转基因棉花中标记基因进行生物学检测，或进行分子生物学检测。但该方法存在以下不足。一、需要饲养大量试虫、需要采集大量棉花叶片，工作強度非常大，而且经常出现试虫不正常死亡现象，影响检测结果的判断；ニ、利用筛选标记基因进行生物学检测，首先需要摸索筛选适宜的溶液浓度，过高会造成所有棉株叶片萎蔫，过低则所有植株均表现抗性，即使确定了适宜的浓度，由于该方法是靠人为判断萎蔫程度并进行分级，也存在很大的误差。三、分子生物学方法是单粒提取种子DNA，进行PCR扩增，根据电泳结果是否含有目的基因判断是否发生了基因漂移。由于涉及到单粒提取及扩增，该法工作量大，成本高，需要检测时间长，而且PCR方法由于非常灵敏，反复做同一扩增经常会出现污染，造成假阳性出现。因此，寻找一种简单、直观、省力的基因漂移检测方法十分必要。经对现有专利和其他文献的检索，尚未发现关于ー种简单的确定转基因棉花漂移率的方法。
针对上述现有技术的不足和实际检测的需要，本发明提供了ー种的方便快捷、结果准确稳定的转基因棉花基因漂移检测方法。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案 选择不同花色的转基因棉花与对照棉花；将转基因棉花种植在一圓形的区域内，在圆形区域外种植对照棉花；棉花收获时，在不同的方向、不同的距离取棉花并单独扎花取种，于下次将获得的种子分别在不同小区种植，待棉花开花时，观察开花颜色，统计开待测棉花花色的棉株株数量和棉株总数量，获得漂移不同方向漂移距离及漂移频率。所述转基因棉花为红色花，对照组棉花为浅黄色花。种植区域为IOOmX IOOm的棉田，所述圆形区域位于该棉田内，且其直径为5m。在棉花收获时，在不同方向、距离待检测棉花的距离按同心圆的方式选择棉花进行采摘取棉种。所述不同方向为东、南、西、北4个方向，所述距离为距离待检测棉花分别为lm、5m、10m、20m、30m、40m、50m处的距离。米摘取棉种时每处选择相同数量株棉花，每株棉花按上中下分别采摘相同数量的棉桃，并按方向、距离、棉桃上中下垂直位置做好标记；采后的样品悬挂晾干，并进行单独轧花取棉种。把每ー采样点不同部位采到的棉花种子于第二年温度适宜时种植在不同小区，种植棉株按常规方法管理。可根据不同区域内种子的开花颜色，得到转基因棉花的漂移距离，并通过ー下公式计算转基因棉花漂移率，即漂移频率=开红花的棉株数/总棉株数。待检测转基因棉花，开花为鲜艳的红色；对照棉花，开花为浅黄色。红色花棉花为近年来开发的新品种，红色花基因为显性基因，黄色花为隐性基因，利用棉花自然花色的不同，检测转基因棉花漂移距离及漂移频率。 本发明的检测转基因棉花基因漂移距离及漂移频率的检测方法，具有很好的可操作性，操作简单、经济实用，结果判断直观，不会出现假阳性。本发明为转基因安全性评价提供了一种可靠的方法，为转基因棉花环境释放的控制提供了必要的技术手段，可以满足我国对转基因棉花进行检测监控的需求，提高我国转基因生物的监管水平。图I转基因棉花基因漂移试验取样不意图。

如图I所不，一块面积为IOOmXlOOm的棉田，待检测转基因棉花种植于中央直径为5m的圆内，圆的四周种植对照棉花。在棉花收获时，分别在东、南、西、北4个方向距离待检测棉花距离分别为lm、5m、10m、20m、30m、40m、50m处按同心圆的方式选择10株棉花,姆株棉花按上中下分别采摘3个棉桃，并做好标记。采后的样品悬挂晾干，并进行单独轧花取棉种；第二年温度适宜时，播种每一点不同部位采到的棉花种子为ー个小区，并做好标记，可以进行密集播种，按常规方法管理棉田，待棉花开花时，统计每小区开红色花的棉株数、总棉株数，得到转基因棉花的漂移距离，计算漂移频率。
漂移频率=开红花的棉株数/总棉株数。实施例2:
