植物乳杆菌发酵液和纳米氧化锌抑菌组合物的制作方法[0002]无机抗菌剂及其制品，以具有安全、可靠、稳定和持久的抗菌性能等独特的功能，成为当前抗菌材料领域的研究开发热点，并普遍受到人们的关注，成为大家主要研究的对象。其中纳米氧化锌为白色固体，稳定性好，高温下不变色、不分解、价格低廉、资源丰富，己成为无机抗菌剂研究的热点之一，同时锌元素为动物和人体内的必需元素，其在体内具有广泛的生理、生化功能，同时也被称为“生命元素”。纳米氧化锌作为抑菌剂在医学领域已引起广泛关注。[0003]纳米氧化锌制成抑菌剂需制成液体，但纳米氧化锌难以溶于水，以至于难以体现其抑菌性能。
[0004]针对纳米氧化锌难以溶于水以至于难以体现其抑菌性能的问题，本发明人经过大量实验，植物乳杆菌 发酵液能增强纳米氧化锌的溶解度。此外，植物乳杆菌代谢能产生有机酸、双乙酰、过氧化氢和细菌素等物质，这些物质也能够抑制病原菌和腐败菌，故植物乳杆菌发酵液也能增强纳米氧化锌的抑菌性能，同时使微生态制剂具有特殊保健功能。本发明的目的在于提供一种植物乳杆菌和纳米氧化锌混合物，提高纳米氧化锌的溶解度，减少微生物耐药性的产生。[0005]本发明提供如下技术方案: 一种植物乳杆菌发酵液和纳米氧化锌抑菌组合物，含有植物乳杆菌发酵液、纳米氧化锌；
所述植物乳杆菌发酵液制备包括如下步骤:取植物乳杆菌单菌落接种于5mL的MRS培养液中，厌氧培养至菌浓度在IO8 CFU/mL的植物乳杆菌发酵液；所述纳米氧化锌为IOmg/mL的纳米氧化锌胶体溶液。植物乳杆菌发酵液在生产后也可以直接冻干保存，使用时稀释。
[0006]抑制大肠杆菌0157和腊样芽孢杆菌时，植物乳杆菌发酵液与纳米氧化锌的体积比为9:1。
[0007]本发明还涉及所述抑菌组合物在制备抑制大肠杆菌0157药物中的应用。
[0008]本发明还涉及所述抑菌组合物在制备抑制腊样芽孢杆菌药物中的应用。
[0009]本发明抑菌组合物植物乳杆菌发酵液能增强纳米氧化锌的溶解度。此外，植物乳杆菌能代谢产生有机酸、双乙酰、过氧化氢和细菌素等物质，这些物质也能够抑制病原菌和腐败菌，植物乳杆菌发酵液有协同增强纳米氧化锌的抑菌性能，同时使微生态制剂具有特殊保健功能。

[0011]实施例1
1，植物乳杆菌发酵液制备包括如下步骤:以植物乳杆菌为出发菌株，MRS为液体培养基，接植物乳杆菌(购自ATCC编号为ATCC 8014)单菌落于5mL的MRS为液体培养基中，于37°C厌氧培养箱中恒温培养24h，即可以得到菌浓度在IO8 CFU/mL的植物乳杆菌发酵液。
[0012]2，纳米氧化锌胶体溶液的制备:取阿拉丁公司生产的纳米氧化锌0.01g溶于ImL的蒸懼水中，震荡混匀得到10mg/mL的纳米氧化锌胶体溶液。
[0013]3、植物乳杆菌和纳米氧化锌联合抑菌作用。
[0014]a细菌的培养
挑取LB琼脂培养基上的大肠杆菌0157的单菌落于IOmL LB肉汤培养基中，置于37°C培养箱中培养12 h，再按I %的接种量接种于5 mL的LB肉汤培养基中，37°C培养5h后，取I mL上述菌液用IxPBS水连续稀释两个梯度，最终的菌液大约为IO8 CFU/mL。
[0015]b植物乳杆菌发酵液和纳米氧化锌在抑菌性能上的联合作用
分别取900 μ L上述已稀释好的菌液于1.5 mL灭菌的离心管中，向I号离心管中加入100 μ L植物乳杆菌发酵液，向2号离心管中加入100 μ L浓度为10 mg/mL的纳米氧化锌胶体溶液，向3号离心管中加入100 μ L纳米氧化锌胶体溶液和植物乳杆菌发酵液的混合液(1:9)，向4号离心管中加入100 μ LlxPBS水，置于37°C恒温震荡培养箱中培养5 h。每组实验平行三次。
[0016]c平板计数
将实验组待测液和空白组都用IxPBS连续稀释4个梯度，10_2、10_3、10_4各取出10 μ L分别均匀涂布在LB固体平板上；平板吹干后，37°C倒置培养12 h，长出菌落后计数，以30-300个菌落形成单位(CFU)为有效的计数范围。
[0017]实验结果如下: