专利名称：用于治疗心血管病的血管紧张素转化酶抑制剂和环氧－甾族醛固酮拮抗剂的联合疗法的制作方法心肌(心脏)衰竭，不论是原来心肌梗塞(一次或多次)、与高血压有关的心脏病的后果，还是原发性心肌病的后果，都是世界范围性的主要健康问题。有症状的心力衰竭的发病率在过去的几十年中持续上升。在临床方面，代谢失调的心力衰竭由产生自充血性器官和灌注过少组织的朕兆和症状的相互影响因素组成，形成了充血性心力衰竭(CHF)综合征。充血主要由增加的静脉压和不适当的钠离子(Na+)排泄引起，与饮食Na+摄入有关，并主要涉及醛固酮(ALDO)的循环水平。Na+的异常潴留发生于小管上皮细胞至肾单位，包括末梢小管和皮质收集管的侧向部分，其中存在ALDO受体位点。ALDO是人体最有力的盐皮质激素。术语盐皮质激素暗示，此甾类激素具有矿物质调节活性。它不仅提高钠离子在肾中，也提高钠离子从下部胃肠道和唾液腺和汗腺中的再吸收，每个都代表了典型的ALDO-应答组织。ALDO调节Na+和水的再吸收，代价是排泄钾离子(K+)和镁离子(Mg2+)。醛固酮在心力衰竭(HF)病的生理中起重要作用(Dzau VJ，Colucci WS，Hollenberg NK，Williams GH，肾素血管紧张素-醛固酮系统与充血性心力衰竭临床症状的关系，Circulation 1981；63(3)645-651)。醛固酮提高钠离子潴留，镁离子和钾离子损失(其是心律不齐和心脏猝死的帮凶)，交感神经的激活和副交感神经抑制，心肌和血管纤维化，压力感受器障碍，受损的动脉顺应性和血管损伤(Wang W，醛固酮的慢性给药抑制了狗的压力感受器反射功能，Hypertention，1994；24(5)571-575；)。循环醛固酮水平的习惯性升高导致心脏和血管纤维化组织的形成，这引起进展性HF(WeberKT等，在肥大的压力负荷过大心肌中的胶原，Cir 1987；75140-147)。心肌胶原产生的增加以及随之而来的左心室(LV)肥大导致心肌强直，心室和血管顺应性降低，心脏舒张灌注受损，心脏舒张和心脏收缩障碍，局部缺血和最后的HF。心肌纤维化还可导致心律不齐和猝死。醛固酮阻断心肌去甲肾上腺素摄入，增加血浆去甲肾上腺素并提高心室异位活性(Struthers AD，ACE抑制剂治疗慢性心力衰竭中醛固酮脱逸，Eur Heart J 1995；16(Suppl N)103-106；StruthersAD，在血管紧张素-转化酶抑制剂治疗慢性心力衰竭中醛固酮脱逸，JCardiac Failure 1996；2(1)47-54)。醛固酮影响压力感受器功能并引起脑和肾血管损伤和内皮机能障碍(Struthers AD，ACE抑制剂治疗慢性心力衰竭中醛固酮脱逸，Eur Heart J 1995；16(SupplN)103-106)。醛固酮还已显示出增加纤溶酶原激活物抑制剂水平并因此阻止纤维蛋白溶解。ALDO还可以刺激非上皮细胞中的反应。由血浆ALDO水平慢性升高(其与饮食钠离子摄入具有不相称的关系)导出，这些反应可对心血管系统的结构具有不利的后果。因此，ALDO可能造成多种原因的心肌衰竭的进展性特征。多种因素调节ALDO合成和代谢，其中很多因素对心肌衰竭的患者是关键的。这些包括肾素和非肾素依赖性因素(如K+，ACTH)，其促进ALDO合成。肝脏血流，通过调节循环ALDO的清除率，帮助确定血浆浓度，该浓度在以心脏输出和肝血流降低为特征的心力衰竭中是重要因素。肾素-血管紧张素-醛固酮系统(″RAAS″)参与调节压力/容积体内平衡的激素机制之一，并也参与高血压的恶化，高血压是暗示更严重的心血管病如充血性心力衰竭的前期症状。肾素血管紧张素-醛固酮系统的激活起始于肾中近肾小球细胞分泌酶肾素。此酶肾素作用于天然底物，血管紧张肽原，释放一种十肽，血管紧张素I。该十肽被血管紧张素转化酶(″ACE″)裂解得到八肽，血管紧张素II，其是该系统主要的活性物质。此八肽，血管紧张素II，是强血管收缩剂并也产生其它生理作用如刺激醛固酮分泌，促进钠离子和流体潴留，抑制肾素分泌，增加交感神经系统活性，刺激后叶加压素分泌，引起确定的心脏变力作用和调节其它的激素系统。
人们已将重点放在将醛固酮过多症最小化，这是为了将患者治疗最佳化。很多临床医师推测用血管紧张素-转化酶抑制剂(ACE-I)抑制肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)将会防止醛固酮形成。但是，越来越多的证据表明ACE-I只暂时抑制醛固酮水平(Struthers AD，在慢性心力衰竭的血管紧张素-转化酶抑制剂治疗中醛固酮脱逸，JCardiac Failure 1996；2(1)47-54)。开始用ACE-I治疗时血浆醛固酮水平降低，但是在ACE-I治疗3至6个月后又回到治疗前水平，尽管对继续给药的顺从性很好(Staessen J，Lijnen P，Fagard R，Verschueren LJ，Amery A，长期血管紧张素II抑制期间醛固酮的血浆浓度升高，J Endocr 1981；91457-465)。由于存在醛固酮释放的其它重要决定因素，如血清钾离子，故此现象称为醛固酮“脱逸”(Pitt B.接受血管紧张素转移酶抑制剂治疗的左心室障碍患者中醛固酮的″脱逸″治疗的暗示，Cardiovascular Drugs and Therapy1995；9145-149)。
人们尝试降低用常规利尿剂治疗的患者中和用血管紧张素转移酶(ACE)抑制剂治疗的患者中的ALDO-受体拮抗机制，这些患者由于自立血压过低，常常受到限制，只能接受小剂量的ACE抑制剂。这些患者可能出现心力衰竭症状的复发，似乎与血浆ALDO水平的升高有关。
已表明用ACE-I阻断醛固酮对HF患者的存活和住院治疗有利。在CONSENSUS(北斯堪的纳维亚人依那普利存活合作研究[Cooperative North Scandinavian Enalapril Survival Study])实验中，与安慰剂加利尿剂相比，接受依那普利(一种ACE-I)加利尿剂治疗的HF(IV型NYHA)严重患者1年的死亡率降低了31％。在CONSENSUS中，具有高基础血浆醛固酮水平的患者比低基础水平的患者具有较高的死亡率。在接受依那普利治疗的小组中，只有在基础醛固酮血浆水平高于中间值的小组中死亡率才降低。在基础醛固酮血浆水平低于中间值的小组中，没有观察到死亡率与安慰剂组存在差别(Swedberg K，Eneroth P，Kjekshus J，Wilhelmsen L，激素调节严重充血性心力衰竭患者的心血管功能及其与死亡率的关系，CONSENSUS检测研究组，Circulation 1990；82(5)1730-1736)。
醛固酮受体拮抗剂通过阻断醛固酮的作用位点直接起作用。醛固酮受体阻断试剂还没有与ACE-I广泛联合使用，这是由于存在严重血钾过高的可能。但是，在随机螺甾内酯评价研究(RALES)中，在严重HF(III或IV型NYHA)治疗中，向标准治疗(ACI-I和环利尿剂，加或不加地高辛)每天加入螺内酯25mg，该剂量既不是利尿剂量也不是血液动力剂量，与用标准治疗加安慰剂治疗相比，所有原因的死亡率都降低了30％(p＜0.001)。与安慰剂治疗的患者相比，用螺内酯治疗的患者，因恶化的HF住院治疗的频率降低了35％(随机螺甾内酯评价研究者Pitt B，Zannad F，Remme WJ，Cody R，Castaigne A，PerezA，Palensky J，Wittes J，螺内酯对严重心力衰竭患者的发病率和死亡率的作用，N Engl J Med 1999；341(10)709-717)。应强调当螺内酯加到包括ACE-I的标准治疗中时，发生了发病率和死亡率产生的这些改善。用螺内酯治疗的患者的血清钾离子浓度有中等的升高，与安慰剂治疗的患者相比，其具有理论意义，但是没有临床显著性。
