专利名称：一种固定化胆碱酯酶片的制备方法实施例1以尼龙膜作载体制备酶片(1)载体预处理将商品尼龙膜裁成直径为5-15mm的圆片，置于无水甲醇中浸泡30分钟活化，取出，用0.1mol/L pH8.0的磷酸盐缓冲溶液冲洗5分钟，晾干备用。(2)固定化用微量移液器准确移取20U乙酰胆碱酯酶于1mL塑料离心管中，离心管置于冰浴中，4℃下操作，加入130uL0.1mol/L pH7.0～8.5的磷酸盐缓冲溶液，在旋涡混匀器上混合10秒，放回冰浴。再加入10uL5％的戊二醛及40uL1％的牛血清白蛋白，在旋涡混匀器上混合20秒，放回冰浴。向上述酶溶液中放入5片预活化的载体。注意各载体间不要叠合，于3℃～5℃下保持2小时。(3)洗涤及保存取出固定好的载体片(酶片)，放入盛有1％甘氨酸的0.1mol/LpH8.0的磷酸盐缓冲溶液中冲洗数次。最后将酶片浸泡在pH7.0～8.5的0.1mol/L的磷酸盐缓中溶液中3℃～5℃保存。实施例2以硝酸纤维素膜作载体制备酶片(1)载体预处理将商品硝酸纤维素薄膜裁成直径为5-15mm的圆片，将载体片置于0.01mol/L pH7.0的磷酸盐缓冲溶液中，3℃下浸泡36小时以上。(2)固定化用微量移液器准确移取50U乙酰胆碱酯酶于2mL塑料离心管中，离心管置于冰浴中，4℃下操作，加入390uL0.1mol/L pH7.0～8.5的磷酸盐缓冲溶液，在旋涡混匀器上混合10秒，放回冰浴。再加入10uL5％的戊二醛及50uL1％的牛血清白蛋白，在旋涡混匀器上混合20秒，放回冰浴。向上述酶溶液中放入10片预活化的载体。注意各载体间不要叠合，于3℃下保持12小时。(3)洗涤及保存取出固定好的载体片(酶片)，放入含有1％甘氨酸的0.1mol/LpH8.0的磷酸盐缓冲溶液中冲洗数次。最后将酶片浸泡在pH7.0～8.5的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液中3℃～5℃保存。实施例3以醋酸纤维素膜作载体制备酶片(1)载体预处理将商品醋酸纤维素膜裁成直径为5-15mm的圆片，置于0.1mol/LNaIO4溶液中搅拌1小时，再放入0.06mol/L的乙二醇溶液中搅拌1小时。取出，用0.01mol/LpH7.0的磷酸盐缓冲溶液冲洗数次，于该溶液中3℃保存。(2)固定化用微量移液器准确移取10U乙酰胆碱酯酶于1mL塑料离心管中，离心管置于冰浴中，4℃下操作，加入50uL0.1mol/L pH7.0～8.5的磷酸盐缓冲溶液，在旋涡混匀器上混合10秒，放回冰浴。再加入10uL5％的戊二醛及50uL1％的牛血清白蛋白，在旋涡混匀器上混合20秒，放回冰浴。向上述酶溶液中放入2～3片预活化的载体。注意各载体间不要叠合，于室温下保持10小时。(3)洗涤及保存取出固定好的载体片(酶片)，放入盛有1％甘氨酸的0.1mol/LpH8.0的磷酸盐缓冲溶液中冲洗数次。最后将酶片浸泡在pH7.0～8.5的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液中3℃～5℃保存。实施例4室温条件固定酶片固定化温度采用室温15～25℃，其他条件同实施例2。实施例5Tris-HCl缓冲溶液4℃保存酶片酶片制备过程同实施例2，最后将酶片浸泡在pH7.0～7.5的0.1mol/L Tris-HCl缓冲溶液中3℃～5℃保存。本发明提供一种固定化胆碱酯酶片的制备方法，包括(1)、载体处理将载体制成直径5－15mm的圆片，置于磷酸盐缓冲溶液中活化，备用；(2)、固定化在冰浴4℃以下将乙酰胆碱酯酶、磷酸盐缓冲溶液、戊二醛溶液、牛血清白蛋白混合，加入预处理的载体，于3－5℃保温2－12小时；(3)、洗涤及保存取出固定好的酶片，用含有甘氨酸的磷酸盐缓冲溶液冲洗数次，最后将酶片浸泡在磷酸盐缓冲溶液或Tris－HCl缓冲溶液中3－5℃保存。本发明制备的酶片重现性好，活性高、寿命长；酶片保存方法只需浸泡在溶液中，操作简便，使酶片的商品化生产成为可能。