专利名称：一种增强禽类免疫力的药物组合物及其制备方法近些年来，随着我国养禽业的不断发展，阻碍养禽业发展的因素也日益突出。例如，夏季高温引起的热应激，导致家禽的免疫功能下降，引发一系列疾病；另外，在肉鸡的饲养过程中，饲料的改变、鸡舍的温湿度和外环境条件的变化有时可引起代谢紊乱，影响其生长速度。对于一些免疫抑制性疾病，可使禽的免疫力降低，发病率上升，疾病治疗困难，且使 料肉比、料蛋比提高，造成养殖困难，养殖成本升高，严重影响养禽业的发展。当前，国内外对免疫抑制性疾病主要以免疫预防为主，但免疫时容易引起较大的应激反应，如果机体的免疫力较低，有时还会激发疾病的发生。研究证明植物多糖对畜禽免疫功能有调节作用，可以提高动物的免疫力，比如黄芪多糖、灵芝多糖等，植物多糖虽具有天然、无毒副作用的优势，但其起效较慢，作用不明显；而化药免疫增强剂也不同程度的存在着降低畜禽生产性能、残留或污染畜产品及农业环境，危害人类健康等缺点。因此，研制一种效果显著，使用安全的增强畜禽免疫力的药物，具有重要的意义。
有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种增强禽类免疫力的药物组合物，由以下组分组成布他磷5 15重量份、黄芪多糖I 10重量份，余量为药学上可接受的载体或辅料。优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物中，所述的布他磷为8 10重量份，黄芪多糖为6 10重量份，余量为药学上可接受的载体或辅料。优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物中，所述的布他磷为10重量份，黄芪多糖为10重量份，余量为药学上可接受的载体或辅料。优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物中，所述的黄芪多糖为使用水煮沸回流和乙醇沉淀的方法提取的。所用黄芪多糖，优选70%以上含糖量，更优选75%以上含糖量，最优选80%以上含糖量。优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物中，所述的药学上可接受的载体或辅料为葡萄糖、氯化钠、无水硫酸钠、蔗糖、糊精、淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、甲壳胺、双岐糖、可溶性淀粉、滑石粉、羟丙基淀粉、乙醇、羟丙基纤维素、聚乙二醇、壳聚糖、聚微酮中的一种或多种。更优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物中，药学上可接受的载体或辅料为葡萄糖、氯化钠、无水硫酸钠。本发明的另一目的在于提供一种如上所述的增强禽类免疫力的药物组合物的制备方法，包括以下步骤I)黄芪多糖的提取使用6-10倍体积的水分别煮沸回流，离心并浓缩滤液，加入乙醇离心并沉淀，使用乙醇洗涤，干燥后即得黄芪多糖；2)按照比例将黄芪多糖和布他磷，与药学上可接受的载体混合即得增强禽类免疫力的药物组合物，优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物的制备中，所述的步骤I)中水煮回流分三次完成加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时。优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物的制备中，所述的步骤I)中加入乙醇离心并沉淀为二次完成首先加入无水乙醇至滤液的含醇量为35%，8000rpm离心20min ;再加入无水乙醇至滤液的含醇量为70%，4°C静置12小时。·优选地，本发明的增强禽类免疫力的药物组合物的制备中，所述的步骤I)中使用乙醇洗涤为三次完成分别用80%，90%和无水乙醇洗涤。技术效果发明人通过大量细致地试验，发现中药材黄芪的提取物黄芪多糖和西药中化学药物——布他磷，在以合适的比例制备而成的药物组合物，而无需其他的活性成分，即可产生明显的协同效果，即具有对于禽类动物免疫力方面和对禽类动物疫苗的免疫效果的增强作用，因此特别适合对禽类疾病的预防和治疗，因此，本发明的药物组合物至少具有以下的优占-^ \ ·(I)、本发明的药物组合物使禽类机体细胞免疫和体液免疫水平均有显著提高，特别是对禽类机体的细胞水平的免疫力有增强作用，因此，禽类机体整体的免疫能力有较好的增强；(2)、本发明的药物组合物配合疫苗使用能提高禽抗体滴度，抗体产生更高，免疫增效作用明显；(3)、本发明的药物组合物可用于禽新城疫、法氏囊、禽流感等疫苗的配合用药，延长抗体保护时间，节约疫苗使用量和使用次数，提高疫苗的预防和治疗效果；(4)、本发明的药物组合物可用于突发性、危害严重的禽病的预防，避免常见禽类疾病的流行。