患有急性心肌梗塞(AMI)的患者常常继续恶化为HF并随之死亡。已表明用ACE-I阻断RAAS降低了这些患者中所有原因的死亡率。在急性梗塞雷米普利效果研究(AIRE)中，与安慰剂相比，在AMI后任何时间给出现HF临床迹象的患者使用ACE-I导致所有原因的死亡率降低27％(p＝0.002)。(急性梗塞雷米普利效果(AIRE)研究者，雷米普利对出现心力衰竭临床迹象的急性心肌梗塞幸存者的发病率和死亡率的作用，Lancet 1993；342821-828)。此外，与安慰剂相比，接受治疗的患者中发展为严重抵抗性HF的危险降低了23％(p＝0.017)(Cleland JGF，Erhardt L，Murray F，Hall AS，BallSG，雷米普利对出现心力衰竭临床迹象的急性心肌梗塞幸存者中发病率和死亡率的作用得自AIRE研究者的报告，Eur Heart J 1997；1841-51)。在对AIRE患者的长期(3年)追踪研究(AIREX)中，Hall等发现用ACE-I治疗的患者与安慰剂相比在所有原因导致的死亡率方面降低了36％(p＝0.002)，这表明在AMI后抑制RAAS不仅显著影响存活，还是长期的(Hall AS，Murray GD，Ball SG代表AIREX研究者，随机分配的雷米普利或安慰剂对急性心肌梗塞后心力衰竭的患者的追踪研究AIRE扩展(AIREX)研究，Lancet 1997；349(9064)1493-1497)。在另一项MI后研究(群多普利心脏评价研究，TRACE)中，MI后2至6天LV障碍的患者接受ACE-I治疗，安慰剂相比死亡危险率相对降低18％(p＝0.001)，而与安慰剂相比恶化为严重HF的几率降低了29％(p＝0.003)(K?ber L，Torp-Pedersen C，Carlsen JE，Bagger H，Eliasen P，Lyngborg K，Videb?k J，Cole DS，AuclertL，Pauly NC，Aliot E，Persson S，Camm AJ，群多普利心脏评价(TRACE)研究组，N Engl J Med 1995；3331670-1676；Torp-Pedersen C，K?ber L，Carlsen J代表TRACE研究组，心肌梗塞后血管紧张素转化酶抑制群多普利心脏评价研究，Am Heart J 1996；132235-243)。在雷米普利对螺内酯的研究中，Rodriguez等发现两种药物都预防心室扩张并进一步降低AMI后喷血分数受到损害的患者中心脏收缩障碍。这些研究的结果表明给AMI后患者使用的ACE-I中增加醛固酮受体拮抗剂会进一步降低死亡率(Rodriguez JA，Godoy I，Castro P，Quintana JC，Chavez E，Corbalan R，雷米普利对螺内酯对急性心肌梗塞后左心室改变的双盲随机安慰剂对照研究，JACC 1997；摘要947-9133A)。
很多醛固酮受体阻断药物及其在人体中的作用是已知的。例如，螺内酯通过竞争性抑制醛固酮结合作用于盐皮质激素受体水平的药物。
此甾类化合物已被用于阻断在肾远端小管的醛固酮-依赖性钠离子转运以便降低水肿并治疗自发性高血压和原发性醛固酮过多症[F.Mantero等，Clin.Sci.Mol.Med.，45(Suppl 1)，219s-224s(1973)]。螺内酯也常用于治疗其它高醛固酮-相关的疾病如肝硬化和充血性心力衰竭[F.J.Saunders等，螺甾内酯；螺内酯综合性综述，Searle，New York(1978)]。由1mg至400mg每天渐增的螺内酯剂量[即1mg/天，5mg/天，20mg/天]给螺内酯-不耐受性患者使用已治疗与硬化有关的腹水[P.A.Greenberger等，N.Eng.Reg.Allergy Proc.，7(4)，343-345(Jul-Aug，1986)]。现已认识到心肌纤维化的进展对血管紧张素II和醛固酮的循环水平都是敏感的，且醛固酮拮抗剂螺内酯在动物模型中预防心肌纤维化，因此将醛固酮与过量的胶原沉着相联系[D.Klug等，Am.J.Cardiol.，71(3)，46A-54A(1993)]。已表明螺内酯防止动物模型中的纤维化，不论左心室肥大的进展如何和高血压的存在与否[C.G.Brilla等，J.Mol.Cell.Cardiol.，25(5)，563-575(1993)]。当口服钾离子补充剂或其它降低钾离子消耗的方案被认为不适当时，日剂量25mg至100mg的螺内酯用来治疗利尿剂诱发的血钾过少[内科医师工作手册(Physicians’Desk Reference)，46版，2153页，MedicalEconomics Company Inc.，Montvale，N.J.(1992)]。
先前的研究已表明通过基本上彻底阻断血管紧张素II的形成抑制ACE能抑制肾素-血管紧张素系统。很多ACE抑制剂已被临床用于控制高血压，副作用一般包括慢性咳嗽、皮疹、味觉丧失、蛋白尿和中性白细胞减少。
此外，虽然ACE抑制剂有效阻断血管紧张素II的形成，在某些心血管病患者中醛固酮水平没有得到很好的控制。例如，在接受卡托普利的高血压患者中获得持续ACE抑制，已观察到血浆醛固酮逐步回到基础水平[J.Staessen等，J.Endocrinol.，91，457-465(1981)]。对患有心肌梗塞接受左芬普利的患者观察到了类似的作用[C.Borghi等，J.Clin.Pharmacol.，33，40-45(1993)]。患有心血管病的患者也常常给予低钠离子饮食。此方案可以诱发醛固酮产生的增加并增加刺激醛固酮合成的血管紧张素受体。因此，低钠离子饮食的患者可以诱发醛固酮过多症症状，即使在某种ACE抑制剂的存在下。此现象已被命名为″醛固酮脱逸″。在两群大鼠的并排治疗中，一群用螺内酯皮下治疗而另一群用卡托普利治疗，发现螺内酯防止高血压大鼠群体中的纤维化[C.G.Brilla等，J.Mol.Cell.Cardiol.，25,563-575(1993)]。
另一系列的甾类醛固酮受体拮抗剂的例子是含环氧基团的螺内酯衍生物。例如，授予Grob等的美国专利No.4,559,332描述了含有9a，11a-环氧-的螺内酯衍生物作为醛固酮拮抗剂用作利尿剂。已评价了这些9a，11a-环氧甾类与螺内酯相比的内分泌作用[M.deGasparo等，J.Pharm.Exp.Ther.，240(2)，650-656(1987)]。
已研究了醛固酮拮抗剂ACE抑制剂的联合形式用于治疗心力衰竭。已知血浆醛固酮水平升高的患者死亡率较高，而当CHF因RAAS激活恶化时醛固酮水平升高。利尿剂的常规使用可进一步升高醛固酮水平。ACE抑制剂始终如一地抑制血管紧张素II的产生，但是只是发挥温和的且暂时的抗醛固酮作用。
已建议联合ACE抑制剂和螺内酯以提供对整个RAAS的实质性抑制。例如，在监控血压的同时已给不卧床的患者使用依那普利和螺内酯的联合形式[P.Poncelet等，Am.J.Cardiol.，65(2)，33K-35K(1990)]。在90位患者的研究中，使用卡托普利和螺内酯的联合形式，并发现其有效控制顽固性CHF，而不发生严重的血钾过高[U.Dahlstrom等，Am.J.Cardiol.，71，29A-33A(1993年1月21日)]。报告了螺内酯与ACE抑制剂共同给药对16位患有充血性心力衰竭患者中的13位是特别有效的[A.A.van Vliet等，Am.J.Cardiol.，71，21A-28A(1993年1月23日)]。已报告了接受螺内酯和ACE抑制剂依那普利共同治疗的患者的临床改善，虽然此报告提及需要对照实验来确定最低的有效剂量并确定什么样的患者在联合治疗中受益最大[F.Zannad，Am.J.Cardiol.，71(3)，34A-39A(1993)]。PCT申请No.US 96/01969公开于1996年8月15日，其描述了ACE抑制剂和副作用降低量的醛固酮拮抗剂即螺内酯的联合治疗，用来治疗充血性心力衰竭。PCT申请No.US96/01764公开于1996年8月15日描述了ACE抑制剂和副作用降低量的醛固酮拮抗剂即螺内酯及利尿剂如环利尿剂对充血性心力衰竭的联合治疗。
