用于诱导植物抗病性的微生物诱导剂的制备和应用制作方法

张洪勋, 白志辉, 彭霞薇, 齐鸿雁

2003年11月19日

2003年3月20日

2003年3月20日

中国科学院生态环境研究中心

A01N63/00GK1456059SQ0312079

诱导剂 抗病性 诱导 微生物 植物 用于

1.收集微生物发酵产物，液态发酵产物通过离心或过滤分别收集微生物菌体和发酵液固态发酵产物先用水浸泡，再压滤，收集滤液和滤渣，液态发酵液和固态发酵滤液以及菌体都可以诱导植物抗病害2.微生物菌体在沸水中回流，过滤或离心分别收集微生物菌体和抽提液微生物菌体和抽提液都可以诱导植物抗病害3.微生物菌体(主要是真核微生物)在浓NaOH或KOH溶液中回流，根据微生物菌种的不同可适当调整碱的浓度和回流时间；冷却，抽滤，用水洗涤如此反复几次，再用稀盐酸煮沸，抽滤，先后用水、无水乙醇洗涤，脱水，滤干，干燥，即得几丁质微生物几丁质也可以诱导植物抗病害4.权利要求第3项所获得的几丁质与脱乙酰酶在TES-NaOH缓冲液(pH5.5)中30℃培养48小时，即可获得聚氨基葡糖聚氨基葡糖也可以诱导植物抗病害5.权利要求第1、2项所获得的发酵液、提取液用水按一定比例稀释，均匀喷雾与植物表面，必要时加入表面活性剂，帮助其在植物表面吸附，向植物组织内部渗透，间隔一段时间天喷雾一次，根据具体情况可适当调整稀释倍数和间隔天数经过该方法处理的植物对多数病害都有一定的防效6.权利要求第1、2项所获得的微生物菌体或孢子(植物病原菌需灭活)制备成悬浊液，均匀喷雾与植物表面，必要时加入表面活性剂，帮助其在植物表面吸附，间隔一段时间喷雾一次，根据具体情况可适当调悬浊液浓度和间隔天数也可以拌种或拌入植物所生长的土壤中经过该方法处理的植物对多数病害都有一定的防效7.权利要求第3项所获得的聚氨基葡糖配成0.02～0.5％的溶液，浸泡植物种子，或直接喷洒到植株表面，可预防多数植物病害

本发明属于生物农药领域植物病害不但严重影响农作物的产量和品质，它还直接有害于人、畜的健康目前对植物病害的防治还是以化学农药为主，它的过量使用对生态环境和食品的污染是不容忽视的问题高效、低毒生物农药的研究和开发是生产绿色食品和保护生态环境的有效手段植物都具有潜在的抗病基因，这一潜在的抗病基因可经诱导表达出来，从而使植物免遭病原真菌、细菌和病毒的危害微生物诱导剂是一类来源于微生物的能够诱导植物产生抗病性防卫反应的物质，它们大多数是安全低毒、环境友好的本发明的直接目的是提供微生物诱导剂的制备和使用方法微生物诱导剂主要包括微生物细胞提取物、微生物代谢产物以及微生物菌体其中已知的有效成分有β-葡聚糖及其寡聚糖、几丁质、聚氨基葡糖及其寡聚糖、糖蛋白等，还有一些未知成分本发明所述的微生物诱导剂制备和使用方法内容如下1.通过常规发酵方法(包括液态发酵和固态发酵等)进行微生物发酵，液态发酵产物通过离心或过滤分别收集微生物菌体和发酵液固态发酵产物先用水浸泡，再压滤，收集滤液和滤渣，液态发酵液和固态发酵滤液以及菌体都有一定的诱导剂活性2.微生物菌体在沸水中回流2～4小时过滤或离心分别收集微生物菌体和抽提液这两部分产物都有一定的诱导剂活性3.沸水抽提过的微生物菌体(主要是真核微生物)在10％左右NaOH或KOH溶液中回流1小时，根据微生物菌种的不同可适当调整碱的浓度和回流时间；冷却，抽滤，用水洗涤如此反复几次，再用稀盐酸煮沸，抽滤，先后用水、无水乙醇洗涤，脱水，滤干，干燥，即得几丁质4.将获得的几丁质与脱乙酰酶在TES-NaOH缓冲液(pH5.5)中30℃培养48小时，即可获得聚氨基葡糖5.将步骤1、2获得的发酵液、提取液用水按一定比例稀释，均匀喷雾与植物表面，必要时加入表面活性剂，帮助其在植物表面吸附，向植物组织内部渗透，间隔3-5天喷雾一次，根据具体情况可适当调整稀释倍数和间隔天数经过该方法处理的植物对多数病害都有一定的防效6.将步骤1、2获得的微生物菌体或孢子(植物病原菌需灭活)制备成悬浊液，均匀喷雾与植物表面，必要时加入表面活性剂，帮助其在植物表面吸附，间隔3-5天喷雾一次，根据具体情况可适当调悬浊液浓度和间隔天数也可以拌种或拌入植物所生长的土壤中经过该方法处理的植物对多数病害都有一定的防效7.将步骤4获得的聚氨基葡糖配成0.1％左右的溶液，浸泡植物种子，或直接喷洒到植株表面，可预防多数植物病害实施例1各种微生物发酵产物诱导植物抗病实验用土豆汁培养基，接种草酸青霉、黑曲霉、溜曲霉、大毛霉等菌种，液态发酵，经充分培养后，发酵液稀释到总糖浓度为0.1％，加入0.05％的吐温20，喷雾黄瓜幼苗，用0.05％的吐温20水溶液作对照，每隔3天喷雾一次，3次诱导后，挑战接种黑星病，待对照幼苗发病明显后分别调查对照和处理幼苗的病情指数，计算各处理的防效各菌种的发酵液诱导黄瓜对黑星病的防效见表1，表中数据为3次平行的平均值，相对标准偏差小于10％表1 实施例2各种微生物细胞提取物诱导植物抗病实验用土豆汁培养基，接种草酸青霉、黑曲霉、大毛霉、酿酒酵母等菌种，液态发酵，经充分培养后，过滤，收集菌体，在沸水中回流3小时过滤或离心分别收集微生物菌体和抽提液抽提液稀释到总糖浓度为0.06％，加入0.05％的吐温20，喷雾黄瓜幼苗，用0.05％的吐温20水溶液作对照，每隔3天喷雾一次，3次诱导后，挑战接种黑星病，待对照幼苗发病明显后分别调查对照和处理幼苗的病情指数，计算各处理的防效各菌种的发酵液诱导黄瓜对黑星病的防效见表2，表中数据为3次平行的平均值，相对标准偏差小于10％表2 实施例3草酸青霉菌体提取物对不同植物的诱导抗病效果将草酸青霉菌体提取物配制成总糖浓度为0.06％的溶液，加入0.05％的吐温20，喷雾植物幼苗，用0.05％的吐温20水溶液作对照，每隔3天喷雾一次，3次诱导后，挑战接种病原菌，待对照幼苗发病明显后分别调查对照和处理幼苗的病情指数，计算各处理的防效各菌种的发酵液诱导黄瓜对黑星病的防效见表3，表中数据为3次平行的平均值，相对标准偏差小于10％表