专利名称：在对象体内诱导黑素生成的方法背景黑皮质素包括肽激素家族，它能通过与表皮中的黑皮质素-1受体(MC1R)相互作用诱导色素沉着。1在某些非人动物中从脑垂体的中间部，以及通过UV照射从人类皮肤的角化细胞中释放的主要色素激素是α黑素细胞刺激激素(α-MSH)。1这13种氨基酸肽与MC1R结合，诱导环状AMP-介导的信号转导，它导致了由DOPA前体合成黑色素聚合物。1两种类型的黑色素可以在人体中表达。综黑色色素真黑素被认为可以提供对来自太阳损伤的保护作用，而红色的，含硫的色素，褐黑素，通常是在浅肤色人群中表达的，据报导，这种色素对日光具有较差的晒成褐色的反应。2这些不太容易晒成褐色，容易被晒伤的群体通常具有MC1R基因缺陷3，并且一般被认为具有发生黑素瘤和非-黑素瘤皮肤癌的更高的风险。4，5以前业已报导了α-MSH的效力超强的衍生物，美拉诺坦(Nle4-D-Phe7-αMSH，本文又被称作″美拉诺坦-1″或″MTl″)，可以在人类志愿者体内诱导晒成褐色。6美拉诺坦包括两个氨基酸取代，并且在诸如青蛙皮肤生物实验或培养的人类角化细胞的实验系统中诱导色素沉着的能力比天然激素高大约100-1,000倍。7在人体中，美拉诺坦主要在皮肤中诱导真黑素合成，与它的晒成褐色作用吻合。尽管业已推测促黑激素能影响免疫学变化，9，10，11但所有以前的实验仅报导了微弱的副作用，如面部发红和短时间的GI紊乱，除非施用大于晒成褐色所需要的剂量。12有引人注目的事实表明，向黑色素的肽可以提供增强人类皮肤的黑色素色素沉着的潜力。可以用合成的MSH增强正常或浅肤色个体的皮肤色素沉着，以便保护它们免受日光辐射的伤害。若干研究业已表明，在接触阳光时倾向于很容易晒伤并且不容易晒成褐色的个体，具有出现非黑素瘤皮肤瘤和皮肤黑素瘤的较高的风险。16，17，18有确切的证据表明，UV辐射造成了人类的皮肤癌。由于臭氧层越来越多地受到破坏，并且皮肤癌的发病率和由此造成的死亡率日益增加，刺激皮肤自身的晒成褐色的″保护机制″的能力可以证明在光照保护方法方面是极其重要的。因此，本发明披露了用于在人类对象体内诱导黑素生成的方法，包括给血浆含量大大降低了的个体施用α-MSH类似物，令人吃惊的是，这样能导致所述对象体内黑色素密度水平的提高。通过提高对象体内的黑色素水平可以降低或避免在所述对象体内出现UV辐射诱导的皮肤损伤。另外，在本文所述方法中需要的较少数量的α-MSH类似物避免了与较大剂量相关的不希望的副作用。概述本文披露了用于在对象体内诱导黑素生成的方法，本发明的优点将在说明书的以下部分提供，并且在某种程度上通过所述说明可以看出，或通过实施下面所披露的各个方面而了解。下面所披露的优点可以通过在所附权利要求书中具体指出的元件和组合来实现和获得。可以理解的是，上述一般性说明和以下详细说明仅仅是典型的和解释性质的，而不是限制性的。附图的简要说明整合在本文中并且构成本说明书一部分的附图，说明了下文所披露的若干方面。在附图中，类似的附图标记表示相同的部件。图1表示来自用乙酸乙酯处理过的植入物的美拉诺坦的体外释放。图2表示来自由85∶15聚-(D，L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物制成的植入制剂的美拉诺坦的体外释放。图3表示由84∶16聚-(D，L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物组成的植入制剂的美拉诺坦的体外释放。图4表示来自本文所披露的研究1的药物动力学数据。
图5表示来自本文所披露的研究3的药物动力学数据。
图6表示来自本文所披露的研究4的药物动力学数据。
图7表示在本文所披露的研究1，2，3和4中对象体内黑色素密度变化(MD％)的比较。
详细说明在披露和说明本发明的化合物，组合物，和/或方法之前，应当理解的是，下面所披露的各个方面并不局限于特定的化合物，合成方法，或用途，因为，这些方面当然可以改变。还应当理解的是，本文所使用的术语仅仅是用于说明特定方面的，而不是用于限定的。
在本说明书中以及在以下权利要求书中，会提到多个名词，这些名词被定义为具有以下含义在本说明书中，除非本文有其他要求，术语″包括″，或它的变化形式，如″包含″或″具有″被理解为表示所提到的整数或步骤或成组的整数或步骤，而不排除任何其他的整数或步骤或成组的整数或步骤。
必须指出的是，在本说明书和所附权利要求书中，单数形式″一个″，和″这个″包括复数含义，除非文中明确指出了其他含义。因此，例如，在提到″一种药物载体″时，包括两种或两种以上这种载体的混合物，等等。
″任意的″或″选择性地″表示随后所提到的事件或场合可能出现或不出现，并且这种描述包括出现所述事件或场合的情形，以及不出现所述事件或场合的情形。
在本文中，范围可以表达为从″大约″一个具体的值，和/或到″大约″另一个具体的值。在表达这样的范围时，另一方面包括从一个具体的值和/或到另一个具体的值。类似地，当通过使用前缀“大约”将有关值表示为近似值时应当理解的是，所述特定值构成了另一方面。还应当理解的是，每一种范围的端点明显都与其他的端点相关，并且独立于其他端点。
在说明书和权利要求书中，在提到组合物或制品中的特定元素或成分按重量的份数时，表示组合物或制品中的元素或成分以及任何其他元素或成分之间的重量关系，用按重量的份数表示这种关系。因此，在包含2个重量份数的成分X和5个重量份数的成分Y的化合物中，X和Y的重量比为2∶5，并且无论该化合物中所包含的其他成分是多少，X和Y的重量比都是2∶5。
除非专门指出是相反的成分，成分的重量百分比是根据包含这种成分的制剂或组合物的总重量计算的。
″接触″表示至少一种物质与另一种物质的紧密的物理接触的情况。例如，接触可以包括使物质，如药物制剂与细胞接触。细胞可以与实验化合物，例如，α-MSH类似物接触，通过将所述制剂添加到培养基中(通过连续输液，通过快速浓注，或通过将培养基换成包含所述制剂的培养基)或通过将所述制剂添加到体内的细胞外流体中(通过局部输送，系统性输送，静脉注射，快速浓注，或连续输液)。与细胞或一组细胞接触的时间是由实验化合物以生理学有效的数量或以推测的生理学有效数量出现在培养基或包围细胞的细胞外液体中的时间确定的。
″预防″或″防止″表示给存在出现不希望的症状的风险的对象或系统施用组合物。所述症状可以包括疾病或发生疾病的倾向。预防包括从减轻症状的严重性到完全消除症状。
″有效的数量和时间″表示获得需要的结果所需要的治疗数量和时间，例如，在对象体内诱导黑素生成。
″诱导″表示启动需要的反应或在诱导步骤之前不存在的结果。术语″诱导″还包括术语″加强″。
术语″加强″表示在加强步骤之前将需要的反应维持在相同的水平或加强所述希望的反应一段时间。
本文所使用的术语″黑素生成″被定义为对象由黑色素-生成细胞，或黑素细胞产生黑色素的能力。
本文所使用的术语″同源脱敏作用″被定义为在连续接触刺激剂时细胞反应的抑制。
本文所使用的术语″表皮组织″包括对象的特定的皮肤。