血管紧张素II受体拮抗剂和醛固酮受体拮抗剂的联合形式是已知的。例如，PCT申请No.US91/09362公开于1992年6月25日，描述了用含咪唑的血管紧张素II拮抗剂化合物和利尿剂如螺内酯的联合形式治疗高血压。PCT申请No.US96/09342公开于1996年12月19日，描述了用血管紧张素II拮抗剂和醛固酮受体拮抗剂螺内酯的联合形式治疗充血性心力衰竭。PCT申请No.US96/08823公开于1996年12月19日，描述了用血管紧张素II拮抗剂和醛固酮受体拮抗剂螺内酯的联合形式治疗心肌纤维化。PCT申请系列No.US96/09335公开与1996年12月19日，描述了用血管紧张素II拮抗剂和环氧-甾类醛固酮拮抗剂epoxymexrenone的联合形式治疗充血性心力衰竭。PCT申请系列No.US96/08709公开于1996年12月19日，描述了用血管紧张素II拮抗剂和环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂epoxymexrenone治疗心脏纤维化。
附图的描述附

图1-A显示了H晶形依匹乐酮的X射线粉末衍射图。
附图1-B显示了L晶形依匹乐酮的X射线粉末衍射图。
附图1-C显示了依匹乐酮的丁酮溶剂化物的X射线粉末衍射图。
附图2-A显示了由丁酮中直接结晶的非研磨L晶形的差示扫描量热法(DSC)热分析图。
附图2-B显示了将从丁酮中结晶的高纯度依匹乐酮获得的溶剂化物去溶剂化制备的非研磨L晶形的差示扫描量热法(DSC)热分析图。
附图2-C显示了通过从高纯度的依匹乐酮的丁酮的溶液中结晶溶剂化物，去溶剂化得到的L晶形及研磨所得L晶形的差示扫描量热法(DSC)热分析图。
附图2-D显示了将通过从适当溶剂中消化低纯度依匹乐酮获得的溶剂化物去溶剂化制备的非研磨H晶形的差示扫描量热法(DSC)热分析图。
附图3-A显示了H晶形依匹乐酮的红外光谱(弥散反射，DRIFTS)。
附图3-B显示了L晶形依匹乐酮的红外光谱(弥散反射，DRIFTS)。
附图3-C显示了依匹乐酮的丁酮溶剂化物的红外光谱(弥散反射，DRIFTS)。
附图3-D显示了存在于氯仿溶液中的依匹乐酮的红外光谱(弥散反射，DRIFTS)。
附图4显示了H晶形依匹乐酮的13C NMR光谱。
附图5显示了L晶形依匹乐酮的13C NMR光谱。
附图6-A显示了丁酮溶剂化物的热重量分析法分析图。
附图7显示了由丁酮中分离的4α，5α9α，11α-二环氧-17-羟基-3-氧代-17α-孕烷-7α，21-二甲酸7-甲酯，γ-内酯的结晶的X射线粉末衍射图。
附图8显示了从异丙醇中分离的11α，12α-环氧-17-羟基-3-氧代-17α-孕-4-烯-7α，21-二甲酸7-甲酯，γ-内酯结晶的X射线粉末衍射图。
附图9显示了从正丁醇中分离的17-羟基-3-氧代-17α-孕-4，9(11)-二烯-7α，21-二甲酸7-甲酯，γ内酯结晶的X射线粉末衍射图。
附图10显示了得自掺入了(a)0％，(b)1％，(c)3％和(d)5％二环氧化物的丁酮结晶的湿饼(丁酮溶剂化物)的X射线粉末衍射图。
附图11显示了得自掺入了(a)0％，(b)1％，(c)3％和(d)5％二环氧化物的丁酮结晶的干燥固体的X射线粉末衍射图。
附图12显示了掺入3％二环氧化物的从丁酮中结晶的干燥固体的X射线粉末衍射图，其中(a)干燥前没有研磨溶剂化物和(b)干燥前研磨溶剂化物。
附图13显示了掺入了(a)0％，(b)1％，(c)5％和(d)10％的11，12-二环氧化物的丁酮结晶的湿饼(丁酮溶剂化物)的X射线粉末衍射图。
附图14显示了得自掺入了(a)0％，(b)1％，(c)5％，和(d)10％11，12-二环氧化物的丁酮结晶的干燥固体的X射线粉末衍射图。
附图15显示了基于表7A所报告的数据，产物纯度、起始物纯度、冷却速度和终点温度的立方图。
附图16显示了用附图15的立方图绘制的半标准图以确定对终产物的纯度具有显著统计学作用的变量。
附图17是基于表7A报告的结果的相互作用图，显示了起始物纯度和冷却速度对终产物纯度的相互作用。
附图18显示了基于表7A的H晶形重量部分、起始物纯度、冷却速度和终点温度的立方图。
附图19显示了用附图18的立方图绘制的半标准图以确定对终产物的纯度具有显著统计学作用的变量。
附图20是基于表7A报告的结果的相互作用图，显示了起始物纯度和终点温度对终产物纯度的相互作用。
附图21显示了无定形依匹乐酮的X射线衍射图。
附图22显示了无定形依匹乐酮的DSC热分析图。
附图23总结了临床实验流程图。
附图24显示了不同治疗组的基础参数。
附图25显示了联合治疗参与的研究中对患者的并行药物处理。
附图26显示了与安慰剂比较，依匹乐酮(50mg/天)和螺内酯(25mg/天)治疗组中心脏舒张血压的变化。
附图27显示了与安慰剂比较，不同速度的依匹乐酮(25mg QD，25mg B1D，50mg QD，100mg QD)和螺内酯(25mg QD)给药时尿醛固酮水平。
附图28显示了与安慰剂比较，接受依匹乐酮(50mg/天)和螺内酯(25mg/天)治疗组的血浆肾素活性和醛固酮排泄。
附图29显示了与安慰剂比较，以不同速度进行依匹乐酮和螺内酯给药的所有患者BNP水平的变化。
附图30显示了与安慰剂比较，已不同速度进行依匹乐酮和螺内酯给药的高基础值BNP的患者的BNP水平的变化。
附图31显示了生物评价II的研究图表多中心，随机，双盲，安慰剂对照，双臂，平行组实验。
发明描述提供了通过包括用治疗有效量的血管紧张素转化酶(″ACE″)抑制剂和一起使用的治疗有效量的环氧-甾类醛固酮受体拮抗剂及可有可无的非醛固酮-受体-拮抗剂-型利尿剂或地高辛联合疗法，来治疗循环紊乱的方法，包括心血管紊乱如心力衰竭，肝硬化，高血压和充血性心力衰竭。优选利尿剂是环利尿剂。
短语″血管紧张素转化酶抑制剂″(″ACE抑制剂″)用来包括试剂或化合物，或两种或多种试剂或化合物的联合显示，其具有部分或完全阻断得自血管紧张素(“血管紧张素I”)的生理活性十肽向得自血管紧张素(“血管紧张素II”)的血管收缩性八肽的快速酶转化。血管紧张素II形成的阻断可通过除去血管紧张素II的主要作用，迅速影响流体和电解质平衡、血压和血容量的调节。在血管紧张素II的这些主要作用中包括通过直接收缩小动脉的平滑肌刺激肾上腺皮层的醛固酮合成和分泌并升高血压。
短语″醛固酮受体拮抗剂″包括试剂或化合物，或两种或多种这样的试剂或化合物的联合形式，在肾小管中，此试剂或化合物作为醛固酮自身作用的竞争性抑制剂结合醛固酮受体位点，以便调节受体-介导的醛固酮活性。此类醛固酮受体拮抗剂的典型是环氧-甾类化合物。
短语“环氧甾类醛固酮受体拮抗剂”用来包括一种或多种试剂或化合物，其特征是甾类核并具有与此核连接的环氧部分，而该试剂或化合物作为在受体位点的醛固酮自身作用的竞争性抑制剂结合醛固酮受体，以便调节受体介导的醛固酮活性。
短语“联合治疗”(或“共同治疗”)，在限定ACE抑制剂和醛固酮受体拮抗剂以及可有可无的非醛固酮受体拮抗剂型利尿剂或地高辛的使用中，其用来包括在方案中已连续的方式使用每种试剂，这样将提供药物联合的有利作用，并也用来包括以基本上同时的方式共同使用这些试剂，如在具有固定比例的这些活性物质的单胶囊中，或者在这些试剂的多个、分离的胶囊中。
