专利名称：一种治疗癌症的药物及其制备方法本发明人研究了6种番荔枝植物抗癌化学成分及其抗肿瘤作用，发现番荔枝乙醇提取物抗肿瘤活性最好，其在体内对移植性肿瘤S180的抑瘤率可达64％-68％，在体内对肝癌H22的抑瘤率可达59％-63％(国家教育部科技成果登记号360-03-2c370029-01)，该项研究成果2003年获江苏省科技进步奖三等奖。在此基础上，本发明人进一步研究了番荔枝乙醇提取物的抗癌有效部位，从中提取出抗癌有效部位二氯甲烷提取物；并发明抗癌有效部位二氯甲烷提取物与灵芝孢子粉提取物配伍应用，能保持较高抗癌活性的同时降低毒性。
1.发明目的。本发明的目的在于寻找番茄枝植物抗癌活性的有效部位，将该有效部位的乙醇提取物与灵芝孢子粉的醇和水的提取物合并面制备的抗癌药物，该药物不仅具有高的抗癌活性，而且大大降低了药物的毒性。本发明的另一个目的是提供该抗癌药物的制备方法。2.技术方案本发明人进一步研究，发现其抗癌的活性部位主要是本发明的番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物。同时，本发明人进一步研究发现，将番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物和灵芝孢子粉的醇和水的提取物合并制备的药物，既保持了药物较高的抗癌活性，又降低了药物毒性。一种治疗癌症的药物，它是由番荔枝种子2-5份和灵芝孢子粉1-3份，按此重量份配比而制成的药剂。一种制备治疗癌症药物的方法，它包括下列步骤(1)取番荔枝种子2-5份，经烘干粉碎，用95％的乙醇冷浸三次，每次浸泡24-30小时后，经旋转蒸发器回收乙醇，浓缩，得浸膏；取其浸膏经二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到二氯甲烷提取物浸膏，备用；(2)取破壁灵芝孢子粉1-3份加8倍量75％-80％乙醇回流提取两次，每次1.5-2小时，回收乙醇，浓缩，得乙醇提取物浸膏，备用；药渣加12倍水，煎煮2次，每次2小时，水提液浓缩至浸膏，备用；(3)将步骤(1)得到的番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物浸膏和步骤(2)得到的破壁灵芝孢子粉的乙醇提取物浸膏及水提取物浸膏合并，混匀，干燥，得本发明药物；该药物即为本发明的番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物。
上述步骤(1)中用分析纯二氯甲烷萃取连续4次后，用旋转蒸发器回收二氯甲烷。
3.有益效果根据本发明人的研究，番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物和破壁灵芝孢子粉的乙醇提取物及水提取物混合后制成的抗癌药物，对HepS移植性肝癌有显著的抑制作用，3个剂量组的抑瘤率分别达65.89％、63.57％、60.47％，其抗癌活性显著比灵芝孢子粉为高。本发明药物不同剂量组的瘤重抑制率与5-Fu阳性化疗组的瘤重抑制率相当接近，说明本发明药物的抗肿瘤效价较高，在制备抗癌药物中具有广泛的应用前景。同时，在毒性试验中，本发明药物显著降低了番荔枝种子提取物的毒性。

实施例2抗癌药物一种治疗癌症的药物，它是由下列重量份配比的原料制成的药剂番茄枝种子4份，灵芝孢子粉2.5份实施例3一种治疗癌症药物的制备方法，其制备步骤为(1)取番荔枝种子10kg，经烘干粉碎，用8倍量的95％工业乙醇80L冷浸三次，每次浸泡24小时后，经旋转蒸发器回收乙醇，浓缩得浸膏约2004.2g，取其中1800g放入分液漏斗，加入分析纯的二氯甲烷1500ml，摇匀、静置、待分层后，倒去上层液，将下层部分经二氯甲烷萃取4次，再经旋转蒸发回收二氯甲烷，得到二氯甲烷提取物浸膏617.1g；(2)取破壁灵芝孢子粉5kg，加8倍量的80％乙醇回流提取两次，每次2小时，回收乙醇，得乙醇提取物浸膏214.5g，备用；药渣加12倍水，煎煮2次，每次2小时，水提液浓缩至浸膏451.5g，备用；(3)将番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物浸膏、破壁灵芝孢子粉的乙醇提取物浸膏和水提取物浸膏合并，混匀，干燥，得药；该药即为本发明的番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物。
实施例4药物的抗癌作用1.实验方法1.1移殖性肝癌模型的建立参考徐叔云第三版的药理实验方法学。选取肿瘤生长旺盛的肝癌HepS腹水小鼠，颈椎脱臼处死，置净化台中，消毒腹部皮肤，抽取腹水，苔盼蓝染色后光镜下观察活瘤细胞数＞95％，以1∶3注射用水稀释，制成瘤细胞悬液，含HepS肝癌细胞1×108个/ml。取肝癌细胞0.2ml，即每只小鼠注射HepS肝癌细胞约5×107个于小鼠前肢右腋皮下，制造移植性肝癌的实体瘤模型。
1.2动物分组取昆明种(KM)小鼠80只，随机分成模型阴性对照组10只及实验组70只。实验组分为5-Fu阳性化疗组，本发明药物(番灵)剂量低、中、高治疗组，灵芝孢子粉(灵粉)剂量低、中、高治疗组，每组小鼠10只。处死前称每只小鼠重量。
1.3动物给药在造模后第二天，各组给药模型阴性对照组每天灌服0.2ml的1％CMC-Na生理盐水生理盐水；5-Fu阳性化疗组小鼠按40mg·kg-1d-15-Fu腹腔注射，即每只小鼠约给药0.2ml配制好浓度的5-Fu溶液；各治疗组小鼠分别以不同浓度实验药物灌胃，即按制药所配好的药物浓度，即低、中、高三剂量组，分别每天每只小鼠给药0.2ml，连用7天。
1.4取材及处理于停药24小时后处死所有小鼠，称体重。完整剥取实验组小鼠的皮下肿瘤，称瘤量，计算抑制率。
抑制率(IR)＝(模型阴性对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/模型阴性对照组平均瘤重×100％。
1.5观测指标比较各组下列指标的差异瘤重抑制率。
2.实验结果番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物(番灵)，对HepS移植性肝癌有显著的抑制作用，3个剂量组的抑瘤率分别达65.89％、63.57％、60.47％，其抗癌活性显著比灵芝孢子粉(灵粉)为高。本发明药物不同剂量组的瘤重抑制率与5-Fu阳性化疗组的瘤重抑制率相当接近，说明本发明药物的抗肿瘤效价较高，在制备抗癌药物中具有广泛的应用前景。
表1 番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物(番灵)对移植性肝癌HepS的抑制作用

★与模型组相比P＜0.01；※与化疗组相比P＞0.05；*与灵粉组相比P＜0.01实施例5抗癌药物的毒性反应1实验材料1.1动物由南京中医药大学动物实验中心提供一级昆明种小鼠，体重18-22克，雌雄各半，预检饲养一周。按寇氏改良法计算LD50。
1.2药物番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物(番甲)，番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物(番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物、破壁灵芝孢子粉的乙醇提取物和水提取物的混合物)(番灵)，配制成所需浓度的混悬液，放4℃冰箱保存。
2.LD50测定2.1 LD50测定过程番甲组60只小鼠随机分6组，每组10只，雌雄各半，番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷部位提取物(番甲)6个剂量组分别为300、225、168、、126、95、71mg·kg-1，组间剂量比值为1∶0.75。给药前小鼠禁食16小时，自由饮水。以适量淀粉糊精加入研磨配制成所需浓度的混悬液，ig给药，其中300mg·kg-1剂量为可能给予的最大浓度。
番灵组50只小鼠随机分5组，每组10只，雌雄各半，番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物(番灵)5个剂量组分别为2.0、1.6、1.28、1.02、0.82g·kg-1，组间剂量比值为1∶0.8。给药前小鼠禁食16小时，自由饮水。配制成所需浓度的混悬液，ig给药，其中2.0g·kg-1剂量为可能给予的最大浓度。
给药后立即观察和记录动物的中毒症状和死亡情况，观察期为7天，按寇氏改良法计算LD50。
2.2LD50测定结果表2 小鼠经口灌胃番甲药的死亡情况、体重变化

表3 小鼠经口灌胃番灵药的死亡情况、体重变化

上述结果，按寇氏改良法计算半数致死量(LD50)，结果如下番甲药的LD50＝log-1[Xm-i×(∑p-0.5)]＝log-1[log 300-0.125×(3.2-0.5)]≈137.97mg/kg；番灵药的LD50＝log-1[Xm-i×(∑p-0.5)]＝log-1[log 2-0.0969×(2.6-0.5)]≈1.25g/kg。两组比较有非常显著性差异，说明番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物(番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物、破壁灵芝孢子粉的乙醇提取物和水提取物的混合物)(番灵)明显降低了番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物(番甲)的毒性。


本发明公开了一种治疗癌症的药物及其制备方法。该药物由番荔枝种子和灵芝孢子粉的醇和水的提取物制成；其制备方法是首先取番茄枝种子烘干粉碎→用乙醇浸泡→浓缩得浸膏→经二氯甲烷萃取得二氯甲烷提取物浸膏A；其次取破壁灵芝孢子粉加乙醇回流提取→回收乙醇→浓缩得乙醇提取物浸膏B；药渣加水煎煮，水提液浓缩至浸膏C；然后将上述浸膏A、B、C、合并、混匀、干燥，制得本发明药物。该药物具有补虚解毒之功效，具有显著的抑瘤作用，对HepS移植性肝癌的抑癌率达60.47％－65.89％，该药物的毒性低而抗肿瘤效价较高，在制备抗癌药物中具有广泛的应用前景。