如图I所不，一块面积为IOOmXlOOm的棉田，待检测转基因棉花种植于中央直径为5m的圆内，圆的四周种植对照棉花。在棉花收获时，分别在东、南、西、北4个方向距离待检测棉花距离分别为lm、5m、10m、20m、30m、40m、 50m处按同心圆的方式选择10株棉花,姆株棉花按上中下分别采摘5个棉桃，并做好标记。采后的样品悬挂晾干，并进行单独轧花取棉种；第二年温度适宜时，播种每一点不同部位采到的棉花种子为ー个小区，并做好标记，可以进行密集播种，按常规方法管理棉田，待棉花开花时，统计每小区开红色花的棉株数、总棉株数，得到转基因棉花的漂移距离，计算漂移频率。漂移频率=开红花的棉株数/总棉株数。实施例3:
如图I所不，一块面积为IOOmXlOOm的棉田，待检测转基因棉花种植于中央直径为5m的圆内，圆的四周种植对照棉花。在棉花收获时，分别在东、南、西、北4个方向距离待检测棉花距离分别为lm、5m、10m、20m、30m、40m、50m处按同心圆的方式选择10株棉花,姆株棉花按上中下分别采摘10个棉桃，并做好标记。采后的样品悬挂晾干，并进行单独轧花取棉种；第二年温度适宜时，播种每一点不同部位采到的棉花种子为ー个小区，并做好标记，可以进行密集播种，按常规方法管理棉田，待棉花开花时，统计每小区开红色花的棉株数、总棉株数，得到转基因棉花的漂移距离，计算漂移频率。漂移频率=开红花的棉株数/总棉株数。实施例4
如图I所不，一块面积为IOOmXlOOm的棉田，待检测转基因棉花种植于中央直径为5m的圆内，圆的四周种植对照棉花。在棉花收获时，分别在东、南、西、北4个方向距离待检测棉花距离分别为lm、5m、10m、20m、30m、40m、50m处按同心圆的方式选择15株棉花,姆株棉花按上中下分别采摘3个棉桃，并做好标记。采后的样品悬挂晾干，并进行单独轧花取棉种；第二年温度适宜时，播种每一点不同部位采到的棉花种子为ー个小区，并做好标记，可以进行密集播种，按常规方法管理棉田，待棉花开花时，统计每小区开红色花的棉株数、总棉株数，得到转基因棉花的漂移距离，计算漂移频率。漂移频率=开红花的棉株数/总棉株数。实施例5
如图I所不，一块面积为IOOmXlOOm的棉田，待检测转基因棉花种植于中央直径为5m的圆内，圆的四周种植对照棉花。在棉花收获时，分别在东、南、西、北4个方向距离待检测棉花距离分别为lm、5m、10m、20m、30m、40m、50m处按同心圆的方式选择20株棉花,姆株棉花按上中下分别采摘3个棉桃，并做好标记。采后的样品悬挂晾干，并进行单独轧花取棉种；第二年温度适宜时，播种每一点不同部位采到的棉花种子为ー个小区，并做好标记，可以进行密集播种，按常规方法管理棉田，待棉花开花时，统计每小区开红色花的棉株数、总棉株数，得到转基因棉花的漂移距离，计算漂移频率。漂移频率=开红花的棉株数/总棉株数。实施例6
如图I所不，一块面积为IOOmXlOOm的棉田，待检测转基因棉花种植于中央直径为5m的圆内，圆的四周种植对照棉花。在棉花收获时，分别在东、南、西、北4个方向距离待检测棉花距离分别为lm、5m、10m、20m、30m、40m、50m处按同心圆的方式选择25株棉花,姆株棉花按上中下分别采摘3个棉桃，并做好标记。采后的样品悬挂晾干，并进行单独轧花取棉种；第二年温度适宜时，播种每一点不同部位采到的棉花种子为ー个小区，并做好标记，可以进行密集播种，按常规方法管理棉田，待棉花开花时，统计每小区开红色花的棉株数、总棉株数，得到转基因棉花的漂移距离，计算漂移频率。 漂移频率=开红花的棉株数/总棉株数。


本发明涉及一种确定转基因棉花漂移率及漂移距离的简单方法，选择不同花色的转基因棉花与对照棉花，将转基因棉花种植在一圆形的区域内，在圆形区域外种植对照棉花；棉花收获时，在不同的方向、不同的距离取棉花并单独扎花取种，于下次将获得的种子分别在不同小区种植，待棉花开花时，观察开花颜色，统计开待测棉花花色的棉株株数量和棉株总数量，获得漂移不同方向漂移距离及漂移频率。本发明的检测转基因棉花基因漂移距离及漂移频率的检测方法，具有很好的简单可靠、经济实用，结果判断直观，不会出现假阳性。为转基因棉花环境释放的控制提供了必要的技术手段，可以满足我国对转基因棉花进行检测监控的需求，提高我国转基因生物的监管水平。