短语″治疗有效″用来限定用于联合治疗中的每种试剂的量，其通过降低或预防，例如，充血性心力衰竭的恶化，达到对心脏机供血进行改善的目的，同时避免与每种试剂有典型联系的副作用。
短语″副作用降低量″，在联合治疗中对于治疗有效量的环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂，用来限定该试剂的量，或者该试剂的用量范围，其能改善心脏供血，同时降低或避免一种或多种醛固酮-拮抗剂引起的副作用，如血钾过高。完成有利地提高心脏供血的治疗目标，同时降低或避免副作用的环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂的量，应是基本上避免诱发多尿，即基本上无利尿作用的剂量。
短语″无利尿作用″量，特别是对环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂的量，用来限定该试剂的量，或该试剂的用量范围，其不引起利尿作用的实质性提高，即钠离子和水排泄的增加。
优选的联合治疗应基本上由两种或三种活性试剂，即ACE抑制剂、环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂和可有可无的非醛固酮受体拮抗剂型利尿剂或地高辛。对于ACE抑制剂和ALDO拮抗剂的联合形式，联合使用的试剂中血管紧张素转化酶与醛固酮受体拮抗剂重量比为约0.5∶1至约20∶1。这两种试剂(ACE抑制剂比ALDO拮抗剂)优选的范围应为1∶1至约15∶1，更优选的范围应为约1∶1至约5∶1，这最终依赖于ACE抑制剂和ALDO拮抗剂的选择。可有可无的利尿剂可以以约1mg至约200mg，优选约5mg至150mg的范围存在，这依赖于所选利尿剂和所治疗的疾病。
可以用于联合治疗的ACE抑制剂的实例示于下列四类中。
第一组ACE抑制剂由下列化合物组成AB-103、ancovenin、贝那普利拉、BRL-36378、BW-A575C、CGS-13928C、CL-242817、CV-5975、Equaten、EU-4865、EU-4867、EU-5476、foroxymithine、FPL 66564、FR-900456、Hoe-065、I5B2、吲哚普利、酮甲基脲类(ketomethylureas)、KRI-1177、KRI-1230、L-681176、赖苯普利、MCD、MDL-27088、MDL-27467A、moveltipril、MS41、尼克酰胺(nicotianamine)、喷托普利、phenacein、匹夫普利、伦唑普利、RG-5975、RG-6134、RG-6207、RGH-0399、ROO-911、RS-10085-197、RS-2039、RS 5139、RS 86127、RU-44403、S-8308、SA-291、螺普利拉、SQ-26900、SQ-28084、SQ-28370、SQ-28940、SQ-31440、Synecor、乌替普利、WF-10129、Wy-44221、Wy-44655、Y-23785、Yissum P-0154、扎普利和左芬普利。
有利的第二组ACE抑制剂由下列化合物组成Asahi BreweryAB47、alatriopril、BMS 182657、Asahi Chemical C-111、AsahiChemical C-112、Dainippon DU-1777、mixanpril、己基间苯二酚(Prentyl)、左芬普利拉和1-(-(1-羧基-6-(4-哌啶基)己基)氨基)-1-氧代丙基八氢-1H-吲哚-2-甲酸。
更有利的第三组ACE抑制剂由下列化合物组成BioprojectBPl.137、Chiesi CHF 1514、Fisons FPL-66564、伊屈普利、MarionMerrell Dow MDL-100240、培哚普利拉和Servier S-5590。
最有利的第四组ACE抑制剂阿拉普利、贝那普利、卡托普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、福辛普利拉、咪达普利、赖诺普利、倍哚普利、喹那普利、雷米普利、醋酸沙拉新、替莫普利、群多普利、西拉普利、美昔普利(moexipril)、喹那普利拉和螺普利。
这些ACE抑制剂中的很多种是可以商购的，特别是列于上述第四组的。例如，高度优选的ACE抑制剂，卡托普利，由E.R.Squibb &Sons，Inc.，Princeton，N.J.以商标″CAPOTEN″销售，其为片剂，规格为12.5mg、50mg和100mg每片。依那普利或依那普利马来酸盐和赖诺普利是两种更高度优选的ACE抑制剂，由Merck & Co，WestPoint，Pa.销售。依那普利以商标″VASOTEC″销售，其为片剂，规格为2.5mg、5mg、10mg和20mg每片。赖诺普利以商标″PRINIVIL″销售，其为片剂，规格为5mg、10mg、20mg和40mg每片。
用于ACE抑制剂和醛固酮受体拮抗剂的联合形式中的非醛固酮受体拮抗剂型利尿剂可以选自几种已知的类型，如噻嗪类和相关的磺酰胺类，节制钾离子的利尿剂，环利尿剂和有机汞利尿剂。
噻嗪类的实例为苄氟噻嗪，苄噻嗪，氯噻嗪，环噻嗪，氢氯噻嗪，氢氟噻嗪，甲氯噻嗪，聚噻嗪和三氯噻嗪。
与噻嗪类有关的磺酰胺类为氯噻酮，喹乙宗和美扎拉宗。
节制钾离子的利尿剂的实例为氨苯蝶啶和阿米洛利。
环利尿剂，即作用于肾汉勒氏环的上升枝的利尿剂的实例，为呋塞米和乙炔基丙烯酸(ethynacrylic acid)。
有机汞利尿剂的实例为巯汞林钠，乙氧汞林，普鲁卡因和汞撒利与茶硷。
适用于此联合治疗的环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂化合物由具有被环氧类型部分取代的甾核的化合物组成。术语“环氧型”部分用来包括在两个碳原子之间存在一个氧原子桥为特征的任何部分，其实例包括下列部分 环氧乙基1，3-环氧丙基 1，2-环氧丙基术语″甾(类)″，用于短语″环氧甾类″时，指环戊烯菲部分提供的核，具有常规的″A″、″B″、″C″和″D″环。此环氧型部分可以连接在环戊烯菲核的任何可连接或可取代的位置，即与甾核的环之一稠合或者可以取代在该环系的环原子上。短语“环氧甾类”用来包括在其上连接了一个或多个环氧型部分的甾核。
适用于联合甾类的环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂包括具有与甾核的“C”环稠合的环氧部分的一类化合物。特别优选的是20-螺烷化合物，其特征是存在9α，11α-取代的环氧部分。下表^Table 1，描述了一系列可以用于联合治疗的9α，11α-环氧-甾族化合物。表1中特别优选的化合物是化合物#1，其通用名为epoxymexrenone，USAN命名为依匹乐酮。环氧甾类可以通过美国专利4,559,332(Grob等，1985年12月17日授权)所述方法制备。
表1醛固酮受体拮抗剂化合物# 结构 名称 孕-4-烯-7，21-二甲酸，9，11-环氧-17-羟基-3-氧代-，γ-内酯，甲酯，(7α，11α，17α)- 孕-4-烯-7，21-二甲酸，9，11-环氧-17-羟基-3-氧代-，二甲酯，(7α，11α，17α)-
表1醛固酮受体拮抗剂化合物#结构名称 3′H-环丙烷并[6，7]孕-4，6-二烯-21-甲酸，9，11-环氧-6，7-二氢-17-羟基-3-氧代-，γ-内酯，(6β，7β，11β，17β)- 孕-4-烯-7，21-二甲酸，9，11-环氧-17-羟基-3-氧代-，7-(1-甲基乙基)酯，单钾盐，(7α，11α，17α)-
表1醛固酮受体拮抗剂化合物# 结构 名称 孕-4-烯-7，21-二甲酸，9，11-环氧-17-羟基-3-氧代-，7-甲基乙基)酯，单钾盐，(7α，11α，17α)- 3′H-环丙烷并[6，7]孕-1，4，6-三烯-21-甲酸，9，11-环氧-6，7-二氢-17-羟基-3-氧代-，γ-内酯(6α，7α，11α)-