本文披露了可用于，可组合用于，可用于制备的化合物，组合物，和成分，或所披露的方法的产物和组合物。本文披露了上述和其他材料，并且可以理解的是，当这些材料的联合、亚组、相互作用物，组等被公开，但这些化合物中的每一个和集合和排列组合的具体参考文献可以不用仔细地描述，而应理解为它们的每一个都被考虑在内并描述过。例如，如果披露并且讨论不同的α-MSH类似物和生物可降解聚合物的话，具体包括所述α-MSH类似物和生物可降解的聚合物的每一种以及各种组合和排列，除非指出了相反的情况。因此，如果披露了一种类型的分子A，B，和C，以及一种类型的分子D，E，和F，并且披露了A-D组合分子的例子，则即使没有分别进行引用，也包含每一种单独情况和总体组合情况。因此，在该例子中，涉及到了每一种组合A-E，A-F，B-D，B-E，B-F，C-D，C-E，和C-F，并且应当被视为是披露了A，B，和C；D，E，和F；以及典型的组合A-D。同样，专门涉及并且披露了任何亚型或亚型的组合。因此，例如，具体涉及到亚组A-E，B-F，和C-E，并且应当被视为是披露了A，B，和C；D，E，和F；以及典型的组合A-D。这一概念可应用于本说明书的所有方面，包括，但不局限于制备和使用所披露的组合物的方法的步骤。因此，如果存在可以实施的多个额外步骤的话，应当理解的是，所述每一个其他的步骤可以用所披露方法的任何特定的实施方案或实施方案的组合进行，并且涉及所述每一种组合，并且应当视为已被本发明公开。
本发明披露了用于在人类对象体内诱导黑素生成的方法。本发明的方法能能够提高黑色素产量，而又不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。这一目的是通过给所述对象施用α-MSH类似物，以便在对象的血浆中存在低浓度的所述α-MSH类似物而实现的。一般，需要较大剂量的α-MSH类似物来提高对象体内的黑色素产量。不过，在施用大剂量α-MSH类似物时，会出现不希望的副作用。通过提高对象体内的黑色素产量，可以防止在通常情况下容易出现这种损伤的对象体内出现UV辐射诱导的皮肤损伤。
一方面，所述在人类对象体内诱导黑素生成的方法包括给所述对象施用α-MSH类似物有效的数量和时间，诱导对象表皮组织中的黑素细胞生成黑素，而不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。
另一方面，本发明披露了用于在人类对象体内诱导黑素生成的方法，包括给所述对象施用有效数量的α-MSH类似物，通过诱导在对象表皮组织中的黑素细胞生成黑素，其中，所述α-MSH类似物的使用水平在对象血浆中不超过10ng/ml，维持至少24小时。
另一方面，本发明提供了用于在人类对象体内诱导黑素生成的组合物，其中，所述组合物给所述对象施用α-MSH类似物有效的数量和时间，通过诱导在对象表皮组织中的黑素细胞生成黑素，不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。
一方面，本发明还提供了用于在人类对象体内诱导黑素生成的组合物，其中，所述组合物给所述对象施用α-MSH类似物的水平在对象血浆中不超过10ng/ml，维持至少24小时。
术语″α-MSH类似物″在本文中被定义为α-MSH的衍生物，它表现出对黑皮质素-1受体(MC1R)具有刺激活性，该受体与α-MSH结合，以便启动黑色素在黑素细胞内的产生。所述衍生物包括这样的衍生物，其中(i)一个或多个氨基酸残基从天然α-MSH分子的N-末端，C-末端，或同时从两个末端缺失；和/或(ii)天然α-MSH分子的一个或多个氨基酸残基被其他天然的，非天然的，或合成的氨基酸残基所取代；和/或(iii)形成环状衍生物的分子内相互作用。
在本文所披露的方法中涉及任何α-MSH类似物的用途。业已合成了若干种衍生物。19一方面，本发明可以使用披露于美国专利号4,457,864、4,485,039、4,866,038、4,918,055、5,049,547、5,674,839和5,714,576，以及澳大利亚专利号597630和618733中的α-MSH类似物，以上专利文献被收作本文参考，这些文献披露了α-MSH类似物以及它的合成。
一方面，所述α-MSH类似物可以是披露于澳大利亚专利号597630中的化合物，选自(a)具有以下结构式的化合物Ac-Ser-Tyr-Ser-M-Gln-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2，其中，M是Met，Nle或Lys；和(b)具有以下结构式的化合物R1-W-X-Y-Z-R2其中R1是Ac-Gly-，Ac-Met-Glu，Ac-Nle-Glu-，或Ac-Tyr-Glu-；W是-His-或-D-His-；X是-Phe-，-D-Phe-，-Tyr-，-D-Tyr-，或-(pNO2)D-Phe7-；Y是-Arg-或-D-Arg-；Z是-Trp-或-D-Trp-；和R2是-NH2；-Gly-NH2；或-Gly-LyS-NH2。
另一方面，所述α-MSH类似物可选自环状类似物，它披露于澳大利亚专利号618733中，其中分子内相互作用(如二硫键或其他共价键)存在于(1)4号位置上的氨基酸残基和10或11号位置上的氨基酸残基之间，和/或(2)5号位置上的氨基酸残基和10或11号位置上的氨基酸残基之间。
所述α-MSH类似物可以是披露于美国专利号5,674,839中的线性类似物，选自下列一组Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2
Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Dpr-NH2Ac-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2。
所述α-MSH类似物还可以是披露于美国专利号5,674,839中的环状类似物，选自下列一组
在本文中，Ala＝丙氨酸，Arg＝精氨酸，Dab＝2，4-二氨基丁酸，Dpr＝2，3-二氨基丙酸，Glu＝谷氨酸，Gly＝甘氨酸，His＝组氨酸，Lys＝赖氨酸，Met＝甲硫氨酸，Nle＝正亮氨酸，Orn＝鸟氨酸，Phe＝苯丙氨酸，(pNO2)Phe＝对硝基苯丙氨酸，Plg＝苯基甘氨酸，Pro＝脯氨酸，Ser＝丝氨酸，Trp＝色氨酸，TrpFor＝N1甲酰-色氨酸，Tyr＝酪氨酸，Val＝缬氨酸。所有肽都是以如下方式书写的，使酰基-末端位于左侧，使氨基末端位于右侧；氨基酸前面的前缀″D″表示D-异构体结构，除非另有说明。所有氨基酸是L-异构体结构的。
一方面，所述α-MSH类似物可以是[D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Ser1，D-Phe7]-α-MSH，[D-Tyr2，D-Phe7]-α-MSH，[D-Ser3，D-Phe7]-α-MSH，[D-Met4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Glu5，D-Phe7]-α-MSH，[D-His6，D-Phe7]-α-MSH，[D-Phe7，D-Arg8]-α-MSH，[D-Phe7，D-Trp9]-α-MSH，[D-Phe7，D-Lys11]-α-MSH，[D-Phe-7，D-Pro12]-α-MSH，[D-Phe7，D-Val13]-α-MSH，[D-Ser1，Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Tyr2，Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Ser3，Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-Glu5，D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-His6，D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Arg8]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Trp9]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Lys11]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Pro12]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Val13]-α-MSH，
