专利名称：壳聚糖组合物的制作方法壳聚糖组合物本发明涉及壳聚糖组合物，并且特别涉及包含分散液的交联壳聚糖水凝胶。胶体系统获得了大量技术应用，在所述胶体系统中一种物质通过另一种物质被均匀地分散。分散体及乳剂是胶体系统的实例。分散体被定义为一种系统，在所述系统中颗粒分散于不同组成或不同形态的连续相中。乳剂是一种胶体系统，在所述胶体系统中分散相及连续相都是液体。水包油型乳剂(0/W)包含分散于水连续相中的油滴，而油包水型乳剂(W/0)包含分散于连续相中的液滴，所述连续相是有机液体。还已知更复杂的系统，如包含在分散于连续油相中的液滴内的油滴(0/W/0)。乳剂是热力学不稳定的，这意味着需要稳定以防所述分散相聚集或聚结。因此乳化剂被用于提高乳剂的胶体稳定性。乳化剂是表面活性材料，所述乳化剂吸附于所述分散相与所述连续相之间的界面上，从而降低界面张力。乳化剂通过降低所述分散相的聚集率和/或聚结率来稳定所述乳化剂。已知许多不同类型的乳化剂，但是现有乳化剂具有很多缺点。例如，已知常用乳化剂具有低生物降解性，这意味着它们在释放到环境中时集聚，可能造成污染。特别地，已知某些乳化剂对海洋生物有毒性。由于乳剂的热力学不稳定性，当长期贮存乳剂时可能会发生液相分离。此外，许多乳剂对环境影响因素敏感，如剪切力及温度变化。这意味着用于商业用途的乳剂的包装、贮存及运输可能会成为问题。尽管有这些缺点，乳剂在许多行业中获得应用，如药物、化妆品、 食品、农业化学品、油、工程、纺织、纸及家庭和个人护理产品行业。在许多这些行业中，对更稳定的乳剂有着持续需求。在医药行业，水不溶性药物对配方科学家提出重大挑战。为了提高体内溶解度，并且因此提高所述药物的生物利用度，水不溶性药物经常与表面活性剂或基于纳米粒子的递送剂一起提供于水介质中。例如，抗癌药物紫杉醇目前作为浓溶液提供于聚氧乙烯蓖麻油 (聚乙二醇丙三醇蓖麻醇酸酯)及乙醇中。在这一特殊递送系统中，水是最先要避免的，因为紫杉醇对水敏感，在水中它会慢慢水解。然后在输注之前用水生理溶液(例如林格氏溶液)稀释所述溶液。聚氧乙烯蓖麻油的使用一直与诸如严重的类过敏过敏反应的副作用有关。因此，在本领域中仍然需要克服上述缺点的组合物。因此，本发明提供组合物，其包含(i)包含交联壳聚糖及水的壳聚糖水凝胶；以及(ii)分散于所述水凝胶中的液体。本发明也提供一种用于制备本发明的所述组合物的方法，所述方法包括提供包含壳聚糖及水的可交联壳聚糖组合物；分散液体于所述可交联壳聚糖组合物中；并且用交联剂交联所述壳聚糖以便形成水凝胶。因而，本发明提供可以用于提供更稳定胶体系统的壳聚糖水凝胶。
现在用参照附图
来描述本发明，其中
图I示出本发明的乳剂以及静置30分钟之后的对比乳剂的照片。
图2示出静置22小时之后的所述乳剂的照片；以及
图3示出静置6天之后的所述乳剂的照片。
本发明的所述组合物包含分散于所述水凝胶中的液体。这意味着水不混溶性液滴在整个所述水凝胶中以细分散的形态分布。因此，本发明的所述组合物与一种乳化剂相似， 在所述乳化剂中所述液滴分散于壳聚糖水凝胶连续相中。水凝胶是指一种胶态凝胶，在所述胶态凝胶中水是分散介质。
本发明的所述组合物的稳定性的提高允许所述组合物贮存很长时间。此外，据信较低浓度的乳化剂可以用于产生稳定的乳剂。虽然不希望受理论约束，据认为提供于所述水凝胶中的所述交联壳聚糖在所述分散液滴周围产生笼式结构，其有助于防止分散材料聚集或聚结。
壳聚糖是由I，4-β -连结D-葡萄糖胺及N-乙酰-D-葡萄糖胺残基组成的线性多糖。壳聚糖是通过甲壳素碱法脱乙酰基产生的，其是在甲壳动物的壳中发现的N-乙酰-D-葡萄糖胺的聚合物。高分子量和/或高N-脱乙酰度的壳聚糖几乎不溶于水，然而其盐与单元酸往往是可溶于水的。所述葡萄糖胺残基的平均PKa是大约6. 8并且所述聚合物与(例如)盐酸、乙酸及乙醇酸形成水溶性盐。