表1醛固酮受体拮抗剂化合物# 结构 名称 3′H-环丙烷并[6，7]孕-4，6-二烯-21-甲酸，9，11-环氧-6，7-二氢-17-羟基-3-氧代-，甲酯，(6α，7α，17α)- 3′H-环丙烷并[6，7]孕-4，6-二烯-21-甲酸，9，11-环氧-6，7-二氢-17-羟基-3-氧代-，单钾盐，(6α，7α，11α，17α)-
表1醛固酮受体拮抗剂化合物# 结构名称 3′H-环丙烷并[6，7]孕-1，4，6-三烯-21-甲酸，9，11-环氧-6，7-二氢-17-羟基-3-氧代-，内酯(6α，7α，11α，17α)- 孕-4-烯-7，21-二甲酸，9，11-环氧-17-羟基-3-氧代-，γ-内酯，乙基酯，(7α，11α，17α)-
表1醛固酮受体拮抗剂化合物#结构名称 孕-4-烯-7，21-二甲酸，9，11-环氧-17-羟基-3-氧代-，γ-内酯，1-甲基乙基酯(7α，11α，17α)-
ACE抑制剂、醛固酮受体拮抗剂和可有可无的非醛固酮受体拮抗剂型利尿剂或地高辛的给药可以已分离的制剂连续进行，或可以以单个制剂或分离的制剂同时进行。给药途径可以通过口服，或静脉内、肌肉内或皮下注射。此制剂可以是快速浓注的形式，或者是水或非水等渗灭菌注射液或混悬剂。这些溶液或混悬剂可以用灭菌粉末或颗粒制备，其中含有一种或多种药用载体或稀释剂，或粘合剂如明胶或羟丙甲基纤维素以及一种或多种润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。
为了口服给药，药物组合物可以是，例如，片剂、胶囊、混悬剂或液体。此药物组合物优选制备成含特定量的活性组分的单位剂型。这样的单位剂型的实例为片剂或胶囊。根据所选择的特定ACE抑制剂，此ACE抑制剂可以以约1至200mg，优选约2至150mg的量存在。对哺乳动物来说，适宜的日剂量可以根据患者的病症或其它因素做很大的改变。根据所选择的特定ALDO拮抗剂化合物和此联合治疗所针对的特定疾病，ALDO拮抗剂可以已约1至400mg，优选约2至150mg的量存在。
对于需要预防、降低或治疗没有出现血钾过高的心血管病的疾病状态，例如，在此联合治疗中，ALDO拮抗剂组分，一般是依匹乐酮，将以约5mg至约200mg每剂量的用量范围存在。依匹乐酮优选的范围是约25mg至约50mg每剂量。更优选的范围是约10mg至15mg每剂量每天。
活性组分也可以以组合物的形式通过注射给药，例如，盐水、右旋糖和水可以作为适宜的载体。
用本发明的联合疗法治疗病症的剂量方案，按照多种因素加以选择，包括患者的类型、年龄、体重、性别和病症，疾病的严重程度，给药途径及所用的特定化合物，因此其可以有很大变化。
出于治疗目的，本发明的联合疗法的活性组分一般与一种或多种适于所指明的给药途径的辅剂。如果口服，这些组分可以与乳糖、蔗糖、淀粉、纤维素的烷酸酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，然后压片或包囊以便给药。非肠道给药制剂可以是水或非水等渗灭菌注射溶液或混悬剂的形式。这些溶液剂和混悬剂可以用灭菌粉末或颗粒制备，其中含有一种或多种上述口服给药制剂中所用载体或稀释剂。这些组分可以溶解于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苄醇、氯化钠和/或多种缓冲剂。其它辅剂和给药方式是制药领域熟知的。
用于本发明治疗方法的药物组合物可以以口服或静脉内给药方式给药。此联合疗法的口服给药是优选的。口服给药的剂量可以使用要求单一日剂量，或隔天单一剂量，或一整天内多次、间隔剂量的方案。组成此联合治疗的活性试剂可以同时给药，或者以混合剂型或者以计划基本上同时口服给药的分离剂型的形式。组成此联合治疗的活性试剂也可以连续给药，其中任一活性组分通过多步摄取的方案给药。因此，给药方案可要求活性试剂的连续给药，其中分离的活性试剂间隔摄入。多步摄入之间的时间间隔可以为几分钟至几小时，这依赖于每种活性试剂的性质，如效力、溶解度、生物利用度、血浆半衰期和该试剂的动力学特性，还依赖于患者的年龄和病症。此联合治疗的活性试剂，不论是同时、基本上同时或连续给药，都可以包括要求一种活性试剂通过口服途径而另一种活性试剂通过静脉内途径给药的方案。不论此联合治疗的活性试剂是通过口服还是通过静脉内途径，分离或一起，每种这样的活性试剂应含于药用赋形剂、稀释剂或其它制剂组分的适宜的药物制剂中。口服给药的含这些活性组分的适宜的药用制剂的实例给出如下。即使这些制剂在同一配方中一起列出了两种活性组分，将此配方用于含一种活性组分的制剂也是适当的。
实施例1通过将下表中的组分以指出的量一起过筛并然后混合，可以制备口服剂型。然后此剂型混合物可以置于硬明胶胶囊中。
组分 量卡托普利 62.0mg依匹乐酮 12.5mg硬脂酸镁 10mg乳糖 100mg
实施例1A通过将下表中的组分以指出的量一起过筛并然后混合，可以制备口服剂型。然后此制剂混合物可以置于硬明胶胶囊中。
组分 量卡托普利 62.0mg依匹乐酮 12.5mg呋塞米73.9mg硬脂酸镁 10mg乳糖 100mg实施例2通过用10％明胶溶液一起混合制粒，可以制备口服剂型。将湿颗粒过筛，干燥，与淀粉、滑石和硬脂酸混合，过筛并压制为片剂。
组分 量卡托普利 62.0mg依匹乐酮 12.5mg硫酸钙二水合物100mg蔗糖 15mg淀粉 8mg滑石 4mg硬脂酸2mg实施例2A通过用10％明胶溶液一起混合制粒，可以制备口服剂型。将湿颗粒过筛，干燥，与淀粉、滑石和硬脂酸混合，过筛并压制为片剂。
组分 量卡托普利 62.0mg依匹乐酮 12.5mg呋塞米73.9mg
硫酸钙二水合物100mg蔗糖 15mg淀粉 8mg滑石 4mg硬脂酸2mg实施例3通过将下表中的组分以指出的量一起过筛并然后混合，可以制备口服剂型。然后此制剂混合物可以置于硬明胶胶囊中。
组分 量依那普利 14.3mg依匹乐酮 12.5mg硬脂酸镁 10mg乳糖 100mg实施例3A通过将下表中的组分以指出的量一起过筛并然后混合，可以制备口服剂型。然后此制剂混合物可以置于硬明胶胶囊中。
组分 量依那普利 14.3mg依匹乐酮 12.5mg呋塞米73.9mg硬脂酸镁 10mg乳糖 100mg实施例4通过用10％明胶溶液一起混合制粒，可以制备口服剂型。将湿颗粒过筛，干燥，与淀粉、滑石和硬脂酸混合，过筛并压制为片剂。
组分 量依那普利 14.3mg依匹乐酮 12.5mg硫酸钙二水合物100mg蔗糖 15mg淀粉 8mg滑石 4mg硬脂酸2mg实施例4A通过用10％明胶溶液一起混合制粒，可以制备口服剂型。将湿颗粒过筛，干燥，与淀粉、滑石和硬脂酸混合，过筛并压制为片剂。
组分 量依那普利 14.3mg依匹乐酮 12.5mg呋塞米73.9mg硫酸钙二水合物100mg蔗糖 15mg淀粉 8mg滑石 4mg硬脂酸2mg治疗特定的病症和紊乱当出现醛固酮受体阻断剂的给药指征时，本发明的药物组合物是有用的。现已发现这些组合物在治疗心血管病中是特别有效的，如心力衰竭；高血压(特别是处理轻度至中度高血压)；与肝脏机能不全有关的水肿；心肌梗塞后；肝硬化；预防中风；及降低表现出心率加快的患者的心率。
为了治疗心力衰竭，此药物组合物优选提供依匹乐酮的日剂量为约25mg至约200mg，更优选约25mg至约75mg并更优选约50mg。约0.33至2.67mg/kg体重(基于平均体重约75kg)，优选约0.33至约1.00mg/kg体重并首选0.67mg/kg体重，可以是适当的。日剂量可以以每天一至四个剂量，优选每天一个剂量给药。