[Nle4，D-Phe7]-α-MSH4-10，[Nle4，D-Phe7]-α-MSH4-11，[D-Phe7]-α-MSH5-11，[Nle4，D-Tyr7]-α-MSH4-11，[(pNO2)D-Phe7]-α-MSH4-11，[Tyr4，D-Phe7]-α-MSH4-10，[Tyr4，D-Phe7]-α-MSH4-11，[Nle4]-α-MSH4-11，[Nle4，(pNO2)D-Phe7]-α-MSH4-11，[Nle4，D-His6]-α-MSH4-11，[Nle4，D-His6，D-Phe7]-α-MSH4-11，[Nle4，D-Arg8]-α-MSH4-11，[Nle4，D-Trp9]-α-MSH4-11，[Nle4，D-Phe7，D-Trp9]α-MSH4-11，[Nle4，D-Phe7]-α-MSH4-9，或-α-MSH4-9。
一方面，所述α-MSH类似物是[Nle4，D-Phe7]-α-MSH4-10，[Nle4，D-Phe7]-α-MSH4-11，[Nle4，D-Phe7，D-Trp9]-α-MSH4-11，或[Nle4，D-Phe7]-α-MSH4-9。
另一方面，所述α-MSH类似物是[Nle4，D-Phe7]-α-MSH。
可以理解的是，所述α-MSH类似物在特定场合下的实际优选用量可以根据被使用的特定化合物，所制备的特定组合物，使用方式，以及要治疗的特定部位和对象而改变。特定宿主的剂量可以使用常规方法确定，例如，通过主题化合物和已知制剂的不同活性的常规比较，例如，采用合适的常规药理学方法。确定药用化合物剂量的本领域的医生和药剂师在通过本文所披露的方法确定诱导黑素生成的剂量方面不存在任何问题。一方面，所述α-MSH类似物的施用数量能够诱导黑素生成，不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。另一方面，所述α-MSH类似物的使用水平在对象血浆中不超过10ng/ml，维持至少24小时。在其他各方面，所述α-MSH类似物的使用水平在对象血浆中不超过9ng/ml，8ng/ml，7ng/ml，6ng/ml，5ng/ml，4ng/ml，3ng/ml，2ng/ml，1ng/ml，0.5ng/ml，0.2ng/ml或0.1ng/ml，或以下，维持至少24小时。
可用于本发明的任何所述α-MSH类似物可以采用本领域所公知的多种施用或输送技术给对象施用。理想的是在对象血浆中维持低浓度的所述α-MSH类似物，以便在对象体内诱导黑素生成。因此，施用方式取决于要治疗的对象和所选择的α-MSH类似物。在各个方面，所述α-MSH类似物能够口服或肠胃外施用。本文所使用的术语″口服″包括通过消化道施用化合物。本文所使用的术语″肠胃外″包括除了口服之外的任何施用途径，所述α-MSH类似物通过以下途径被导入系统循环中，包括，但不局限于，静脉内，肌内，皮下，腹膜内，皮层内，眼内，吸入，直肠，阴道，经皮，局部，口腔，舌下，或粘膜施用。本文所使用的术语″粘膜″包括利用人体粘膜施用所述化合物的方法，如，但不局限于，口腔，鼻腔，齿龈，阴道，舌下，肺，或直肠组织。本文所使用的术语″经皮″包括所施用的化合物进入皮肤或穿过皮肤，所使用的制剂如，但不局限于，经皮制剂，口腔贴片，皮肤贴片，或经皮贴片。本文所使用的术语″局部″包括通过常规局部制剂使用，如霜剂，凝胶，或用于局部经皮输送的溶液和/或通过系统性和/或局部输送将溶液送到如，但不局限于眼睛，皮肤，直肠，和阴道的部位。
一方面，可以生产包括装置或含有α-MSH类似物的组合物的输送系统，该系统可以实施所述α-MSH类似物的控制释放，长期释放，改进释放，持续释放，脉冲释放或编程释放输送，以便在对象血浆中维持低浓度的α-MSH类似物。根据所选择的输送系统或制剂的组成或施用途径，药物或活性药用成分可以通过一次施用输送数小时，数周，或数月。药物输送装置包括，但不局限于泵，无针头注射器，定量吸入器等。有或没有渗透增强剂的经皮组合物包括，但不局限于经皮贴片，微型针头，和经皮制剂，它通过使用离子透入法，超声波导入，电穿孔，热穿孔，灌注，吸附和吸收实现药物输送。其他输送系统包括，但不局限于，生物可降解的或非-生物可降解的棒或其他形状的植入物，纤维，微粒，微球，微胶囊，纳米球，纳米胶囊，多孔硅纳米颗粒，原位凝胶化制剂，原位药团形成组合物，快速溶解片剂等，口腔贴片，薄膜，片剂，胶囊，渗透压驱动的制剂，液体填充的胶囊，脂质体和其他液体型组合物等，pegalation等，水凝胶制剂，乳液，微型乳剂，和悬浮液。
一方面，聚合物输送系统可以是微粒，包括，但不局限于微球，微胶囊，纳米球和纳米颗粒，包括生物可降解的聚合物赋形剂，非-生物可降解的聚合物赋形剂，或聚合物赋形剂的混合物，或所述聚合物输送系统可以是，但不局限于棒或其他各种形状的植入物，晶片，纤维，薄膜，原位形成的药团等，含有生物可降解的聚合物赋形剂，非-生物可降解的聚合物赋形剂，或其混合物。所述系统可以由单一的聚合物赋形剂或两种或两种以上聚合物赋形剂的混合物或掺杂物组成。
合适的聚合物赋形剂包括，但不局限于，聚(二烯)，如聚(丁二烯)等；聚(烯烃)，如聚乙烯，聚丙烯，等；聚(丙烯酸)类，如聚(丙烯酸)等；聚(异丁烯酸)，如聚(甲基丙烯酸甲酯)，和聚(羟乙基异丁烯酸酯)等；聚(乙烯醚)；聚(乙烯醇)；聚(乙烯基酮)；聚(乙烯基卤化物)，如聚(氯乙烯)等；聚(乙烯腈)，聚(乙烯酯)，如聚(乙酸乙烯酯)等；聚(乙烯基吡啶)，如聚(2-乙烯基吡啶)，聚(5-甲基-2-乙烯基吡啶)等；聚(苯乙烯)；聚(碳酸酯)；聚(酯)；聚(原酸酯)，包括共聚物；聚(酯酰胺)；聚(酸酐)；聚(氨基甲酸乙酯)；聚(酰胺)；纤维素醚，如甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素等；纤维素酯，如乙酸纤维素，乙酸邻苯二甲酸纤维素，乙酸纤维丁酸酯等；聚(糖类)，蛋白，明胶，淀粉，树胶，树脂等。这些材料可以单独使用，作为物理混合物(混合物)或作为共聚物。还涉及上面所列举的任何聚合物的衍生物。
一方面，所述输送系统的聚合物赋形剂包括生物相容性，非-生物可降解的聚合物，例如，硅酮，聚丙烯酸酯；乙烯乙酸乙烯酯的聚合物；酰基取代过的乙酸纤维素；不可降解的聚氨酯；聚苯乙烯；聚氯乙烯；聚氟乙烯；聚(乙烯基咪唑)；聚烯烃氯磺酸酯；聚环氧乙烷；或其混合物或共聚物。
另一方面，所述聚合物赋形剂包括生物相容性，生物可降解的聚合物例如，聚(丙交酯)；聚(乙交酯)；聚(丙交酯-共-乙交酯)；聚(乳酸)；聚(乙醇酸)；聚(乳酸-共-乙醇酸)；聚(己内酯)；聚(原酸酯)；聚(膦腈)；聚(羟基丁酸酯)或含有聚(羟基丁酸酯)的共聚物；聚(丙交酯-共-己内酯)；聚碳酸酯；聚酰胺酯；聚酸酐；聚(二?烷)；聚(亚烃基烷基化物)；聚乙二醇和聚原酸酯的共聚物；生物可降解的聚氨酯；聚(氨基酸)；聚醚酯；聚缩醛；聚氰基丙烯酸酯；聚(氧化乙烯)/聚(氧化丙烯)共聚物，或其混合物或共聚物。