本发明的黄芪多糖使用的是水煮醇沉法，即包括以下步骤使用6-10倍体积的水分别煮沸回流，离心并浓缩滤液，加入乙醇离心并沉淀，使用乙醇洗涤，干燥后即得黄芪多 糖。本发明实施例中对上述方法进行了工艺的优化，即优选使用分三次完成水煮回流加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时；优选使用二次完成加入乙醇离心并沉淀首先加入无水乙醇至滤液的含醇量为35%，8000rpm离心20min ;再加入无水乙醇至滤液的含醇量为70%，4°C静置12小时；优选使用三次完成乙醇洗涤分别用80%，90%和无水乙醇洗涤。因此，本发明使用水煮醇沉方法获得的黄芪多糖纯度更佳，杂质如蛋白质等的含量更少，对禽类的不良刺激也更小。但是本发明的黄芪多糖也可以使用其他常规的方法，如煎煮法、浸溃法、回流法、CaO水提、Na2CO3水提、微波水提、超滤法、醇提水沉等方法制备而得；可以是浸膏，也可以是进一步提取分离获得的有效部位或者是有效部位的组合物。或者使用树脂精制法、超临界流体提取法(SFE法)和高速逆流色谱提取法(High Speed Counter CurrentChromatography, HSCCC)等今年来已成功应用于黄苗多糖的精制方法,本领域技术人员可以对上述方法加以适当改变，用于制备获得本发明的黄芪多糖。本发明所述的药学上可接受的载体或辅料可以是任何制备中药颗粒或西药颗粒中常用的或者常规的药学上可接受的载体或辅料，例如稀释剂(填充剂)包括但不限于蔗糖、糊精、淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、甲壳胺、可溶性淀粉、滑石粉或水溶性糊精等；崩解剂包括但不限于淀粉、羧甲基纤维素钠(CMS-Na)、微晶纤维素(MCC)、微粉硅胶、羟丙基淀粉、可溶性淀粉、水溶性糊精；包合剂包括但不限于α -环糊精(α -⑶)、β -环糊精(β -⑶)和N-LOK变性淀粉等；润湿剂(粘合剂)包括但不限于水、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、羟丙基纤维素、聚乙二醇(PEG)等上述辅料功能如稀释剂，崩解剂，润湿剂如微晶纤维素(MCC)、微粉硅胶、聚乙二醇、滑石粉、壳聚糖，滑石粉，聚微酮。上述的药学上可接受的载体或辅料可以单独使用，也可以联合使用。本领域的普通技术人员可以理解，未来新出现的可用于制备中药颗粒的药学上可接受的载体，如果能够实现本发明的目的，也应该包括在本发明的保护范围。本发明实施例中优选地使用的药学上可接受的载体为葡萄糖、氯化钠、无水硫酸钠。本发明药物组合物可通过饮水或饲料混合给禽使用。如可将本发明组合物按I 100-1000倍的比例，与饲料混合后饲喂禽类。其他的剂型如滴鼻剂、针剂、粉剂或胶囊剂等也等适宜的制剂也可用于制备本发明的药物组合物。为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。实施例I—种增强禽类免疫力药物的制备方法，其特征是按如下步骤进行(I)将黄芪药材粉碎成最粗粉，加10倍量水浸泡I小时后，回流提取3次，加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时，合并3次提取液，冷却至室温，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，浓缩至相对密度为I. 15 I. 20，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀加水溶解，使浓度成Ig生药/ml的 溶液，加无水乙醇至含醇量为35%，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀依次用80%、95%、无水乙醇洗涤脱水后，80°C真空干燥12小时，即得黄芪多糖提取物，用硫酸-苯酚比色法测得黄芪多糖的含量以葡萄糖计为77%。(2)按重量份数(每份为Ig时)称取布他磷5g (杭州福斯特药业，含量99.5%)，按重量份数称取黄芪多糖lg，混合均匀；(3)按重量份数称取无水葡萄糖94g，与上述(I)组分混合均匀即得。