为了治疗高血压，此药物组合物优选提供依匹乐酮的日剂量为约50mg至约300mg，更优选约50mg至约150mg并更优选约100mg。日剂量约0.67至4.00mg/kg体重，优选约0.67至约2.00mg/kg体重并首选约1.33mg/kg体重，可以是适当的。日剂量可以以每天一至四个剂量，优选每天一个剂量给药。
为了治疗与肝功能不全有关的水肿，此药物组合物优选提供依匹乐酮的日剂量为约50mg至约500mg，更优选约100mg至400约mg并更优选约300mg。日剂量约0.67至6.67mg/kg体重，优选约1.33至约5.33mg/kg体重并首选约4.00mg/kg体重，可以是适当的。日剂量可以以每天一至四个剂量，优选每天一个剂量给药。
现已发现本发明的药物组合物作为醛固酮受体阻断剂在口服后给人提供了约12至24小时，优选约24小时的治疗作用。
总之，本发明的药物组合物提供了口服后足以在约12至24小时内，优选约24小时内足够引起血清肾素和醛固酮浓度升高的依匹乐酮日剂量。具体地讲，这些组合物提供了在至少约10％的此组合物摄入后，足以在约12至24小时内，优选约24小时内引起血清肾素浓度平均升高的依匹乐酮的日剂量。类似地，这些组合物提供了在至少约50％的此组合物摄入后，足以在约12至24小时内，优选约24小时内引起血清醛固酮浓度平均升高的依匹乐酮的日剂量。
现已发现本发明的药物组合物给人提供了在此组合物摄入后约12至24小时内，优选约24小时内足以引起尿log10(钠离子/钾离子)比例平均升高的依匹乐酮的日剂量。
现在还发现本发明的药物组合物给人提供了在至少5％的此组合物摄入后，在约12至24小时内，优选约24小时内足以引起收缩/舒张压降低的依匹乐酮的日剂量。
单位剂量此药物组合物的单位剂量一般含有，例如，10、20、25、37.5、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350或400mg的依匹乐酮。优选的单位剂型含约25、50、100或150mg的依匹乐酮。可以选择单位剂型以适应所需的给药频率，以便达到特定的日剂量。使用的此药物组合物的单位剂型的量和治疗此病症或紊乱的剂量方案，将依赖于多种因素，包括对象的年龄、体重、性别和病症，此病症或紊乱的严重程度，给药途径和频率，并因此可以变化很大。
但是，现已发现本发明药物组合物所需日剂量的效果，就半衰期所述组合物而言，对于每天一次给药和每天两次给药，似乎没有实质性差别。假设本发明组合物转运的依匹乐酮的量，足以抑制由于醛固酮结合醛固酮受体位点引起的拖延的基因反应。依匹乐酮阻断醛固酮结合防止了醛固酮诱发的基因产物合成，导致功能性醛固酮受体阻断期延长，这不需要持久的血浆依匹乐酮浓度。因此，为了便于给药，这些片剂优选每天给药一次。
药物组合物剂型本发明的药物组合物含有与一种或多种无毒、药用载体、赋形剂和/或辅剂(本文中统称为“载体物质”)混合的依匹乐酮。就与此组合物中其它组分相合而言，载体物质必须是可接受的。通过选择适当的载体物质和依匹乐酮的治疗有效量，本发明的药物组合物可以适于通过任何适宜的途径给药。例如，这些组合物可以制备为适于口服、静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内(IM)或直肠给药的形式。
因此，所用载体物质可以是固体或液体，或者二者兼而有之，并优选与此化合物配制为单位剂量组合物，例如，片剂，其中可以含有约1％至约95％，优选约10％至约75％，更优选约20％至约60％并更优选约20％至约40％(重量)的依匹乐酮。本发明的这样的药物组合物可以通过制药的任何熟知技术制备，基本上包括将各组分混合的步骤。
固体形式的环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂本发明方法包括使用治疗有效量的环氧-甾族醛固酮受体拮抗剂，特别是依匹乐酮，以其任何固体形式，或者作为一种或多种固体形式本身，或者以含一种或多种固体形式的依匹乐酮的药物组合物形式。这些新的固体形式包括但不限于溶剂化的结晶依匹乐酮、非溶剂化的结晶依匹乐酮和无定形依匹乐酮，及其任何可利用比例的混合物。
在一个实施方案中，按照本发明方法给药的依匹乐酮是依匹乐酮的非溶剂化晶形，其X射线粉末衍射图由1A给出如下(本文中称为“高熔点多形体”或“H晶形”)。
本发明的另一个实施方案，按照本发明方法给药的依匹乐酮是非溶剂化晶形的依匹乐酮，其X射线粉末衍射图由表1B给出如下(本文中称为″低熔点多形体″或″L晶形″)。
未配制的H晶形在较低温度下(即低于互变转变温度，如下文所述)表现出比，例如，未配制的L晶形快溶解速度(约高出30％)。当依匹乐酮在胃肠道中的溶解是依匹乐酮转运至靶细胞的控速步骤时，较快的溶解一般导致生物利用度的改善。因此，相对于L晶形来说，H晶形可以提供改善的生物利用度特性。此外，相对于具有较慢溶解速度的其它固体形式，选择具有较快溶解速度的依匹乐酮固体形式，同样为即释药物组合物配制过程中所用及制剂中所含的赋形剂的选择提供了较大的灵活性。
例如，与H晶形相比，L晶形在较低温度下(即低于互变转变温度，如下文所述)具有较大的物理稳定性。不需要使用特定加工或保存条件，且避免经常替换存货的依匹乐酮的固体形式如L晶形是需要的。例如，选择制备加工期间(如研磨依匹乐酮得到粒度减小而表面积增加的物质)物理性质稳定的依匹乐酮的固体形式可以避免需要特殊的加工条件和与此特殊加工条件有关的成本的增加。同样，选择在不同保存条件下(特别是考虑依匹乐酮产品有效期中不同的可能的保存条件)物理性质稳定的依匹乐酮固体形式，可以有助于避免可能导致产品损失或产物效果降低的多形体或依匹乐酮中的其它降解性变化。因此，选择具有较大物理稳定性的依匹乐酮固体形式如L晶形，较稳定性差的依匹乐酮形式而言，提供了深远的利益。
在本发明的另一个实施方案中，按照本发明方法给药的依匹乐酮是溶剂化形式的依匹乐酮结晶。优选，此溶剂化结晶基本上没有非药用的溶剂。由于H晶形和L晶形一般比该结晶的溶剂化物在室温和常压下物理性质更稳定，故用于这些组合物中的溶剂化晶形一般含有药用的沸点较高和/或能形成氢键的溶剂，例如，但不限于丁醇。据信溶剂化的晶形共同可以提供不同范围的溶解速度，且其中在胃肠道中依匹乐酮的溶解是控速步骤，将依匹乐酮转运到靶细胞时，生物利用度与H晶形和L晶形有关。
本发明的另一个实施方案中，按照本发明方法给药的依匹乐酮是无定形依匹乐酮。推测无定形依匹乐酮具有不同的溶解速度，且当依匹乐酮在胃肠道中的溶解是控速步骤，将依匹乐酮转运到靶细胞时，生物利用度与H晶形和L晶形有关。
在另一个实施方案中，按照本发明方法给药的依匹乐酮是一种联合形式，其中含有依匹乐酮的第一固体形式和第二固体形式。一般来说，依匹乐酮的第一和第二固体形式选自H晶形、L晶形、溶剂化的依匹乐酮和无定形依匹乐酮。一般来说，所述第一固体形式与所述第二固体形式的重量比优选至少约1∶9，更优选至少约1∶1，仍更优选至少约2∶1，还更优选至少约5∶1，并再更优选至少约9∶1。
在另一个实施方案中，在药物组合物中给药的依匹乐酮，其中全部用量的依匹乐酮含于此组合物中，以纯的H晶形存在。
在另一个实施方案中，在药物组合物中给药的依匹乐酮，其中全部用量的依匹乐酮含于此组合物中，以纯的L晶形存在。
在另一个实施方案中，在药物组合物中给药的依匹乐酮，其中全部用量的依匹乐酮含于此组合物中，以纯溶剂化结晶依匹乐酮的形式存在。
在另一个实施方案中，在药物组合物中给药的依匹乐酮，其中全部用量的依匹乐酮含于此组合物中，以无定形依匹乐酮的形式存在。
在另一个实施方案中，在药物组合物中给药的依匹乐酮，其中该组合物含有第一固体形式的依匹乐酮和第二固体形式的依匹乐酮，且所述第一和第二固体形式的依匹乐酮选自H晶形，L晶形，溶剂化的依匹乐酮和无定形依匹乐酮。一般来说，所述第一固体形式与所述第二固体形式的重量比优选至少约1∶9，优选约1∶1，更优选至少约2∶1，更优选至少约5∶1并更优选至少约9∶1。