一方面，所述输送系统包括植入物或棒，其中，所述植入物或棒包括生物可降解的聚合物，其中，所述α-MSH类似物被包埋在所述植入物或棒内。一方面，所述α-MSH类似物被包埋在由聚(丙交酯-共-乙交酯)，聚(丙交酯)，聚(乙交酯)，或其混合物组成的植入物或棒中。用于药物输送制剂的丙交酯/乙交酯聚合物通常是经由熔融聚合物化，通过打开丙交酯和乙交酯单体的环制备的。某些聚合物可以有或没有羧酸端基。当聚(丙交酯-共-乙交酯)，聚(丙交酯)，或聚(乙交酯)的端基不是羧酸，例如，酯时，所得到的聚合物在本文中被称作封闭的或封端。相反，非封闭的聚合物具有末端羧基。一方面，使用了线性丙交酯/乙交酯聚合物。不过，还可以使用星形聚合物。在某些方面，可以将高分子量聚合物用于医疗器械，例如，用于满足强度要求。在其他方面，可以将低分子量聚合物用于药物输送和疫苗输送产品，其中，吸收时间不如材料强度重要。所述聚合物的丙交酯部分具有非对称的碳。可以获得商业化的外消旋DL-，L-，和D-聚合物。L-聚合物结晶程度更高，并且比DL-聚合物吸收的更慢。除了包括乙交酯和DL-丙交酯或L-丙交酯的共聚物之外，还可以获得L-丙交酯和DL-丙交酯的共聚物。另外，可以获得丙交酯或乙交酯的均聚物。
当生物可降解的聚合物是聚(丙交酯-共-乙交酯)，聚(丙交酯)，或聚(乙交酯)时，所述聚合物中丙交酯和乙交酯的数量可以改变。一方面，所述生物可降解的聚合物含有0-100摩尔％，40-100摩尔％，50-100摩尔％，60-100摩尔％，70-100摩尔％，或80-100摩尔％丙交酯，以及0-100摩尔％，0-60摩尔％，10-40摩尔％，20-40摩尔％，或30-40摩尔％乙交酯，其中，所述丙交酯和乙交酯的数量为100摩尔％。一方面，所述生物可降解的聚合物可以是聚(丙交酯)，85∶15聚(丙交酯-共-乙交酯)，75∶25聚(丙交酯-共-乙交酯)，或65∶35聚(丙交酯-共-乙交酯)，其中所述比例为摩尔比。
一方面，当所述生物可降解的聚合物是聚(丙交酯-共-乙交酯)，聚(丙交酯)，或聚(乙交酯)时，所述聚合物的固有粘度为0.15-1.5dL/g，0.25-1.5dL/g，0.25-1.0dL/g，0.25-0.8dL/g，0.25-0.6dL/g，或0.25-0.4dL/g，该粘度是在30℃下以0.5g/dL的浓度在氯仿中测定的。
包埋或整合在生物可降解的聚合物中的α-MSH类似物的数量可以根据所选择的生物可降解的聚合物，胶囊化或整合技术，以及要输送到对象体内的α-MSH的数量而改变。一方面，包埋在微胶囊，植入物或棒中的-MSH类似物的数量可以占输送系统50％的重量百分比。在其他方面，包埋在微胶囊，植入物或棒中的α-MSH类似物的数量可以占输送系统5-60，10-50％，15-40％，或15-30％的重量百分比。
另一方面，当所述α-MSH类似物是通过其他输送系统，如经皮制剂输送时，所述α-MSH类似物在所述制剂中的用量为该制剂的0.001-10％，或0.05-5％的重量百分比。
其他可以药用的成分可以与所述α-MSH类似物组合包埋在或掺入所述输送系统。例如，可以药用的成分可以包括，但不局限于，脂肪酸，糖，盐，水溶性聚合物，如聚乙二醇，蛋白，多糖，或羧甲基纤维素，表面活性剂，增塑剂，高或低分子量成孔剂，如聚合物或盐或糖，或疏水性低分子量化合物，如胆固醇或蜡。另一方面，所述输送系统包括植入物或棒，其中，所述α-MSH类似物是[Nle4，D-Phe7]-α-MSH占植入物或棒的重量百分比为15％-45％，其中，所述棒或植入物包括聚(丙交酯)或聚(丙交酯-共-乙交酯)，例如，85∶15聚(丙交酯-共-乙交酯)。
本文所披露的任意一种输送系统可以采用本领域公知的技术施用。一方面，所述输送系统可以通过皮下途径给对象施用。在这一方面，施用时间可以根据所包埋的α-MSH类似物的数量以及所选择的生物可降解的聚合物而改变。一方面，所述输送系统是通过皮下途径给对象施用的，并且释放α-MSH类似物的时间为至少1，2，4，6，8，10或12天。一方面，所述输送系统能在对象体内释放所述α-MSH类似物长达三个月时间。在其他各方面，所述输送系统能在对象体内释放所述α-MSH类似物5天，10天，15天，20天，25天，或30天。
一方面，所述α-MSH类似物中的任意一种可以与至少一种可以药用的载体组合，以便产生药用组合物。药用组合物可以采用本领域公知的技术制备。一方面，通过将所述α-MSH类似物与可以药用的载体混合制备所述组合物。术语″混合″被定义为将两种成分混合在一起，以便不存在化学反应或物理相互作用。术语″混合″还包括所述α-MSH类似物和可以药用的载体之间的化学反应或物理相互作用。
可以药用的载体为本领域技术人员所公知。最常见的是用于给人类使用的标准载体，包括溶液，无菌水，盐水，以及生理pH下的缓冲溶液。
用于药物输送的分子可以配制在药用组合物中。药用组合物除了所选择的分子之外可以包括载体，增稠剂，稀释剂，缓冲剂，防腐剂，表面活性剂等。药用组合物还可以包括一种或多种活性成分，如抗微生物剂，抗炎剂，麻醉剂等。
施用的制剂包括无菌水或非水溶液，悬浮液，和乳液。非水载体的例子包括水，醇/水溶液，乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲的介质。如果需要同时用于所披露的组合物和方法时，肠胃外媒介物包括氯化钠溶液，Ringer′s葡萄糖，葡萄糖和氯化钠，乳酸Ringer′s，或固定油类。如果需要同时用于所披露的组合物和方法时，静脉内媒介物包括流体和养分补充剂，电解质补充剂(如基于Ringer′s葡萄糖)等。还可以使用防腐剂和其他添加剂，例如，抗微生物制剂，抗氧化剂，螯合剂，和惰性气体等。
用于局部施用的制剂可以包括软膏，洗液，霜剂，凝胶，滴剂，油膏，栓剂，喷雾剂，液体和粉末。可能必需或理想的常规药物载体，水，粉末或油基，增稠剂等。所述α-MSH类似物可以在无菌条件下与生理学上可以接受的载体和任何防腐剂，缓冲剂，推进剂，或吸收增强剂混合，可以根据要求或理想确定。有关局部使用的组合物的制备可以参见本文所引用的文献，例如，美国专利号5,990,091，WO98/00166，和WO 99/60164，例如，粘稠的组合物可以是霜剂或软膏，以及用于鼻腔和粘膜施用的组合物。
当所述组合物通过粘膜，眼睛，鼻腔内，或通过吸入施用时，所述制剂可以是滴剂，喷雾剂，气溶胶，或缓释制剂形式的。喷雾剂和气溶胶可以通过使用合适的分配器获得。缓释制剂可以是眼睛插入物，易腐蚀的微粒，膨胀的粘膜粘着性颗粒，pH敏感型微粒，纳米颗粒/胶乳系统，离子交换树脂和其他聚合物凝胶和植入物(Ocusert，AlzaCorp.，California；Joshi，A.，S.Ping and K.J.Himmelstein，专利申请号WO 91/19481)。这些系统能维持药物与吸收表面的长时间接触，防止被洗掉和非生产性的药物流失。
本文所披露的方法能在对象体内诱导黑素生成(即提高黑色素生产细胞的黑色素产量)。本发明的方法能够提高黑色素产量，而又不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。通过在对象血浆中维持低浓度的α-MSH类似物，可以提高黑色素产量，而又不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用，它能够避免由于接触UV辐射而对对象造成的皮肤损伤。一方面，本发明披露了用于在人类对象体内预防UV辐射诱导的皮肤损伤的方法，包括给所述对象施用α-MSH类似物，其中，所述α-MSH类似物的施用数量能够在对象体内诱导黑色素生成，而又不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。另一方面，本发明披露了用于在人类对象体内预防UV辐射诱导的皮肤损伤的方法，包括给所述对象施用α-MSH类似物，其中，所述α-MSH类似物的使用水平在对象血浆中不超过10ng/ml，维持至少24小时。
