专利名称：低温下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.及分离培养方法低温对生物处理能力产生重大影响的原因是由于温度的降低影响了微生物的生长及代谢并使污水处理系统中微生物群系发生了改变。在温度下降过程中，中温菌的代谢活性逐渐下降，到一定温度时便失去活性，而适于低温环境的低温微生物的数量由于自身的生理特性及各种生态因子的抑制作用，在数量上无法达到优势菌群的地位，从而导致污水处理厂冬季出水水质下降。因此亟需一种能在低温好氧条件下去除污水中氨氮的菌株。
本发明的目的是克服现有菌低温脱氨氮效果不佳，提供一种在低温下能去除污水 pIllMMWlii Rhodanobacter sp·。本发明的第二个目的是提供一种低温下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.的分离培养方法。本发明的第三个目的是提供一种低温下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.的用途。一种低温下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.亚白2CGMCC No. 5沘3，其具有在低温好氧条件下去除污水中氨氮的能力。一种低温下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.亚白2CGMCC No. 5283在低温好氧条件下去除污水中氨氮的用途。低温优选为8_12°C。低温下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.的分离培养方法，包括如下步骤(1)将第一种亚硝酸细菌培养液放入小试SBR反应器中，将污水处理厂污泥接种所述第一种亚硝酸细菌培养液中，在8 12°C，连续培养4-6天，取出上清液，加入第二种亚硝酸细菌培养液，在8 12°C，连续培养4-6天，取出上清液，加入第三种亚硝酸细菌培养液，在8 12°C，连续培养4-6天，富集、驯化低温细菌；(2)取IOmL步骤(1)获得的污泥，加入已装有90mL灭菌蒸馏水和20 30粒灭菌玻璃珠的250mL锥形瓶中，振荡10 30min，使细菌细胞充分释放到上清液中；静置20 40min，取ImL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10_2的菌悬液，按上述方法依次做系列稀释，一直做到10_8为止；(3)选取梯度为10_5 10_8的菌悬液，分别取ImL接种于亚硝酸细菌固体培养基， 每个稀释度做3个平行样，编号；10°C在有氧的条件下保湿培养2 3周；(4)从步骤(3)中的亚硝酸细菌固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在亚硝酸细菌固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为亚白2，经鉴定为低温条件下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.。所述第一种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成NH4Cl 0.0764g、乙酸钠2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸馏水至 lOOOmL。所述第二种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成NH4Cl 0. 191g、乙酸钠2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸馏水至 1000mL。所述第三种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成NH4Cl 0.382g、乙酸钠2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸馏水至 1000mL。所述亚硝酸细菌固体培养基由下述组分组成NH4Cl 0.0764g、乙酸钠2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. 01g、FeS04 0. Olg、琼脂 20g，加蒸溜水至 1000mL。实验结果表明尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp亚白2CGMCC No. 5沘3，在低温下，特别是在8_12°C的条件下，对氨氮去除有明显的强化作用，氨氮去除率提高了 10%，出水氨氮浓度最高为4. ang/L，优于一级A的出水标准(水温彡12°C时，一级A标准的控制指标为8mg/L)。图1为低温好氧条件下去除污水中氨氮的一种去除污水中氨氮的菌 Rhodanobacter sp.的驯化分离培养流程图。图2为亚白2氨氮去除试验。图3为Iihodanobacter sp.细菌鉴定方法流程。
(3)选取梯度为10_5 10_8的菌悬液，分别取ImL接种于亚硝酸细菌固体培养基， 每个稀释度做3个平行样，编号；10°C在有氧的条件下保湿培养3周；(4)从步骤(3)中的亚硝酸细菌固体培养基平板中挑选菌落大，滴入格里斯试剂变红的形态不同的单菌落，在亚硝酸细菌固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为亚白2，经鉴定为低温条件下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.。实施例2第一种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成=NH4Cl 0. 0764g、乙酸钠2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸馏水至 1000mL。实施例3第二种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成=NH4Cl 0. 191g、乙酸钠2g、MgS047H20 0. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 O.Olg，加蒸溜水至 IOOOmL0实施例4第三种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成=NH4Cl 0. 382g、乙酸钠2g、MgS047H20 0. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O O.Olg、FeSO4 O.Olg，加蒸溜水至 IOOOmL0实施例5亚硝酸细菌固体培养基由下述组分组成=NH4Cl 0. 0764g、乙酸钠2g、MgS047H20 0. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg、琼脂 20g，加蒸馏水至 1000mL。实施例6格里斯试剂的配制1、对氨基苯磺酸试剂(A液)0. 5克对氨基苯磺酸溶于150毫升20%的稀醋酸溶液中，储于棕色瓶，冷藏备用。2、α-萘胺试剂(B液)0. 5克α -萘胺加到20毫升蒸馏水和150毫升20%的稀醋酸溶液中，储于棕色瓶，冷藏备用。3、格里斯试剂的使用液取等比例的A液与B液混合即可使用。实施例7本发明的菌Rhodanobacter sp.具有以下微生物学特性1.形态学特性在显微镜下观察，为杆状，长5. 2 μ m，宽0. 69 μ m ；在亚硝酸细菌固体培养基上形成淡黄色菌落。2.培养学特性在10°C下，在亚硝酸细菌固体培养基中培养时，本发明的Iihodanobacter sp.菌株具有以下特性。表面光滑湿润，表面凸起，边缘整齐规则，个体呈圆形，菌体呈淡黄色。3.生理特性好氧条件下去除污水中氨氮的革兰氏阳性细菌，接触酶阳性、甲基红试验阴性、水解淀粉、液化明胶、不产生吲哚、生长PH值为6 8，生长温度5 30°C。


本发明公开了低温下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.及分离培养方法，低温下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.亚白2CGMCC No.5283，其具有在低温好氧条件下去除污水中氨氮的能力。实验结果表明尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp亚白2CGMCC No.5283，在低温下，特别是在8-12℃的条件下，对氨氮去除有明显的强化作用，氨氮去除率提高了10％，出水氨氮浓度最高为4.2mg/L，优于一级A的出水标准(水温≤12℃时，一级A标准的控制指标为8mg/L)。