在另一个实施方案中，依匹乐酮在药物组合物中给药，其中该组合物含有H晶形和L晶形。在此组合物中L晶形与H晶形的用量比一般是约1∶20至约20∶1。在另一个实施方案中，例如，此比例是约10∶1至约1∶10；约5∶1至约1∶5；约2∶1至约1∶2；或约1∶1。
虽然上述各方案中可以包括粒度范围很宽的依匹乐酮的固体形式的给药，但是已发现选择依匹乐酮固体形式的同时降低依匹乐酮粒度大小，可以改善未配制的依匹乐酮和含依匹乐酮固体形式的药物组合物的生物利用度。
在一个这样的方案中，未配制的依匹乐酮或者作为原料用于此药物组合物中的依匹乐酮的D90粒度一般小于约400微米，优选小于约200微米，更优选小于约150微米，更优选小于约100微米并仍更优选小于约90微米。在另一个实施方案中，D90粒度是约40微米至约100微米。在另一个实施方案中，D90粒度是约30微米至约50微米。在另一个实施方案中，D90粒度是约50微米至约150微米。在另一个实施方案中，D90粒度是约75微米至约125微米。
在另一个这样的实施方案中，未配制依匹乐酮或作为原料用于此药物组合物中的依匹乐酮的D90粒度是一般是小于约15微米，优选小于约1微米，更优选小于约800nm，更优选小于约600nm并仍更优选小于约400nm。在另一个实施方案中，D90粒度是约10nm至约1微米。在另一个实施方案中，D90粒度是约100nm至约800nm。在另一个实施方案中，D90粒度是约200nm至约600nm。在另一个实施方案中，D90粒度是约400nm至约800nm。
粒度小于约15微米的依匹乐酮固体形式可以按照本领域已知的适用的降低粒度的技术制备。这些技术包括但不限于如下专利所描述的方法美国专利5,145,684、5,318,767、5,384,124和5,747,001。将美国专利5,145,684、5,318,767、5,384,124和5,747,001清楚、详细、全部地引入作为参考。按照美国专利5,145,684的方法，例如，通过将依匹乐酮分散于液体分散介质中，并在研磨介质的存在下湿法研磨此混合物，制备适当粒度的颗粒。如果需要或有利地，此颗粒可以在表面改性剂的存在下降低粒度。
定义术语″无定形″用于依匹乐酮时指固态，其中此依匹乐酮分子以无序排列形式存在，并且不形成明显的晶格或单晶。当进行X射线粉末衍射时，无定形依匹乐酮不产生任何特征性结晶峰。
当在本申请中引用物质或溶液的“沸点”时，术语“沸点”指此物质或溶液在合适的处理条件下的沸点。
术语″晶形(晶形)″用于依匹乐酮指固态形式，其中依匹乐酮分子排列形成明显的晶格(i)含于明显的单晶，及(ii)当进行X射线辐射时产生衍射峰。
术语″结晶″用于本申请中，根据与依匹乐酮原料制备有关的合适的环境，可以指结晶和/或重结晶。
术语″蒸煮″指一种方法，其中在合适的处理条件下，将固体依匹乐酮在溶剂或溶剂混合物中的浆液在溶剂或溶剂混合物的沸点下加热。
术语″直接结晶″在本文中指直接从适宜的溶剂中结晶依匹乐酮，而不形成依匹乐酮的中间溶剂化结晶固体形式，且不去溶剂化。
术语″粒度″在本文中指通过本领域熟知的常规粒度检测技术检测的粒度，如激光散射、沉降区流动分段、光子关联分光术或轮盘离心。
术语″D90粒度″指通过这样的常规粒度检测技术检测的至少90％的该颗粒的粒度。
术语″纯度″指按照常规HPLC检测得到的依匹乐酮的化学纯度。在本文中，″低纯度依匹乐酮″一般指含有效量的H晶形生长促进剂和/或L晶形生长抑制剂的依匹乐酮。在本文中，″高纯度依匹乐酮″一般指不含或含小于有效量的H晶形生长促进剂和/或L晶形生长抑制剂的依匹乐酮。
术语″相纯度″指考虑到特定结晶的或无定形的依匹乐酮，如通过本文中描述的红外光谱分析方法所检测的依匹乐酮固体的固体纯度。
术语″XPRD″至X射线粉末衍射。
术语″Tm″指熔点。
固体形式的特性1、分子构象单晶X射线分析指出H晶形和L晶形之间依匹乐酮的分子构象不同，特别是甾环7-位的酯基的取向。该酯基的取向可以通过C8-C7-C23-02扭转角定义。
在H晶形晶格中，依匹乐酮分子采用的构象中在7位上酯的甲氧基与C-H键大约成直线，而羰基大约位于B-甾环的中心。在此构象中C8-C7-C23-02扭转角大约是-73.0°。在此取向中，酯基的羰基氧原子(01)与9，11-环氧环的氧原子(04)紧密接触。01-04的距离约2.97埃，其恰低于范德华接触距离3.0埃(假设氧原子的范德华半径是1.5埃)。
在L晶形晶格中，依匹乐酮分子采用的构象中相对于H晶形来说该酯基大约旋转了150°，且C8-C7-C23-02扭转角为约+76.9°。在此取向中，该酯的甲氧基直接面对A-甾环的4，5-烯烃部分。在此取向中，与H晶形确定的距离相比，该酯基的每个氧原子(01，02)和9，11-环氧环的氧原子之间的距离都加大。02-04距离约3.04埃，恰高于范德华接触距离。01-04距离约3.45埃。
目前通过单晶X射线衍射分析，在溶剂化晶形中依匹乐酮分子似乎采用一种L晶形为特征的构象。
2、X射线粉末衍射用Siemens D5000粉末衍射计或Inel Multipurpose衍射计分析依匹乐酮的多种晶形。对于Siemens D500粉末衍射计，原始数据由2至50的2q值检测，其间距为0.020而间距期为2秒。对于InelMultipurpose衍射计，将样品置于铝制样品夹持器，并在所有两个θ值同时收集30分钟的原始数据。
表1A，1B和1C根据2q值和强度分别给出了依匹乐酮晶形的H晶形(通过将蒸煮低纯度依匹乐酮获得的乙醇溶剂化物去溶剂化制备)、L晶形(通过将重结晶高纯度依匹乐酮获得的丁酮溶剂化物去溶剂化制备)和丁酮溶剂化物(通过在丁酮中室温浆液转化高纯度依匹乐酮制备)主要峰的重要参数(X-射线辐射，波长为1.54056埃)。
在H晶形和L晶形的衍射图中可能出现峰位置的较小的位移，这是结晶衍射面的间距不完美所至，而这又是H晶形和L晶形的制备途径造成的(即溶剂化物的去溶剂化)。此外，H晶形是从蒸煮粗品依匹乐酮制备的溶剂化物中分离的。此方法导致H晶形的整体化学纯度较低(约90％)。最后，预计由于在晶格的溶剂通道内溶剂分子的流动性增加，依匹乐酮的溶剂化形式的衍射峰位置出现了一些位移。
表1AH晶形数据
表1BL晶形数据
表1C丁酮数据
依匹乐酮的H晶形、L晶形和丁酮溶剂化物晶形的X射线衍射花样的实例图分别见图1-A、1-B和1-C。H晶形在7.0±0.2、8.3±0.2和12.0±0.2度2-θ显示了区别峰。L晶形在8.0±0.2、12.4±0.2、12.8±0.2和13.3±0.2度2-θ显示了区别峰。丁酮溶剂化晶形在7.6±0.2、7.8±0.2和13.6±0.2度2-θ显示了区别峰。
3、熔化/分解温度用TA Instruments 2920差示扫描量热计检测非溶剂化的依匹乐酮晶形的熔化和/或分解温度。将各样品(1-2mg)置于密封或非密封的铝锅中并以10℃/分钟的温度加热。熔化/分解吸热线的外推的开始至最大值确定熔化/分解范围。
非溶剂化的依匹乐酮晶形(H晶形和L晶形)的熔化伴有化学分解和晶格中所捕获溶剂的损失。熔化/分解温度也受分析前固体处理方法的影响。例如，通过在适当溶剂中直接结晶或者将在适当溶剂或溶剂的混合物中结晶高纯度依匹乐酮获得的溶剂化物去溶剂化制备的非研磨的L晶形(大约的D90粒度为约180-450微米)，一般熔点范围为约237-242℃。研磨的L晶形(大约的D90粒度约80-100微米)(通过从高纯度依匹乐酮在适当的溶剂或溶剂混合物中的溶液中结晶溶剂化物，将此溶剂化物去溶剂化得到L晶形，并研磨所得L晶形制备)，一般具有较低和较宽的熔化/分解温度范围，为约223-234℃。通过蒸煮低纯度依匹乐酮获得的溶剂化物去溶剂化制备的非研磨的H晶形(大约的D90粒度为约180-450微米)，一般具有较高的熔化/分解范围，为247-251℃。(a)直接从丁酮中结晶制备的非研磨的L晶形，(b)通过从丁酮中结晶高纯度依匹乐酮的溶剂化物去溶剂化制备的非研磨的L晶形，(c)通过研磨从丁酮中结晶高纯度依匹乐酮获得的去溶剂化的溶剂化物制备的L晶形和(d)通过将从丁酮中蒸煮低纯度依匹乐酮获得的溶剂化物去溶剂化制备的非研磨的H晶形的DSC热分析图的实例，分别在图2-A，2-B，2-C和2-D中给出。