另一方面，本发明披露了用于在人类对象体内预防UV辐射诱导的皮肤损伤的组合物，其中，所述组合物给所述对象施用α-MSH类似物有效的数量和时间，通过在对象表皮组织中诱导黑素生成，不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。另一方面，本发明披露了用于在人类对象体内预防UV辐射诱导的皮肤损伤的组合物，其中，所述组合物给所述对象施用α-MSH类似物在对象血浆中的水平不超过10ng/ml，维持至少24小时。
一方面，表皮细胞可以与所述α-MSH类似物接触，以便预防UV辐射诱导的对象皮肤损伤。在这些方面，所述表皮细胞可以在体内，体外或离体与所述α-MSH类似物接触。
实施例提供以下实施例是为了给本领域普通技术提供有关本文所披露的并且要求保护的化合物，组合物，和方法如何制备和评估的全面的介绍和说明，纯粹是用于说明目的，而不是要限定本发明人所认为的本发明的范围。业已努力确保有关数字精确(例如，数量，温度等)，但是，还是会出现某些错误和误差。除非另有说明，份数是重量份数，温度是℃或是环境温度，而压力是大气压力或接近大气压力。存在反应条件的多种变化和组合，例如，成分浓度，成分混合物，需要的溶剂，溶剂混合物，温度，压力和其他反应范围和条件，可用于优化通过上述方法获得的产物纯度和产量。仅需要合理的和常规的实验来优化所述工艺条件。
I.制剂的制备例1-生产含有20mg美拉诺坦的植入物[Nle4-D-Phe7]-α-MSH，(美拉诺坦；MT-1)是与下面所披露的研究相关的药品。对4号和7号位置上的氨基酸的取代，使得该类似物的活性在一种或多种生物分析方法中比α-MSH的活性高10-1000倍。7用美拉诺坦和聚(DL-丙交酯)制备了研究3使用的植入制剂。聚(DL-丙交酯)的固有粘度为0.37dL/g。所述固有粘度是在30℃下，在氯仿中用0.5gm/dL的聚合物测定的。
植入物中需要的美拉诺坦含量为35wt％美拉诺坦肽。因此，使用研钵和研棒对美拉诺坦(36g，其中78％是美拉诺坦肽)和聚(DL-丙交酯)(44g)进行干燥混合，以便形成混合的粉末。
然后，将Tinius Olsen(MP 600)熔融物塑性计用于熔融挤出混合的粉末。所述Tinius Olsen是钢铁的实体块，直径大约为80mm，高/长为大约160mm，中空型芯的直径为大约13mm。所述核心的排泄口具有一个肩部，使得可以根据需要的挤出的棒的直径使用不同尺寸的“模具”。对该处理来说，使用3.9-mm模具(这意味着模具核心的直径为3.9mm。Tinius Olsen的主要模块具有被绝缘体包围的加热带，以及使得Tinius Olsen能够加热到预期温度的护罩。用热电偶测量所述模块的温度。然后控制系统使用所述热电偶值启动或关闭所述加热带。在所述挤压过程中，所述加热带关闭和开启，以便保持所述预期的温度。一旦将混合物加载到Tinius Olsen中，将填充的棒放置在所述核心或Tinius Olsen中，以便压缩所述混合物。根据需要将重物放置在所述填充的棒的末端。更具体地讲，将Tinius Olsen平衡到90℃。在熔融物融化时使用的压缩载荷为3,700克。混合物融化的平衡时间持续大约15分钟。将柱塞从排泄部位取出，并且施加12，360克的挤压载荷，它包括所述压缩载荷。然后形成大约140-180cm的挤压棒。
选择10个样品(各自大约55mg)进行效能试验(美拉诺坦含量)。所述效能试验确定了挤压的棒含有34.19wt％美拉诺坦。在了解了美拉诺坦含量之后，将挤压的棒切割成能够在每一个植入物中提供大约20mg美拉诺坦肽的长度。
然后将大约30mL的乙酸乙酯放入小烧杯中。将每一个植入物固定在针尖固定装置上，并且浸入乙酸乙酯大约5秒钟。然后在室温下“干燥”所述植入物。
用聚(DL-丙交酯)按照上述方法制备的类似的美拉诺坦植入物的体外释放特征显示于图1。美拉诺坦含量为36wt％。释放数据表明，植入物能释放美拉诺坦长达21天时间。
例2-用不同的丙交酯/乙交酯聚合物制备植入物大体上按例1所述方法制备若干种美拉诺坦植入物。不过，植入物的特性根据以下因素而改变●聚合物的丙交酯/乙交酯比例●聚合物端基●聚合物固有粘度●美拉诺坦含量表1列举了制备的不同植入物的典型例子。
表1
a溶剂处理总之，上述植入物的聚合物的范围从均聚物(聚(DL-丙交酯))到丙交酯和乙交酯的共聚物。因此，使用了含有100摩尔％丙交酯-65摩尔％丙交酯的聚合物。所述聚合物的端基是封端的(封闭的)或是合成的，以便具有羧酸端基。所述聚合物的固有粘度为0.36-1.09dL/g。所述固有粘度是使用以0.5gm/dL的浓度溶解在氯仿中的聚合物测定的。所述粘度测定是在30℃下进行的。植入物的美拉诺坦含量为15-45wt％。用85∶15聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)制备的美拉诺坦植入物在处理4和5中的典型的体外释放特征如图2所示。
例3-制备含有5mg的美拉诺坦的植入物用美拉诺坦和具有羧酸端基的84∶16聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)制备植入物制剂。聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)的固有粘度为0.29dL/g。固有粘度是在30℃下用溶解在氯仿中的浓度为0.5gm/dL的聚合物测定的。
所述植入物中希望的美拉诺坦含量为17.3wt％美拉诺坦肽。因此，使用研钵和研棒对美拉诺坦(3g)和聚(DL-丙交酯)(12g)进行干燥混合。3gm的美拉诺坦包括大约88％的美拉诺坦肽。
然后将Tinius Olsen(MP 600)熔融物塑性计用于熔融挤出混合的粉末。Tinius Olsen是钢铁实体块，直径为大约80mm，高/长为大约160mm，具有直径为大约13mm的中空型核心。所述核心的出口具有肩部，它允许根据需要的挤压的棒的直径使用不同大小的“模具”。对该处理来说，使用1.5-mm模具，这意味着模具核心的直径为1.5mm。Tinius Olsen的主要模块具有绝缘封装的加热带，以及可以将TiniusOlsen加热到预期温度的护罩。使用热电偶测量所述模块的温度。然后控制系统利用所述热电偶值开启或关闭所述加热带。在整个挤压过程中，加热带会关闭和开启，以便保持预期的温度。一旦将所述混合物加载到Tinius Olsen中，将填充的棒放置在所述核心或TiniusOlsen上，以便压缩所述混合物。根据需要将重物放置在填充的棒的末端。更具体地讲，将Tinius Olsen平衡到87℃。在所述混合物融化时使用的压缩载荷为3,700克。混合物融化的平衡时间持续大约15分钟。将所述柱塞从排泄部位取出，并且施加10,300克的挤压载荷(包括压缩载荷)。然后形成了大约600-700cm的挤压的棒。
选择10个样品(每个样品大约30mg)进行效能试验(美拉诺坦含量)。所述效能试验确定了挤压的棒含有16.08wt％美拉诺坦。在了解了美拉诺坦含量之后，将挤压的棒切割成能够在每一个植入物中提供大约5mg美拉诺坦肽的长度。用84∶16聚(DL-丙交酯-共-乙交酯))通过上述生产方法制备的类似的美拉诺坦植入物的体外释放特征如图3所示。美拉诺坦含量为16wt％。这些释放数据表明，所述植入物能释放美拉诺坦至少21天时间。
II.体内试验例4-临床试验.
