专利名称：一种卵磷脂磁性纳米复合物及其制备方法和应用的制作方法目前药材中的季铵碱的提取方法常见的仍是溶剂提取法，这种方法存在着生产过 程比较繁琐、试剂需要量大、产品回收率低、且非常耗时等不足之处。另外，这些提取法大都 需要消耗大量有机溶剂，这势必造成溶剂的残留，为药材中的季铵碱的后续使用造成不便。 目前磁性粒子的研究工作已取得了一定的成果，200910(^9444. 7公开了一种处理有机废 水的磁性纳米材料的制备方法，是采用磁性纳米材料作为基体，利用表面活性剂对其进行 改性，可以大量吸附难降解有机污染物，吸附后在外加磁场的作用下有机污染物随着磁性 纳米材料迅速从水中分离，达到对污染物的高效去除和废水净化的目的。200910067365.5 涉及一种疏水性药物肿瘤靶向传递的磁性纳米载体及其制备方法。该纳米载体首先是通过 改进的溶液聚合法合成多分散性好的MePEG-PLGA，然后以其为原料利用溶剂蒸发法包裹 Fe3O4纳米粒子制得磁性纳米药物载体。该载体有望解决难溶药物的溶解性问题，实现药物 缓慢释放，可通过肿瘤组织的EI5R效应实现药物被动靶向，Fe3O4纳米粒子用于药物主动靶 向，降低药物用量和毒副作用，提高治疗效率，同时可用于肿瘤组织的磁共振成像(MRI)。 200910032932. 3提出一类R-CH2-PO3-M修饰的磁性纳米粒子作为磷酸化蛋白富集材料，提 出了其制备方法及其在磷酸化蛋白富集中的应用。通过对有机膦酸R基团修饰羧基基团， 实现将磁性纳米粒子与膦酸基团的功能相结合的目的。有机膦酸功能化的磁性纳米材料的 合成方法简单、快速、绿色。该类材料对于磷酸化蛋白有着良好的富集作用，MALDI-T0F/MS 可以检测到10- 的牛血清β-酪蛋白消化液中磷酸化肽段。但是在现有技术中还没有卵 磷脂磁性纳米复合物的制备方法及应用的报导。
本发明的目的在于提供一种卵磷脂磁性纳米复合物及其制备方法和应用。以实现 可高效、简单、快速、无毒地分离提取季铵碱，尤其适用于黄连季铵碱的提取。本发明的提取季铵碱的磁性纳米复合物是卵磷脂修饰的磁性纳米复合物，表示为 PC-Fe3O4 NPs。卵磷脂修饰的磁性纳米复合物的制备方法，包括以下步骤(1)将6 15g/L的卵磷脂-水混合体系通氮气除氧半小时；(2)将摩尔比2:1 2:1. 5的三价铁盐与二价铁盐溶于上述含卵磷脂的水中，在600 1400 rpm剧烈搅拌使之充分溶解，再加入25%的氨水，升温到50 120°C，在氮气保护 下反应1 h ；(3)静置半小时，用磁性分离，再分别用水和无水乙醇洗涤至中性；(4)在30 60°C真空干燥为成品。卵磷脂磁性纳米复合物用于分离提取季铵碱，包括以下步骤(1)预处理称取2.0克含季铵碱的药材粉末，加入100 250 mL HCl溶液，100 °〇水 浴加热提取0.5 2 h，过滤取出滤液，往滤渣中再加入100 250 mL的HC1，加热提取1 h，过滤后合并滤液备用；(2)用0.03 g的卵磷脂磁性纳米复合物，加入到上述含季铵碱的滤液中，超声孵化3 10 min，静置1 min，磁分离，得到上层萃取后料液和磁性粒子；
(3)将磁性粒子用二次蒸馏水洗涤2次，再用含0 m乙醇的0.1 mol/L的HCl溶液 洗脱反萃该磁性粒子，磁分离，得到反萃液和磁性粒子；