用Perkin Elmer Pyris 1差示扫描量热计测定依匹乐酮的溶剂化形式的DSC热分析图。将各样品(1-10mg)置于非密封的铝锅中并以10℃/分钟加热。当从溶剂化物晶格中有溶剂损失时，在较低温度下的一个或多个吸热过程伴有焓的变化。最高温度吸热线(一个或多个)与L晶形或H晶形的依匹乐酮的熔化/分解有关。
4、红外吸收光谱用Nicolet DRIFT(弥散反射红外傅里叶变换)Magna系550光谱仪获得依匹乐酮(H晶形和L晶形)的非溶剂化形式的红外吸收光谱。使用Spectra-Tech收集器系统和微样品杯。在溴化钾中分析样品(5％)并从400-4000cm-1扫描。在稀氯仿溶液(3％)或在溶剂化物晶形中的依匹乐酮的红外吸收光谱用Bio-rad FTS-45光谱仪获得。用0.2mm路径长度带氯化钠盐板的溶液池分析氯仿溶液样品。溶剂化物FTIR光谱用IBM微-MIR(多功能内部反射比)辅助设备收集。从400-4000cm-1扫描样品。(a)H晶形、(b)L晶形、(c)丁酮溶剂化物和(d)在氯仿溶液中的依匹乐酮的红外吸收光谱的实例分别示于图3-A、3-B、3-C和3-D。
表2公开了H晶形、L晶形和丁酮溶剂化物晶形的依匹乐酮的示例性吸收带。还公开了氯仿溶液中的依匹乐酮的示例性吸收带作为对比。观察到了H晶形和L晶形或丁酮溶剂化物的差别，例如，在光谱的羰基区。H晶形酯羰基区在约1739cm-1拉伸，而L晶形和丁酮溶剂化物分别在约1724和1722cm-1具有相应的拉伸。在氯仿溶液中的依匹乐酮在约1727cm-1产生酯羰基的拉伸。H晶形和L晶形之间酯羰基的拉伸频率的变化反映了这两种晶形之间的酯基取向的变化。此外，在A甾环中共轭酮的酯的拉伸从H晶形或丁酮溶剂化物的约1664-1667cm-1位移至L晶形的约1665cm-1。在稀溶液中相应的羰基拉伸发生在约1665cm-1。
H晶形和L晶形的另一个差别见于C-H弯曲区。H晶形在约1399cm-1有吸收，这在L晶形、丁酮溶剂化物或在氯仿溶液中的依匹乐酮中没有观察到。此1399cm-1拉伸发生在CH2区，剪切邻近羰基的C2和C21亚甲基。
表2
5、核磁共振在31.94MHz获得13C NMR光谱。H晶形和L晶形依匹乐酮的13CNMR光谱的实例分别见图4和5。分析获得图4中的数据，H晶形依匹乐酮的相是不纯的并含有小量的L晶形依匹乐酮。H晶形通过碳共振在64.8ppm、24.7ppm和19.2ppm周围是辨别最清楚的。L晶形通过碳共振在67.1ppm和16.0ppm周围是辨别最清楚的。
6、热重量分析法用TA Instruments TGA 2950热重量分析仪进行溶剂化物的热重量分析。在氮气氛下，将样品置于铝锅中。起始温度为25℃，温度以约10℃/分钟的速度升高。丁酮溶剂化物的热重量分析法分析图的实例见附图6-A。
7、晶胞参数下表3A、3B和3C总结了测定的H晶形、L晶形和若干溶剂化晶形的晶胞参数。
表3A
表3B
1由于通道中溶剂分子的紊乱，溶剂化物分子不是彻底精制。
表3C
1由于通道中溶剂分子的紊乱，溶剂化物分子不是彻底精制。对依匹乐酮所选溶剂化晶形的其它信息在下表4中报告。上表3A中报告的丁酮溶剂化物的晶胞数据也代表了很大其它依匹乐酮结晶溶剂化物的晶胞参数。被测的大多数依匹乐酮结晶溶剂化物基本上彼此同构。虽然由于掺入溶剂分子的大小不同，一种溶剂化晶形与另一种在X射线粉末衍射峰中存在一些很小的位移，但是整个衍射花样基本上相同，而晶胞参数和分子位置对于大多数溶剂化物来说基本上一致。
表4
1定义为最终溶剂专利损失步骤推测的去溶剂化温度，通过热重量分析以10℃/分钟的加热速度在氮气氛下测定。但是去溶剂化温度可能受溶剂化物制备方法的影响。不同的方法可能产生不同数量的成核作用位点，该位点能在较低无定形引起溶剂化物的去溶剂化。
溶剂化物的晶胞由4个依匹乐酮分子组成。影响溶剂化物的依匹乐酮分子和溶剂分子在此晶胞中的化学计量也报告于上表4。H晶形晶胞由4个依匹乐酮分子组成。L晶形晶胞由两个依匹乐酮分子组成。当依匹乐酮分子晶形迁移并旋转以填补溶剂分子留下的空间时，溶剂化物晶胞在去溶剂化过程中转变为H晶形和/或L晶形晶胞。表4也报道了不同溶剂化物的去溶剂化温度。
8、不纯分子的结晶性质在溶剂化物的去溶剂化过程中，在依匹乐酮中所选择的不纯物可引起H晶形结晶的形成。特别是评价如下两种杂质分子的作用4α，5α9α，11α-二环氧-17-羟基-3-氧代-17a-孕烷-7α，21-二甲酸7-甲酯，γ-内酯3(″二环氧化物″)；和11α，12α-环氧-17-羟基-3-氧代-17a-孕-4-烯-7α，21-二甲酸7-甲酯，γ-内酯4(″11，12-环氧化物″)。 这些杂质分子对去溶剂化所得依匹乐酮晶形的作用在本申请的实施例中更详细地描述。
在17-羟基-3-氧代-17α-孕-4，9(11)-二烯-7α，21-二甲酸7-甲酯，γ-内酯5(″9，11-烯烃″)的单晶结构和H晶形中发生了类似的情况，假设在溶剂化物的去溶剂化期间9，11-烯烃也可引起H晶形的形成。
二环氧化物、11，12-烯烃和9，11-烯烃可以制备如下，例如，分别见Ng等的WO98/25948的实施例47C、47B和37H。
分离每种杂质化合物的单晶。分离的二环氧化物、11，12-环氧化物和9，11-烯烃晶形的代表性X射线粉末衍射花样分别见图7、8和10。每种杂质分子的X射线粉末衍射花样类似于H晶形的X射线粉末衍射花样，这表明H晶形和这三种杂质化合物具有相似的单晶结构。
也分离了每种杂质化合物的单晶并进行X射线结构测定以证实这三种化合物采用的单晶结构类似于H晶形。从丁酮中分离此二环氧化物的单晶。从异丙醇中分离11，12-环氧化物的单晶。从正丁醇中分离9，11-烯烃的单晶。测定的每种杂质化合物的晶形的结晶结构数据在表5中给出。H晶形、二环氧化物、11，12-环氧化物和9，11-相同晶形的所得晶系和晶胞参数基本上是相同的。
(a)表5
表5中报告的4种化合物结晶为相同的间隔基并具有相似的晶胞参数(即它们是同构的)。假设此二环氧化物、11，12-环氧化物和9，11-烯烃采用H晶形构象。对于每种杂质化合物来说分离H晶形填料(直接从溶液中)的相对容易，表明在此系列结构相似的化合物中H晶形晶格是稳定的填充状态。
依匹乐酮的制备用来制备本发明的新晶形的依匹乐酮原料可以用Ng等的WO97/21720和Ng等的WO98/25948中给出的方法制备，特别是在WO97/21720和WO98/25948中给出的方案1。
晶形的制备1、溶剂化晶形的制备依匹乐酮的溶剂化晶形可以通过从适宜的溶剂或适宜溶剂的混合物中结晶依匹乐酮来制备。适宜的溶剂或适宜溶剂的混合物一般包括有机溶剂或有机溶剂的混合物，其在升高的温度下溶解依匹乐酮和任何杂质，但是冷却时优先结晶此溶剂化物。室温下在这些溶剂或溶剂的混合物中依匹乐酮的溶解度一般为约5至约200mg/mL。此溶剂或溶剂混合物优选选自制备依匹乐酮原料的过程中已使用的溶剂，特别是如果在最终药物组合物中含依匹乐酮晶形，这些溶剂应是药用的。例如，得到含二氯甲烷的溶剂化物的含二氯甲烷的溶剂系统一般是不可取的。
所用各溶剂优选是可药用溶剂，特别是在″杂质残余溶剂指南″，人用药物注册技