壳聚糖是可生物降解的、无毒性并且抗菌。此外，其阳离子及亲水性使它在药物制剂中具有吸引力。
壳聚糖的特征在于其分子量及脱乙酰度。可以通过改变所述甲壳素碱处理的条件产生不同分子量及脱乙酰度的壳聚糖。商业上，壳聚糖的特征在于其粘度并且给出了平均分子量。市售的壳聚糖典型地具有4kDa至2000kDa范围内的分子量以及66%至95%的平均脱乙酰度。
壳聚糖在本质上是多分散的，即包含不同链长的混合物。根据本发明使用的壳聚糖，当作为I %醋酸水溶液中的1% w/v溶液在25°C的温度下使用旋转粘度剂在主轴以20rpm旋转测量时，优选地在交联之前具有高达15，OOOmPas的粘度，优选地从2mPas至 IOOOOmPas,更优选的从5mPas至2000mPas并且最优选地从IOmPas至lOOOmPas。所述溶液的粘度是所述壳聚糖平均分子量的显示，据认为壳聚糖是具有不同链长的分子分布的聚合材料。所述壳聚糖优选地具有重均分子量为IOkDa至500kDa。重均分子量可以使用光散射技术测定。
所述壳聚糖的脱乙酰基模式对于其性能也重要。市售的壳聚糖典型地具有嵌段结构，这意味着所述壳聚糖包括N-乙酰-D-葡萄糖胺嵌段，或甲壳素样聚合物嵌段。这是因为甲壳素典型地在固相过程中从甲壳动物的壳分离。在这样的过程中，其中所述壳在整个所述过程中保持不溶解，所述壳用强碱处理以便得到部分脱乙酰基化的壳聚糖。然而，由于所述甲壳素最初是呈甲壳动物的壳的形式，所述碱的氢氧根离子往往优选地对所述壳表面上的单糖单元起作用；在相对厚的壳的中心内的所述单糖单元往往看不到所述氢氧根离子并且因此保留N-乙酰替代模式。
壳聚糖的溶解度取决于壳聚糖链长、脱乙酰度、所述链内的乙酰基分布及外部条件，如离子强度、pH、温度和溶剂。实际上，大多数市售的、未修饰的壳聚糖具有脱乙酰度超过80%并且当所述pH高于大约6时所述壳聚糖在水溶液中是不溶于水的高于这一 pH壳聚糖将从水溶液中析出。
当水凝胶是所希望的产物时，所述壳聚糖及所述交联衍生物保持在溶液中并且因此避免沉淀是非常重要的。
用于本发明中的所述壳聚糖水凝胶可以使用已知的用于交联壳聚糖的方法制成。 在这些方法中，所述壳聚糖水凝胶通过在水溶液中溶解壳聚糖并且交联所述壳聚糖产生。 因此，市售的壳聚糖在pH为所述壳聚糖可溶的水溶液中交联，典型地在酸溶液，例如4至5 的pH。这些水凝胶在低pH(pH5或更少)时稳定并且因此当任何特殊的最终用途需要低pH 时在本发明的所述组合物中是有用的。
优选地，本发明的所述壳聚糖水凝胶从具有脱乙酰度75%或更少的壳聚糖产生， 更优选地70 %或更少，更优选地65 %或更少，更优选地60 %或更少并且最优选地55 %或更少。甲壳素完全不溶于水并且当所述脱乙酰度是30 %或更多时所述甲壳素在一定程度上变得可溶。根据本发明的所述壳聚糖因此优选地具有脱乙酰度高于35%，优选地是脱乙酰度高于40 %并且最优选地的是脱乙酰度高于45%。
虽然用于产生本发明的所述水凝胶的所述壳聚糖可以具有嵌段式脱乙酰基，优选地，用于产生本发明的所述水凝胶的所述壳聚糖被随机地脱去乙酰基。即，所述壳聚糖具有随机模式的乙酰化及脱乙酰基化的单糖单元。确定所述单糖的性质的方法之一是使用NMR 测定最近邻的频率并且比较通过统计模型获得的所述频率，参见W003/011912。
