一株能生物合成睾内酯的尖孢镰刀菌及合成方法

朱敦明, 吴洽庆, 任杰, 王玉, 张红榴, 生措

2014年1月1日

2012年6月14日

2012年6月14日

天津工业生物技术研究所

C12P33/20GK103484375SQ201210194657

尖孢 内酯 镰刀 一株 合成 生物

1.尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum SC1301,保藏单位为中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC N0.59622.权利要求1所述菌株的发酵培养方法，其包括步骤 1)种子培养 将尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum SC1301接入灭菌后的种子液体培养基中，于30~350C，200r/min培养48~72h，得到种子液， 液体培养基的配制如下葡萄糖10~15g/L,甘油12.63g/L,蛋白胨5g/L,酵母提取物5g/L，NaCl 2g/L，KH2P045g/L，pH 自然; 2)发酵培养 将步骤(1)得到的种子液体按接种量5~10%接种到发酵培养基中进行发酵培养，培养条件30~35°C，摇床转速200r/min，发酵时间24~30h，即得到菌体的发酵液， 所述发酵培养基的成分为葡萄糖30g/L，玉米浆干粉10~15g/L，NaN032g/L, KCl0.5g/L, K2HPO4 ? 3H20 2g/L, KH2PO41g/L, MgSO4 ? 7H20 0.5g/L, FeSO4 ? 7H20 0.02g/L, pH 8.03.一种制备睾内酯的生物合成方法，其特征是，以雄留烷或孕留烷留体化合物即式(I)化合物为底物，采用权利要求1所述菌株生物转化得到式(2)睾内酯， 反应式如下1 r^P>2丫` Fusarium oxysporum SC 13 01 7 4 6(1) (2) R1为羰基或(6-羟基； R2为羰基或P -乙酰基； 1，2位、4，5位、6，7位为单键或双键 包括如下步骤 1)转化反应发酵培养权利要求1所述的菌株，将式(I)化合物粉碎或以溶剂溶解，投入已培养好的菌体发酵液中进行生物转化，30~35°C，150~200r/min转化9~24h终止反应; 2)产物的提取与精制步骤(1)转化反应结束后，用乙酸乙酯萃取发酵液数次，合并萃取液，干燥，减压浓缩，浓缩后采用硅胶色谱柱分离得到睾内酯4.如权利要求3所述的生物合成方法，其特征是所述溶解底物的溶剂选自但不仅限于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、二甲基亚砜的一种，优选二甲基亚砜，加入量为I~4% (v/v)5.如权利要求3所述的生物合成方法，其特征是所述作为底物的化合物(I)优选以下几种化合物的一种 雄甾-4-烯-3，17-二酮； 孕甾-4-烯-3，20-二酮； 33-羟基-5-雄烯-17-酮；雄甾-1，4-二烯-3，17-二酮6.本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的技术思想，均属于本发明权利要求所定义的范围

[0001]本发明涉及生物工程领域，本发明涉及一种生物合成睾内酯的菌株及合成方法

本发明公开了一株尖孢镰刀菌Fusarium?oxysporum?SC1301及用该菌发酵转化雄甾烷或孕甾烷甾体化合物生产睾内酯的方法。本发明菌种以雄甾-1，4-二烯-3，17-二酮为唯一碳源，是从天津市西青区农家果园采集的土壤中筛选而得。菌株Fusarium?oxysporum?SC1301现保藏在中国普通生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC?No.5962。生产方法为采用尖孢镰刀菌Fusarium?oxysporum?SC1301为菌种，经过一级种子培养和二级发酵扩大培养，在菌体发酵液中投入粉碎或以溶剂溶解的雄甾烷或孕甾烷甾体化合物进行转化反应，经有机溶剂萃取，硅胶柱层析分离得到产物睾内酯，产率均大于78％。反应过程中操作简单，能耗低。

一株能生物合成睾内酯的尖孢镰刀菌及合成方法