专利名称：高效微生物土壤修复剂的制作方法随着农业种植业的发展，化学肥料、农药以及其他的化学物质在农田积累越来越多，导致土壤板结、病害繁多直接影 响农产品的产量和质量问题，这个问题已经成为种植业急需攻克的难题。市场上用于修复土壤的产品主要还是化学成分，使用后容易造成二次污染。日本的EM菌在国内推广，效果不理想，特别是在抗重茬方面没有作用，EM菌的不足之处主要为成分不稳定，它是由多株菌混合在一起共同培养，造成菌与菌之间形成拮抗作用，生长起来的只有一株优势菌，效果不佳。
本发明提供一种高效微生物土壤修复剂，通过找到每一株菌的纯种，利用单株纯培养起来后进行复配，每一株菌都能保证达到数量，形成功能菌群起到高效降解污染残留的作用。高效微生物土壤修复剂其高效性主要由微生物的种类及微生物的数量决定；本发明主要内容就是描述了该微生物土壤修复剂的微生物组成和达到高菌数的培养方法。本发明的技术方案如下一种高效微生物土壤修复剂，是由光合细菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌和放线菌的发酵菌液混合而成；各发酵菌液的体积百分比为光合细菌1(Γ25%、枯草芽孢杆菌25 35%、酵母菌20 35%、放线菌20 40%。所述光合细菌优选为沼泽红假单孢菌；所述酵母菌优选为酿酒酵母；所述放线菌优选为泾阳链霉菌。上述高效微生物土壤修复剂的制备方法，采用将各株菌分别在无杂菌的发酵罐中纯培养后进行复配的方法制配，每株菌的纯培养过程都由二级扩大的方法培养；该方法包括下述步骤 (1)分别将光合细菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌、放线菌的母种接种于一级培养基进行一级培养，获得一级菌种； (2)分别将光合细菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌、放线菌的一级菌种接种于二级培养基进行二级培养，获得发酵菌液； (3)将各发酵菌液按比例混匀。步骤步骤(I)中光合细菌一级培养时培养基为酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，接种量为I. 5% 5%，优选2%，培养pH为6 10，培养温度为32 36°C，光照强度为3500 4500勒克斯，培养时间为5、天；枯草芽孢杆菌一级培养时培养基为淀粉O. 3%、蔗糖O. 5%、豆粉I. 5%、磷酸氢二钾O.25%、硫酸锰O. 2%、酵母膏O. 1%，接种量为I. 5% 5%，优选2%，培养pH为6 8，培养温度为32 35 °C，培养时间为I 2天；酵母菌一级培养时培养基为酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，接种量为I. 5°/Γ5%，优选2%，培养pH为5 7，培养温度为28 30°C，培养时间为f 2天；
放线菌一级培养时培养基为豆饼粉2%、CaC030. 2%、NaClO. 3%、白糖1%，接种量为
1.5% 5%，优选2%，培养pH为6 8，培养温度为27 32°C，培养时间为3 5天。步骤(2)中光合细菌二级培养为间歇式通气培养，培养基与一级相同，接种量为10°/Γ15%，优选15%，培养pH为6 10，培养温度为3(T36°C，光照强度为300(Γ4000勒克斯，培养时间为6 8天；
枯草芽孢杆菌二级培养优选为通气培养，培养基与一级相同，接种量为10% 15%，优选10%，培养pH为6 8，培养温度为32 35°C，培养时间为f 2天；
酵母菌二级培养优选为通气培养，培养基与一级相同，接种量为10°/Γ5%，优选10%，培养pH为4 7，培养温度为3(T35°C，培养时间为I 2天；
放线菌二级培养优选为通气培养，二级培养时培养基为豆饼粉2. 5%、NclO. 3%、CaC030. 4%、庶糖1%，接种量为15% 25%，优选20%，培养pH为6. 5 7. 5，培养温度为30 32°C，培养时间为5 7天。上述4种菌分别具有降解硫化物、高分子有机化合物、螯合重金属元素及降解农药残留的功能。本发明有益效果是运用现代生物工程技术，在高浓度纯培养单株微生物后进行复配，生产出高效的微生物土壤修复剂。生产出的产品不会二次污染种植土壤，比现有的同类产品浓度高，质量稳定。

沼泽红假单胞菌一级培养时培养基为酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，接种量为2%，培养PH为6 10，培养温度为36°C，光照强度为3500勒克斯，培养时间为5、天；二级培养时培养基与一级相同，接种量为15%，培养pH为6 10，培养温度为36°C，光照强度为3000勒克斯，培养时间为6、天。枯草芽孢杆菌一级培养的培养基为淀粉O. 3%、蔗糖O. 5%、豆粉I. 5%、磷酸氢二钾O. 25%、硫酸锰O. 2%、酵母膏O. 1%，接种量为2%，培养pH为6 8，培养温度为35°C，培养时间为I天；二级培养基与一级培养基相同，接种量为10%，培养pH为6 8，培养温度为35°C，培养时间为I天。酿酒酵母一级培养时培养基为酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，接种量为2%，培养pH为5 7，培养温度为30°C，培养时间为I天；二级培养时培养基为葡萄糖I. 5%、酵母膏O. 5%、磷酸二氢钾O. 15%、硫酸氨O. 18%、硫酸镁O. 1%、碳酸钙O. 45%，接种量为10%，培养pH为4 7，培养温度为35°C，培养时间为2天。泾阳链霉菌一级培养时培养基为豆饼粉2%、CaC030. 2%, NaClO. 3%、白糖1%，接种量为2%，培养pH为6 8，培养温度为32°C，培养时间为3天；二级培养时培养基为豆饼粉
2.5%、NclO. 3%、CaC030. 4%、庶糖1%，接种量为20%,培养pH为6. 5 7. 5，培养温度为32°C，培养时间为7天。
其实施流程如下
第一步分别将四株菌的试管斜面转接于500升的茄子瓶斜面上，每株菌转接2个茄子瓶，将整个斜面涂满，在培养箱中培养待用。第二步分别将第一步所培养好的茄子瓶斜面按所述的一级培养接种量接种到100L的一级发酵罐(发酵罐中的培养基按照发明内容中的以及培养基配置，在121度灭菌半小时后冷却到各株菌的一级培养温度)，并按照一级培养所述培养参数培养指定时间。第三步分别将第二步中培养好的一级培养液分别接种到1000L的二级发酵罐(二级发酵罐的培养基按所述二级培养基配制，在121度灭菌半小时后分别冷却到各株菌的二级培养温度)，并按照二级培养所述培养参数培养指定时间。第四步按照光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌以及放线菌分别为20%、30%、25%及25%的比例将四株菌混合即可。
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四株菌分别通过上述二级培养后，芽孢杆菌能达到60亿/ml，酵母能达到8亿/ml，光合细菌能达到35亿/ml，放线菌为菌丝状，但从显微镜下观察有明显的提高，复配后菌数能够达到30亿以上，目前农业部对农业微生物菌剂的标准为2亿/ml。


本发明公开了一种高效微生物土壤修复剂，属微生物的扩繁培养技术。它是是由光合细菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌和放线菌的发酵菌液混合而成；各发酵菌液的体积百分比为光合细菌10～25%、枯草芽孢杆菌25～35%、酵母菌20～35%、放线菌20～40%。四株菌分别在合适温度、通气量、培养基、酸碱度及培养时间下进行二级扩大培养，培养过程都控制在无杂菌的发酵罐中进行。有益效果是运用现代生物工程技术，在高浓度纯培养单株微生物后进行复配，生产出高效的微生物土壤修复剂。