使用不同方法输送美拉诺坦(MT-1)进行四种临床试验。在第一种临床试验中，用16位(后来减少到15位)人类对象进行了双盲，随机化，安慰剂-对照的临床试验。每天以固定的剂量皮下施用美拉诺坦(MT-1)，给12位对象连续施用10天，其余的4位对象施用安慰剂(盐水)。一位对象(美拉诺坦)没有完成试验过程。在所有11位完成方案的对象中测定平均本底黑色素密度(MD)和MD变化(％)。在第二种临床试验中，用81位(后来减少到79位)人类对象进行了双盲，随机化，安慰剂-对照的临床试验。每天以固定的剂量皮下施用美拉诺坦(MT-1)，在70天内给59位对象连续施用30天，其余的20位对象施用安慰剂(盐水)。有14位对象没有完成试验过程(12位美拉诺坦对象和2位安慰剂对象)。在所有47位完成方案的对象中测定平均本底黑色素密度(MD)和MD变化(％)。在第三种临床试验中，用3位人类对象进行了单一储库控制释放制剂的剂量升级研究。仅在第一天以单一的皮下控制的释放剂量形式施用美拉诺坦(MT-1)。在这三位对象中测定平均本底黑色素密度(MD)和MD变化(％)。在第四种临床试验中，用12位人类对象进行单一储库控制释放制剂的剂量升级研究。仅在第一天以单一的皮下控制的释放剂量形式施用美拉诺坦(MT-1)。在这12位对象中测定平均本底黑色素密度(MD)和MD变化(％)。
以上试验的结果表明，研究3和4的对象的MD变化(％)明显比研究1和2的对象的变化大和快，尽管事实上研究3和4的对象与研究1和2的对象相比总体上施用了明显更少量的美拉诺坦。
a.主要目的研究1本研究的主要目的之一是确定给健康的成年对象连续10天皮下注射0.16mg/kg/天的美拉诺坦的药物动力学。
研究2本研究的主要目的之一是比较所有对象的阳光晒伤细胞的发病率(根据凋亡的细胞确定)，是在对小面积的皮肤(2×2cm)进行受控制的阳光辐射(3×MED)之后24小时作为本底，以及用美拉诺坦或安慰剂开始治疗90天之后的结果进行比较。
研究3和4
本研究的主要目的之一是加大通过皮下注射给健康的成年对象施用一个储库注射的美拉诺坦增加剂量的药物动力学。
b.次要目的为了确定施用美拉诺坦(MT-1)的安全性和耐受力(由WHO CTC确定的未出现≥3级的任何毒性来确定)，连续10天每天给白种人对象皮下液体注射固定剂量的0.16mg/Kg/天(研究1)，或3次每月疗程(10天；一周5天×2周)给白种人对象皮下注射固定剂量的美拉诺坦(MT-1)0.16mg/Kg/天(研究2)，或以单一储库注射的形式给白种人对象注射美拉诺坦(MT-1)(研究3和4)。
c.主要效力目标(对所有四个研究而言)晒成褐色的程度为了比较8个解剖学部位的晒成褐色的程度(通过一系列的反射变化确定)，在白种人对象开始施用美拉诺坦和安慰剂之后的预定时间进行。
A.试验方案1.研究群体的选择目标群体是男性和女性白种人对象。在参与本研究之前，每一个对象必须满足以下包含和排除标准。对于所进行的三项研究来说，所述包含和排除标准是类似的。
包含标准■男性和女性白种人对象(根据Fitzpatrick评分的皮肤类型为I-IV16)■年龄18-65岁■体重≤85Kg■在筛选时确定根据病史(包括家族病史)，物理检查，血液学，血浆生物化学和生命特征(血压，脉搏频率)判断，不存在显著的异常症状■在进行任何研究特有的方法之前，要提供书面的知情同意文件2.研究治疗
2.1研究治疗的说明对于研究1和2来说，美拉诺坦提供在一次性使用的无菌6mL小瓶中，每一个小瓶包含溶解在1mL注射用无菌盐水中的16mg/mL的美拉诺坦。安慰剂小瓶是相同的，并且装有1mL注射用无菌盐水。对于研究3和4来说，美拉诺坦是以生物可降解的棒的形式提供的。
2.2研究治疗的剂量和施用对于研究1来说活性成分美拉诺坦用一次性使用的，无菌6mL小瓶提供，每一个小瓶装有溶解在1mL无菌盐水中的16mg(±5％)的美拉诺坦。通过皮下注射给每一个接受美拉诺坦治疗的对象施用0.16mg/kg/天的剂量，该剂量相当于剂量体积为0.01mL/kg/天。
安慰剂安慰剂是以一次性使用的，无菌6mL小瓶形式提供的，装有1mL无菌盐水。在每一次施用时皮下注射的剂量体积为0.01mL/kg/天。
所述治疗是通过皮下注射进行的，使用25号针头(16mm长)和1mL注射器，每天在腹部注射，连续注射10天。在检查时测定每一个对象的体重，并且将相同的体重用于随后治疗的所有的剂量计算。每一个对象总共接受1.6mg/kg的美拉诺坦，相当于对于体重70kg的人来说施用了112mg的美拉诺坦。
对于研究2来说活性成分美拉诺坦以一次性使用的，无菌6mL小瓶形式提供，各自装有溶解在1mL无菌盐水中的16mg(±5％)的美拉诺坦。通过皮下注射给接受美拉诺坦治疗的每一个对象施用0.16mg/kg/天的剂量，该剂量相当于剂量体积为0.01mL/kg/天。
安慰剂安慰剂是以一次性使用的，装有1mL无菌盐水的无菌6mL小瓶形式提供的。在每一次施用时皮下注射的剂量体积为0.01mL/kg/天。
所述治疗是通过皮下注射进行的，使用25号针头(16mm长)和1mL注射器，每天在腹部注射，每周注射5次，共持续2周。在检查时测定每一个对象的体重，并且将相同的体重用于前10天治疗的所有剂量的计算。在第29-40天和第57-66天重复所述循环治疗。在每一次用药开始时重新称对象的体重，以便计算剂量。药物尽可能地在每天的相同时间施用(+/-4小时)。每个对象总共接受4.8mg/kg的美拉诺坦，对于70kg体重的人来说相当于336mg的美拉诺坦。
对于研究3来说活性成分美拉诺坦是以含有20mg(±10％)的美拉诺坦的生物可降解的聚(DL-丙交酯)棒的形式提供的。通过皮下植入给每一个对象施用单一剂量的20mg。
所述治疗是通过皮下植入进行的，使用套针输送装置(5.2mm ID×70mm长)，仅在第一天在腹部植入。每个对象总共接受0.29mg/kg的美拉诺坦，对于70kg体重的人来说相当于20mg的美拉诺坦。
对于研究4来说活性成分美拉诺坦是以含有5mg(±10％)的美拉诺坦的生物可降解的聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)棒的形式提供的。通过皮下植入给每一个对象施用10和20mg的剂量。
所述治疗是通过皮下植入进行的，使用SURFLO?I.V护罩，具有16号针头，仅在第一天在上臂内侧植入。
2.3使用防晒产品建议所有对象在他们计划长期间地接受日晒的任何时候在裸露的皮肤上涂敷SPF 25+防晒霜。正常的日常活动不需要额外的注意。
3.研究方法3.1主要目标的测量对于研究1来说在本研究的第1天和第10天处理之后的0小时(治疗时间)和0.5，1，2，3，4，6，8，10，16和24小时进行血液采集，以便进行施用药物之后的药物动力学分析。使用得到确定的LC/MS/MS方法分析对象血浆样品的美拉诺坦。
对于研究2来说
在第7至第2天，确定对象的MED(最小红斑剂量)，接受的受控制的UV辐射为它们的MED的3.0倍，并且在次日采集皮肤起泡的生物活组织检查样本。在第89天，对象接受的受控制的UV辐射为它们的MED的3.0倍，并且在次日采集皮肤起泡的生物活组织检查样本。计算表皮的太阳灼伤(凋亡)细胞/100个细胞的数量的变化，所述灼伤是由于从研究阶段开始到结束进行的3次MED处理造成的，通过光学显微镜测定。