实施例2一种提高禽类抗应激能力、增强免疫力药物的制备方法，其特征是按如下步骤进行(I)将黄芪药材粉碎成最粗粉，加10倍量水浸泡I小时后，回流提取3次，加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时，合并3次提取液，冷却至室温，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，浓缩至相对密度为I. 15 I. 20，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀加水溶解，使浓度成Ig生药/ml的溶液，加无水乙醇至含醇量为35%，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀依次用80%、95%、无水乙醇洗涤脱水后，80°C真空干燥12小时，即得黄芪多糖，用硫酸-苯酚比色法测得黄芪多糖的含量以葡萄糖计为85%。(2)按重量份数(每份为Ig时)称取布他磷15g，按重量份数称取黄芪多糖10g，混合均勻；(3)按重量份数称取氯化钠75g，与上述(I)组分混合均匀即得。实施例3一种提高禽类抗应激能力、增强免疫力药物的制备方法，其特征是按如下步骤进行(I)将黄芪药材粉碎成最粗粉，加10倍量水浸泡I小时后，回流提取3次，加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时，合并3次提取液，冷却至室温，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，浓缩至相对密度为I. 15 I. 20，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀加水溶解，使浓度成Ig生药/ml的溶液，加无水乙醇至含醇量为35%，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀依次用80%、95%、无水乙醇洗涤脱水后，80°C真空干燥12小时，即得黄芪多糖，用硫酸-苯酚比色法测得黄芪多糖的含量以葡萄糖计为80%。(2)按重量份数(每份为Ig时)称取布他磷10g，按重量份数称取黄芪多糖10g，混合均勻；(3)按重量份数称取无水硫酸钠80g，与上述(I)组分混合均匀即得。实施例4一种提高禽类抗应激能力、增强免疫力药物的制备方法，其特征是按如下步骤进行(I)将黄芪药材粉碎成最粗粉，加10倍量水浸泡I小时后，回流提取3次，加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时，合并3次提取液，冷却至室温，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，浓缩至相对密度为I. 15 I. 20，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀加水溶解，使浓度成Ig生药/ml的溶液，加无水乙醇至含醇量为35%，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀依次用80%、95%、无水乙醇洗涤脱水后，80°C真空干燥12小时，即得黄芪多糖，用硫酸-苯酚比色法测得黄芪多糖的含量以葡萄糖计为72. 9%。(2)按重量份数(每份为Ig时)称取布他磷10g，按重量份数称取黄芪多糖10g，混合均勻； (3)按重量份数称取无水葡萄糖80g，与上述(I)组分混合均匀即得。实施例5—种提高禽类抗应激能力、增强免疫力药物的制备方法，其特征是按如下步骤进行(I)将黄芪药材粉碎成最粗粉，加10倍量水浸泡I小时后，回流提取3次，加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时，合并3次提取液，冷却至室温，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，浓缩至相对密度为I. 15 I. 20，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀加水溶解，使浓度成Ig生药/ml的溶液，加无水乙醇至含醇量为35%，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀依次用80%、95%、无水乙醇洗涤脱水后，80°C真空干燥12小时，即得黄芪多糖，用硫酸-苯酚比色法测得黄芪多糖的含量以葡萄糖计为71%。(2)按重量份数(每份为Ig时)称取布他磷10g，按重量份数称取黄芪多糖10g，混合均勻；(3)按重量份数称取氯化钠80g，与上述(I)组分混合均匀即得。