两种拟青霉属真菌对三七的生物转化的制作方法[0001]【技术领域】，涉及两种拟青霉属真菌对三七药材进行生物转化的方法。[0003]三七\_Panax no toginseng (Burk.) F.H.Chen]为五加科人参属多年生草本植物，是我国传统的药用植物。主要活性成分为三七总阜苷iPanax notoginseng saponins,PNS)。三七总皂苷在耐缺氧、抗衰老、提高机体免疫力等方面的药理作用显著，且总皂苷和部分单体皂苷在血液系统、心脑血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面均有较好活性。尤其是稀有皂苷在治疗心脑血管疾病、抗肿瘤方面表现出较好的药理活性，如人参皂苷Rd对心脑血管、神经系统、免疫系统等作用独特，是一种很有前景的候选药物。研究表明:天然的人参皂苷含量低，且分子结构不是最佳的活性状态，可通过生物转化减少人参皂苷结构中的糖基数目，将天然皂苷中含量较高的Rgl、Rbl、Rl、Re等皂苷转化为含量甚微的稀有皂苷:Rd、Rhl、F1、F2、C-K等，可提高其疗效和生理活性。 蝙fe蛾拟青霉焊Ce1S hepiali Chen & Dai)和蛹草拟青霉JoffiiFce1Smi Ii tar is Liang)是两种重要的药用虫草真菌，该真菌发酵产物中含有以虫草素和虫草腺苷为主的药用成分，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、清除自由基的功效。[0004]本发明以三七药材为主要培养基成分，采用两种药用真菌蝙蝠蛾拟青霉{Paeci lomyces hepiali Chen & Dai )和虫甬草拟青霉焊ces mi Ii tar is Liang)对三七药材进行生物转化，同时获得药用稀有人参皂苷、虫草素和虫草腺苷，培养物兼具三七药效和真菌药效，提高了治疗和保健功效。[0005]

[0006]本发明提供了一种利用药用真菌发酵三七药材，同时获得真菌和三七药用活性成分的方法。
[0007]该方法的操作步骤如下:
(1)菌种制备:将蝙蝠蛾拟青霉hepialiChen & Dai)和蛹草拟青霉{Paeci lomyces mi Ii tar is Liang)分别接种到PPDA斜面培养基,于26°C恒温培养7天；
(2)三七培养基:精确称取Ig过60目筛的三七粉于100 mL三角瓶，加入0.2 mL无机盐:10 %KH2P04 和 5 %MgS04，20 mL 水，自然 pH, 121°C灭菌 30 min ；
(3)液体发酵培养:将步骤(1)中制备好的菌种接入`步骤(2)三七培养基中，于10-30。。，120 r/min 培养 4-16 d ；
(4)液体发酵物后处理:将步骤(3)中培养好的液体发酵物抽滤，用10mL纯水清洗滤渣，合并滤液，4000 r/min离心30 min，上清液加入纯水定容至30mL为上清处理液。取10 mL上清处理液加入等体积水饱和正丁醇超声萃取I h，静置分层后，收集上层正丁醇相60°C旋蒸至干燥，用5 mL 70%甲醇溶解，采用HPLC法检测其皂苷含量。取20 mL上清处理液烘干，取0.1 g该烘干样品加入I mL 20%甲醇溶解，采用HPLC法检测其虫草素和虫草腺
苷含量。
[0008]本发明的关键点在于:使用药用虫草真菌对三七药材进行生物转化，一次发酵过程同时获得真菌药效成分和三七药效成分，使培养物兼具三七和药用真菌的双重功效。
[0009]
[0010]以下实施例用于说明本发明，但不是对本发明的限制。
[0011]实施例1:不同培养温度对发酵产物有效成分种类和含量的影响
(1)菌种制备:将蝙蝠蛾拟青霉hepialiChen & Dai)和蛹草拟青霉{Paeci lomyces mi Ii tar is Liang)分别接种到PPDA斜面培养基,于26°C恒温培养7天；
(2)三七培养基:精确称取Ig过60目筛的三七粉于100 mL三角瓶，加入0.2 mL无机盐:10 %KH2P04 和 5 %MgS04，20 mL 水，自然 pH, 121°C灭菌 30 min ；
(3)液体发酵培养:将步骤(1)中制备好的菌种接入步骤(2)三七培养基中，于10°C和30。。，120 r/min 培养 10 d ；
(4)液体发酵物后处理:将步骤(3)中培养好的液体发酵物抽滤，用10mL纯水清洗滤渣，合并滤液，4000 r/min离心30 min，上清液加入纯水定容至30 mL为上清处理液。取10 mL上清处理液加入等体积水饱和正丁醇超声萃取I h，静置分层后，收集上层正丁醇相60°C旋蒸至干燥，用5 mL 70%甲醇溶解，采用HPLC法检测其皂苷含量。取20 mL上清处理液烘干，取0.1 g该烘干样品加入I mL 20%甲醇溶解，采用HPLC法检测其虫草素和虫草腺苷含量。其结果见表1。
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表1不同培养温度对发酵产物有效成分种类和含量的影响