对于研究3来说在植入之后的第0天(治疗时间)和第2，4，6，8，10，12，15，18，21和25天进行血液采集，以便进行施用药物之后的药物动力学分析。使用得到确定的LC/MS/MS方法分析对象血浆样品的美拉诺坦。
对于研究4来说在植入之后的第0天(治疗时间)和第1，2，3，4，6，8，10，12，15，20和25天进行血液采集，以便进行施用药物之后的药物动力学分析。使用得到确定的LC/MS/MS方法分析对象血浆样品的美拉诺坦。
3.2主要效力变量的测量皮肤反射-晒成褐色的程度和黑色素密度(MD)对于研究1来说在治疗之前(第0天)，第9天和第30天，通过非-侵入性定量皮肤色度(反射)读数测量对象的皮肤色素沉着。使用Minolta 508i分光光度计记录八个皮肤部位(前额，面颊，颈部，肩胛骨，上臂内侧，前臂，腹部和小腿)在400-700nm波长范围内以20-nm的光波段为间隔测定皮肤的反射。对所述分光光度计进行编程，以便在每一阶段在每一个部位进行三次独立的测量，从而使误差最小化。提供每一个对象的本底的曲线图，并且在该曲线图上记录所有八个皮肤位点在该本底曲线图上的测量位置。随后进行重复测量，参考最初的曲线图进行，以便确保它们是在尽可能地接近每一个皮肤位点的最初测量的位置上进行。
在每一次随访时，获得并且记录了在400和420nm波长下在每一个部位三次独立测量的反射值的平均数。用420nm波长下的反射测量值减去400nm波长下的反射值，可以获得对皮肤的黑色素含量的合理的预测，参见Dwyer等。28所使用的公式为MD＝100×(0.035307+0.009974(R420-R400))其中，MD是含有黑色素的皮肤表皮的估算的百分比，R400和R420表示分别在400nm和420nm波长下的反射值。所述MD测量值是在分析阶段计算的。
对于研究2来说在处理之前(第0天)，第12，第30，第40，第60，和第90天，通过非-入侵性定量皮肤色度(反射)读数测量对象的皮肤色素沉着。使用Minolta 508i分光光度计记录八个皮肤部位(前额，面颊，颈部，肩胛骨，上臂内侧，前臂，腹部和小腿)在400-700nm波长范围内以20-nm的光波段为间隔测定皮肤的反射。对所述分光光度计进行编程，以便在每一阶段在每一个部位进行三次独立的测量，从而使误差最小化。提供每一个对象的本底的曲线图，并且在该曲线图上记录所有八个皮肤位点在该本底曲线图上的测量位置。随后进行重复测量，参考最初的曲线图进行，以便确保它们是在尽可能接近每一个皮肤位点的最初测量的位置上进行。
在每一次随访时，获得并且记录了在400和420nm波长下在每一个部位三次独立测量的反射值的平均值。用420nm波长下的反射测量值减去400nm波长下的反射值，可以获得对皮肤的黑色素含量的合理的预测，参见Dwyer等。28所使用的公式为MD＝100×(0.035307+0.009974(R420-R400))其中，MD是含有黑色素的皮肤表皮的估算的百分比，R400和R420表示分别在400nm和420nm波长下的反射值。所述MD测量值是在分析阶段计算的。
对于研究3来说在处理之前(第0天)，第10，第21，第30，和第60天，通过非-入侵性定量皮肤色度(反射)读数测量对象的皮肤色素沉着。使用Minolta 508i分光光度计记录八个皮肤部位(前额，面颊，颈部，肩胛骨，上臂内侧，前臂，腹部和小腿)在400-700nm波长范围内以20-nm的光波段为间隔测定皮肤的反射。对所述分光光度计进行编程，以便在每一阶段在每一个部位进行三次独立的测量，从而使误差最小化。提供每一个对象的本底的曲线图，并且在该曲线图上记录所有八个皮肤位点在该本底曲线图上的测量位置。随后进行重复测量，参考最初的曲线图进行，以便确保它们是在尽可能性地接近每一个皮肤位点的最初测量的位置上进行。
在每一次随访时，获得并且记录了在400和420nm波长下在每一个部位三次独立测量的反射值的平均值。用420nm波长下的反射测量值减去400nm波长下的反射值，可以获得对皮肤的黑色素含量的合理的预测，参见Dwyer等。28所使用的公式为MD＝100×(0.035307+0.009974(R420-R400))其中，MD是含有黑色素的皮肤表皮的估算的百分比，R400和R420表示分别在400nm和420nm波长下的反射值。所述MD参数是在分析阶段计算的。
对于研究4来说在处理之前(第0天)，第4，第10，第20，第30，和第60天，通过非-入侵性定量皮肤色度(反射)读数测量对象的皮肤色素沉着。使用Minolta 508i分光光度计记录八个皮肤部位(前额，面颊，颈部，肩胛骨，上臂内侧，前臂，腹部和小腿)在400-700nm波长范围内以20-nm的光波段为间隔测定皮肤的反射。对所述分光光度计进行编程，以便在每一阶段在每一个部位进行三次独立的测量，从而使误差最小化。提供每一个对象的本底的曲线图，并且在该曲线图上记录所有八个皮肤位点在该本底曲线图上的测量位置。随后进行重复测量，参考最初的曲线图进行，以便确保它们是在尽可能地接近每一个皮肤位点的最初测量的位置上进行。
在每一次随访时，获得并且记录了在400和420nm波长下在每一个部位三次独立测量的反射值的平均值。用420nm波长下的反射测量值减去400nm波长下的反射值，可以获得对皮肤的黑色素含量的合理的预测，参见Dwyer等。28所使用的公式为MD＝100×(0.035307+0.009974(R420-R400))其中，MD是含有黑色素的皮肤表皮的估算的百分比，R400和R420表示分别在400nm和420nm波长下的反射值。所述MD测量值是在分析阶段计算的。
4.数据分析4.1效力评估主要效力目标对于研究1来说在8个解剖学位点上(前额，面颊，颈部，肩胛，上臂内侧，前臂，腹部和小腿)的从本底(第0天)到第30天的晒成褐色的变化的确定，是根据皮肤反射测量的黑色素密度(MD)计算的[Dwyer等28；MD＝100×(0.035307+0.009974(R420-R400))。
对于研究2来说在8个解剖学位点上(前额，面颊，颈部，肩胛，上臂内侧，前臂，腹部和小腿)的从本底(第0天)到第90天的晒成褐色的变化的确定，是根据皮肤反射测量的黑色素密度(MD)计算的[Dwyer等28；MD＝100×(0.035307+0.009974(R420-R400))。
对于研究3和4来说在8个解剖学位点上(前额，面颊，颈部，肩胛，上臂内侧，前臂，腹部和小腿)的从本底(第0天)到第60天的晒成褐色的变化的确定，是根据皮肤反射测量的黑色素密度(MD)计算的[Dwyer等28；MD＝100×(0.035307+0.009974(R420-R400))。
B.结果以下的表2，3和4分别提供了研究1，3和4中完成了整个方案的对象的反应，表现为在它们的血浆中测定的美拉诺坦浓度。
表2研究1在第1和第10天的美拉诺坦血浆浓度(ng/mL)。
表3研究3的美拉诺坦血浆浓度(ng/mL)
表4研究4的美拉诺坦血浆浓度(ng/mL)
根据表2，3和4的数据，图4，5和6显示在接受液体注射的对象血浆中美拉诺坦的高峰含量大约比接受控制释放剂量的美拉诺坦的对象血浆的美拉诺坦含量高大约100倍。
