专利名称:一种啤酒中蛋白酶的定性检测方法实施例I:反应体系组成用IOOml去离子水溶解2g琼脂融化、混合均匀作为下层固化物;用IOOml去离子水溶解2g琼脂和2g脱脂奶粉融化、混合均匀作为上层固化底物;牛津杯10*7· 8*6. O (mm);培养皿Φ9αιι玻璃培养皿;步骤3-4需在无菌环境下操作。实验操作方法如下I将上层固化底物和下层固化物分别定量IOmL分装入试管,116°C灭菌15min。2将灭菌的上层固化底物和下层固化物分两次倒入事先放置好2个牛津杯的培养皿中(牛津杯分隔2cm距离摆放),先倒入下层琼脂固化物,待其凝固之后倒入上层固化底物。下层固化物的目的是增加孔洞容积。待两层固化底物凝固后,用灭菌的镊子将牛津杯夹出,避免破坏周围底物;如果孔洞中留有底物,用灭菌后的牙签将其挑出,保证孔洞中空白。 此时固化底物上会留有两个孔洞,以滴加样品使用。3将待测啤酒样品滴加入孔洞中。用封口膜封住培养皿,以防止水分蒸发、避免杂菌污染。4将滴加样品的培养基于37°C中放置48h之后取出,观察孔洞周围是否形成透明圈,若存在,则说明样品中含有蛋白酶;若没有,则说明样品中不含有蛋白酶。实施例2:
反应体系组成用IOOml去离子水溶解2g琼脂融化、混合均匀作为下层固化物;
用IOOml去离子水溶解I. 5g琼脂和Ig脱脂奶粉融化、混合均匀作为上
层固化底物;
牛津杯:10氺7. 8*6 (mm);
培养皿Φ9αιι玻璃培养皿;
实验操作方法如实施例I所述。
利用该方法检测蛋白酶的灵敏度高,样品前处理简单,不需要专门的仪器设备,操作简单,且所用样品量少,培养环境要求低,实验所需成本低。基于以上优点本方法适合在实验室、啤酒企业广泛推广应用。
本发明涉及一种啤酒中蛋白酶的定性检测方法,是根据蛋白酶催化蛋白质水解的原理,用含有蛋白质的脱脂奶粉(蛋白质含量50%~60%)作为底物。将待测样品定量地滴加在含有一定浓度蛋白质的固化底物上,在27~37℃温度条件下孵育,观察小孔周围是否能形成透明圈,如果有,说明样品中含有蛋白酶;如果没有,则说明样品中不含有蛋白酶。本发明提供的检测方法灵敏度高,样品前处理简单、用量少,可操作性强,实验环境要求低、成本低,适合各类实验室及不同规模啤酒企业的推广应用。
一种啤酒中蛋白酶的定性检测方法
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