(4)分别对原料液、萃取后料液及反萃液取样，用高效液相色谱检测其中生物碱的浓 度，收集得到的反萃相，水浴加热烘干，得到生物碱粗提物。本发明的优点(1)由于磁性粒子粒径小，比表面积大，很容易与目标物质结合； 经实验证明，用卵磷脂磁性纳米复合物提取药材中的季铵碱，其提取率可比现有技术大大 提高，可以有效去除共存干扰物，使药材中的季铵碱得到明显纯化；(2)由于其具有特有 的磁响应性，能通过外加磁场定向分离，不需要离心操作，有利于分离过程的简化和自 动化，并因具有磁性，可在外加磁场的作用下方便迅速地分离的特点；(3)整个提取过程不 需使用有机溶剂，有效避免了有机溶剂残留对药材中生物碱后续利用的影响；是一种绿色 环境友好的生物碱提取材料(4)，整个制备过程和提取过程操作简单，耗时短，可提高效率、 节省人力和能源。


图1为实施例1的磁性纳米复合物的透射电子显微镜图2为实施例1的磁性纳米复合物与纯的四氧化三铁粒子及卵磷脂的傅里叶变换红外 光谱图3为实施例1的磁性纳米复合物与纯的四氧化三铁粒子对比的X射线衍射图； 图4为实施例1的磁性纳米复合物的磁滞回线图； 图5为实施例1提取黄连药材中的季铵碱的原料液高效液相色谱图； 图6为实施例1提取黄连药材中的季铵碱的粗提产物的高效液相色谱图。

卵磷脂磁性纳米复合物(PC-Fe3O4 NPs)的制备
(1)将1.2g卵磷脂溶于100 mL去离子水中，通氮气除氧半小时；
(2)将5.8 g硝酸铁和2. 3 g硫酸亚铁溶于上述含卵磷脂的水中；在1300 rpm剧烈搅 拌下使之充分溶解，再加入10 mL氨水，升温到80 °C，在氮气保护下反应1 h;
(3)静置30min，用磁性分离，再分别用水和无水乙醇洗涤至中性，
(4)在40°C真空干燥为成品。采用透射电子显微镜、傅里叶变换红外光谱仪、X射线衍射分析仪和振动样品磁强 计对制备的卵磷脂磁性纳米复合物进行表征，参见附图。表征结果表明该磁性纳米复合物 呈规则球形，粒径分布狭窄，平均粒径为10.5 nm，具有良好的超顺磁性和稳定性。卵磷脂磁性纳米复合物(PC-Fe3O4 NPs)在提取分离黄连季铵碱的应用(1)预处理称取2. 0克黄连根粉末，加入250 mL 0. 1 mol/L的HCl溶液，100 °C水浴 加热提取1 h，过滤取出滤液，往滤渣中再加入250 mL的0. 1 mol/L的HC1，加热提取1 h，
过滤后合并滤液备用。(2)用0.03 g的卵磷脂磁性纳米复合物，加入10 mL盐酸提取液中，超声孵化6 min，静置1 min，磁分离，得到上层料液和磁性粒子；
(3)将磁性粒子用二次蒸馏水洗涤2次，再用含1乙醇的0.1 mol/L的HCl溶液洗脱 反萃该磁性粒子，磁分离，得到反萃液和磁性粒子；
(4)分别对原料液、萃取后料液及反萃液取样，用高效液相色谱检测其中生物碱的浓度。高效液相色谱的条件如下
色谱柱Spherigel C18，SZ: 250X4.6 mm, 5 μ m ；流动相A (50 mmol/LKH2PO4 + 14 mmol/L 三乙胺 + 3. 6 mmol/L C12H25NaO3S) :B (乙腈)=65:35 (V/V)；流速1. 0 mL/min ； 检测波长346 nm;进样量10 μ L ；柱温30 °C
采用优化的固相分散分离法提取黄连根中的季铵碱药根碱、巴马亭和小檗碱，收集得 到的反萃相，水浴加热烘干，得到生物碱粗提物。准确称取该生物碱粗提物，溶于CH3OH中并准确定容，以高效液相色谱分析其中生 物碱的含量，平行分析两次。最终分析结果显示相比黄连药材(盐酸提取液色谱图如附图5 Ca 中这几种 生物碱的含量(90. 01 mg/g)，生物碱粗提物(色谱图如附图5 (b))中三种季铵碱的含量 (225. 75 mg/g)有显著提高，说明经过一步卵磷脂磁性纳米复合物提取后，可以有效地去除 共存干扰物，使黄连中的生物碱得到明显纯化，且因为整个提取过程不需使用有机溶剂，有 效避免了有机溶剂残留对生物碱后续利用的影响，因此，卵磷脂磁性纳米复合物是一种绿 色环境友好的生物碱提取材料。实施例2:
卵磷脂磁性纳米复合物(PC-Fe3O4 NPs)的制备
(1)将0.6g卵磷脂溶于100 mL去离子水中，通氮气除氧半小时；
(2)将5.8 g硝酸铁和2. 3 g硫酸亚铁溶于上述含卵磷脂的水中；在1000 rpm剧烈搅 拌下使之充分溶解，再加入10 mL氨水，升温到80 °C，在氮气保护下反应1 h;
(3)静置30min，用磁性分离，再分别用水和无水乙醇洗涤至中性，
(4)在40°C真空干燥为成品。卵磷脂磁性纳米复合物(PC-Fe3O4 NPs)在提取分离黄连季铵碱的应用
(1)预处理称取2.0克黄连根粉末，加入250 mL 0. 1 mol/L的HCl溶液，100 °C水浴 加热提取1 h，过滤取出滤液，往滤渣中再加入250 mL的0. 1 mol/L的HC1，加热提取1 h， 过滤后合并滤液备用；
(2)用0.03 g的卵磷脂磁性纳米复合物，加入10 mL盐酸提取液中，超声孵化2 min, 静置1 min，磁分离，得到上层料液和磁性粒子；
(3)将磁性粒子用二次蒸馏水洗涤2次，再用0.05 mol/L的HCl溶液洗脱反萃该磁性 粒子，磁分离，得到反萃液和磁性粒子；
(4)分别对原料液、萃取后料液及反萃液取样，用高效液相色谱检测其中生物碱的浓度。实施例3:
卵磷脂磁性纳米复合物(PC-Fe3O4 NPs)的制备
(1)将1.0g卵磷脂溶于100 mL去离子水中，通氮气除氧半小时；
(2)将5.8 g硝酸铁和2. 3 g硫酸亚铁溶于上述含卵磷脂的水中，在1200 rpm剧烈搅 拌下使之充分溶解，再加入10 mL氨水，升温到80 °C，在氮气保护下反应1 h;
(3)静置30min，用磁性分离，再分别用水和无水乙醇洗涤至中性，
(4)在40°C真空干燥为成品。卵磷脂磁性纳米复合物(PC-Fe3O4 NPs)在提取分离黄连季铵碱的应用
(1)预处理称取2. 0克黄连根粉末，加入250 mL 0. 1 mol/L的HCl溶液，100 °C水浴 加热提取1 h，过滤取出滤液，往滤渣中再加入250 mL的0. 1 mol/L的HC1，加热提取1 h， 过滤后合并滤液备用。(2)用0.03 g的卵磷脂磁性纳米复合物，加入10 mL盐酸提取液中，超声孵化4 min，静置1 min，磁分离，得到上层料液和磁性粒子；
(3)将磁性粒子用二次蒸馏水洗涤2次，再用0.1 mol/L的HCl溶液洗脱反萃该磁性粒 子，磁分离，得到反萃液和磁性粒子；
(4)分别对原料液、萃取后料液及反萃液取样，用高效液相色谱检测其中生物碱的浓度。


一种卵磷脂磁性纳米复合物及其制备方法和应用。卵磷脂磁性纳米复合物是卵磷脂修饰的磁性四氧化三铁纳米复合物，表示为PC-Fe3O4NPs。其制备方法是将摩尔比21.2的三价铁盐与二价铁盐溶于含卵磷脂的水中，以600～1400rpm的转速搅拌使之充分溶解，再加入25%的氨水，升温到50～120℃，在氮气保护下反应1h；静置后进行磁分离，经洗涤至中性，再真空干燥为成品。本发明提取药材中的季铵碱，其提取率大大提高，可以有效去除共存干扰物，使药材中的季铵碱得到明显纯化；整个提取过程不需使用有机溶剂，有效避免了有机溶剂残留对药材中生物碱后续利用的影响；操作简单，耗时短，可提高效率、节省人力和能源。