下面的5，6，7和8提供了每一种研究在以不同的用药方案施用美拉诺坦之后对象的反应，表现为黑色素密度(MD)的变化，对于研究1，2，3和4来说，是分别在30，90和60天之后在上臂内侧测定的。上臂内侧一般表示人体组成型皮肤黑色素，因为该部位接触环境的机会最小。
表5研究1的黑色素密度相对本底(上臂内侧)的变化
表6研究2的黑色素密度相对本底(上臂内侧)的变化
表7研究3的黑色素密度相对本底(上臂内侧)的变化
表8研究4的黑色素密度相对本底(上臂内侧)的变化
根据表5-8的数据，图7表明，研究3和4中对象的黑色素密度变化明显比研究1和2的大并且快。这种出人预料的结果被视为研究3和4中的对象与研究2中的对象相比总体上接受了不超过1/15的美拉诺坦的剂量。
在本申请中，提到了各种出版物。这些出版物的完整内容被收作本申请的参考，以便更全面地说明本文所披露的化合物，组合物和方法。
可以对本文披露的化合物，组合物和方法进行各种改进和改变。通过阅读本文所披露的化合物，组合物和方法的说明和实施，可以了解本文所披露的化合物，组合物和方法的其他方面。应当把说明书和实施例视为举例性质的。
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1.在人类对象体内诱导黑素生成的方法，包括给所述对象施用α-MSH类似物有效的数量和时间，通过在对象表皮组织中的黑素细胞诱导黑素生成，而不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。
2.在人类对象体内诱导黑素生成的方法，包括给所述对象施用有效数量的α-MSH类似物，通过在对象表皮组织中的黑素细胞诱导黑素生成，其中，所述α-MSH类似物的使用水平在对象血浆中不超过10ng/ml，维持至少24小时。
3.在人类对象体内预防UV辐射诱导的皮肤损伤的方法，包括给所述对象施用α-MSH类似物有效的数量和时间，通过在对象表皮组织中的黑素细胞诱导黑素生成，而不会诱导所述对象的黑皮质素-1受体的同源脱敏作用。
4.在人类对象体内预防UV辐射诱导的皮肤损伤的方法，包括给所述对象施用α-MSH类似物有效的数量和时间，其中，所述α-MSH类似物的给药水平在对象血浆中不超过10ng/ml，维持至少24小时。
5.如权利要求1-4中任意一项的方法，其中，所述α-MSH类似物的给药水平在对象血浆中不超过5ng/ml，维持至少24小时。
6.如权利要求1-4中任意一项的方法，其中，所述α-MSH类似物的给药水平在对象血浆中不超过2ng/ml，维持至少24小时。
7.如权利要求1-4中任意一项的方法，其中，所述α-MSH类似物选自(a)具有以下结构式的化合物Ac-Ser-Tyr-Ser-M-Gln-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2，其中，M是Met，Nle或Lys；和(b)具有以下结构式的化合物R1-W-X-Y-Z-R2，其中R1是Ac-Gly-，Ac-Met-Glu，Ac-Nle-Glu-，或Ac-Tyr-Glu-；W是-His-或-D-His-；X是-Phe-，-D-Phe-，-Tyr-，-D-Tyr-，或-(pNO2)D-Phe7-；Y是-Arg-或-D-Arg-；Z是-Trp-或-D-Trp-；和R2是-NH2；-Gly-NH2；或-Gly-LyS-NH2。
8.如权利要求1-4中任意一项的方法，其中，所述α-MSH类似物是环状类似物，其中，分子内相互作用存在于(1)4号位置上的氨基酸残基和10或11号位置上的氨基酸残基之间，和/或(2)5号位置上的氨基酸残基和10或11号位置上的氨基酸残基之间。
9.如权利要求8的方法，其中，所述分子内相互作用是二硫键或其他共价键。
10.如权利要求1-4中任意一项的方法，其中，所述α-MSH类似物选自下列一组Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH2Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH2Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Dpr-NH2Ac-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH2
11.如权利要求1-4中任意一项的方法，其中，所述α-MSH类似物选自下列一组
12.如权利要求1-4中任意一项的方法，其中，所述α-MSH类似物是[D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Ser1，D-Phe7]-α-MSH，[D-Tyr2，D-Phe7]-α-MSH，[D-Ser3，D-Phe7]-α-MSH，[D-Met4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Glu5，D-Phe7]-α-MSH，[D-His6，D-Phe7]-α-MSH，[D-Phe7，D-Arg8]-α-MSH，[D-Phe7，D-Trp9]-α-MSH，[D-Phe7，D-Lys11]-α-MSH，[D-Phe-7，D-Pro12]-α-MSH，[D-Phe7，D-Val13]-α-MSH，[D-Ser1，Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Tyr2，Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[D-Ser3，Nle4，D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-Glu5，D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-His6，D-Phe7]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Arg8]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Trp9]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Lys11]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Pro12]-α-MSH，[Nle4，D-Phe7，D-Val13]-α-MSH， [(pNO2)D-Phe7]-α-MSH4-11，[Tyr4，D-Phe7]-α-MSH4-10，[Tyr4，D-Phe7]-α-MSH4-11，[Nle4]-α-MSH4-11，[Nle4，(pNO2)D-Phe7]-α-MSH4-11，[Nle4，D-His6]-α-MSH4-11，[Nle4，D-His6，D-Phe7]-α-MSH4-11，[Nle4，D-Arg8]-α-MSH4-11，[Nle4，D-Trp9]-α-MSH4-11，[Nle4，D-Phe7，D-Trp9]α-MSH4-11，[Nle4，D-