实施例6一种提高禽类抗应激能力、增强免疫力药物的制备方法，其特征是按如下步骤进行(I)将黄芪药材粉碎成最粗粉，加10倍量水浸泡I小时后，回流提取3次，加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时，合并3次提取液，冷却至室温，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，浓缩至相对密度为I. 15 I. 20，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀加水溶解，使浓度成Ig生药/ml的溶液，加无水乙醇至含醇量为35%，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀依次用80%、95%、无水乙醇洗涤脱水后，80°C真空干燥12小时，即得黄芪多糖，用硫酸-苯酚比色法测得黄芪多糖的含量以葡萄糖计为80%。(2)按重量份数(每份为Ig时)称取布他磷5g，按重量份数称取黄芪多糖10g，混合均匀；
(3)按重量份数称取无水葡萄糖85g，与上述(I)组分混合均匀即得。实施例7一种提高禽类抗应激能力、增强免疫力药物的制备方法，其特征是按如下步骤进行(I)将黄芪药材粉碎成最粗粉，加10倍量水浸泡I小时后，回流提取3次，加水量依次为10倍、8倍、6倍，提取时间依次为2小时、I. 5小时、I. 5小时，合并3次提取液，冷却至室温，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，浓缩至相对密度为I. 15
I.20，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀加水溶解，使浓度成Ig生药/ml的溶液，加无水乙醇至含醇量为35%，高速离心机离心，8000转每分钟离心20分钟，取上清液，加无水乙醇至含醇量为70%，4°C静置12小时，弃去上清液，沉淀依次用80%、95%、无水乙醇洗涤脱水后，80°C真空干燥12小时，即得黄芪多糖，用硫酸-苯酚比色 法测得黄芪多糖的含量以葡萄糖计为84%。(2)按重量份数(每份为Ig时)称取布他磷15g，按重量份数称取黄芪多糖lg，混合均匀；(3)按重量份数称取无水硫酸钠84g，与上述(I)组分混合均匀即得。实施例8本发明药物组合物增强鸡机体免疫力的试验本试验主要是通过观察药物对鸡血液中T淋巴细胞的影响，旨在为本发明药物增强免疫功能的临床应用提供依据。实验动物试验用鸡为10日龄健康艾维茵肉用仔鸡160只，雌雄混合饲养。常规饲养方法管理，试验期间饲养管理条件一致。实验动物分组与处理将160只10日龄健康艾维茵肉用仔鸡(雌雄混合)随机分成A、B、C、D四个组，每组40只。A组在基础日粮中按O. 2%混料投喂实施例4制得的本发明药物；B组在基础日粮中按O. 02%混料投喂布他磷；C组在基础日粮中按O. 02%混料投喂黄芪多糖；D组为空白对照组，基础日粮中不添加任何药物。饲养管理试验在同一鸡舍进行，饲养密度10只/m2，全部笼养。四个试验组的饲喂方法是A、B、C各组将试验药品按比例拌入料中，连续饲喂12天，空白对照组用基础日粮进行常规饲喂。整个试验期间自由采食，自由饮水，每天搞好清洁。表I.试验动物分组及药物用量
组别数量(只)__用法用量__用药时间
0.2%混料祠喂实施例4制 A40.12 天
Γ 备的约物----
B__40__0.02%混料祠喂布他嶙12天
C__40__0.02%混料饲喂黄芪多糖 12天
P__40__不添力口任何药物__12天实验方法各组连续饲喂12天，停药后每组随机抽取5只鸡采血，进行E-玫瑰花环试验。结果判定光镜下观察约200个淋巴细胞，凡淋巴细胞表面黏附3个或3个以上绵羊红细胞者为花环形成细胞，计算出花环形成细胞占淋巴细胞总数的百分数。用SPSS分析软件进行统计学处理。具体见下表
表2.各试验组T淋巴细胞玫瑰花环形成百分率


本发明提供了一种增强禽类免疫力的药物组合物，其中含布他磷5～15重量份、黄芪多糖1～10重量份，余量为辅料；所述的黄芪多糖为使用水煮沸回流和乙醇沉淀的方法提取的。本发明的药物组合物使禽类机体细胞免疫和体液免疫水平均有显著提高，特别是对禽类机体的细胞水平的免疫力有增强作用，因此，禽类机体整体的免疫能力有较好的增强；此外，本发明的药物组合物配合疫苗使用能提高禽抗体滴度，抗体产生更高且维持时间更长，免疫增效作用明显。因此，本发明的药物组合物可用于禽新城疫、法氏囊、禽流感等的配合用药，延长抗体保护时间，节约疫苗使用量和使用次数，提高疫苗的预防和治疗效果；可用于突发性、危害严重的禽病的预防，避免常见禽类疾病的流行。