具有随机的脱乙酰基模式的壳聚糖可以通过在仔细控制的条件下在溶液中处理甲壳素产生，或通过完全脱去所述甲壳素的乙酰基并且然后在溶液中再乙酰化产生以便提供所需的脱乙酰度。参见 T. Sannan 等人，Makromol. Chem. 177，3589-3600，1976 ；X. F. Guo 等人，碳水化合物化学杂志(Journal of Carbohydrate Chemistry) 2002, 21,149-61 ;以及 Κ. Μ. VInim等人碳水化合物聚合物(CarbohydratePolymers) 25,1994,65-70。本发明的所述壳聚糖优选地可通过在所述溶液相中乙酰化和/或脱乙酰基化所述壳聚糖获得以便提供随机的脱乙酰基模式。
优选地用于产生本发明的所述水凝胶的所述壳聚糖具有脱乙酰度75 %或更少并且具有随机的脱乙酰基模式。
与典型的市售壳聚糖相比，具有脱乙酰度低于75%并且具有随机模式的脱乙酰基的壳聚糖在水中具有较高的溶解度。所述低脱乙酰基化/随机壳聚糖在较高的PH下是可溶的，这意味着用于产生水凝胶的交联反应可以在较高的PH下发生。这样做有几个优点。使用较高的PH的可能性在大体上增加所述葡萄糖胺残基上的氨基的反应性方面是有利的。 这使得偶联更有效并且使得浓度低得多的交联剂能够使用以便达到定义程度的交联，从而通向低制造成本。另一个益处是副作用保持在较低水平。使用低浓度交联剂的另一个有益的和重要的方面是当所形成的水凝胶旨在用于药用时，由所述交联剂与其生物环境的相互作用产生的有毒副作用可以减少到最小。
虽然具有脱乙酰度低于75%并且具有随机模式的脱乙酰基的壳聚糖的所述交联可以在酸性PH下进行，例如4至5的pH，所述交联优选地在pH6或更高pH下进行。更加优选地是使用PH高于6. 3。也优选地使用通过水解或通过消去反应在很大程度上不破坏所述交联剂的pH。所述反应的典型条件是碱性条件，优选的使用pH低于10，更优选地低于9. 5 并且最优选地低于9. O。根据本发明的这一优选的实施方案产生的所述凝胶是特别优选地， 因为它们具有低毒性并且可以被制成迅速降解。正如上面提到的，当经受中性和碱性条件时所述凝胶不会沉淀。它们也具有硬度，该硬度允许进一步机械加工成(例如)在大量应用中有用的可注射的所谓“碎凝胶”。
适合用于本发明的交联剂包含至少两个活性部位，所述活性部位是旨在易于与胺反应的亲电子试剂。当所述交联剂具有两个活性部位时，它是双功能的并且因此可以与两个氨基(例如，不同壳聚糖链中的两个葡萄糖胺单元)反应。可以通过间隔区部分增加所述活性基之间的距离。这一间隔区通常是脂肪链或类似聚或低聚乙烯乙二醇的聚醚构造。优选地，所述交联剂是双、三或四功能的，虽然双或三功能的是优选的并且双功能的是最优选的。优选地使用双功能的交联剂，该双功能交联剂在高产反应中易于在接近或高于聚合物链中的所述葡萄糖胺的PKa(大约6. 8)的pH下反应并且其中所述交联分子消耗至相当程度。所述交联分子不会形成在使用前必须去除的副产品也是优选的。许多交联剂旨在在反应时消除离去基团。在这种情况下，优选的是消除无毒性组分的交联剂。此类交联官能度的典型实例是活性酯、迈克尔受体及环氧化物。适合的交联剂是已知的并且包括葡萄糖胺聚糖，如透明质酸及硫酸软骨素(Ann. Pharm. Fr 5847-53，2000)、 戊二醛(Ind. Eng. Chem. Res. 36 :3631_3638，1997)、乙二醛(US5, 489，401)、方酸二乙酯 (大分子(Macromolecules) 31 1695-1601,1998)、双环氧化合物，例如缩水甘油酿(US 5，770，712)、三聚磷酸(J ApplPolym Sci 74 :1093_1107，1999)、京尼平(J Polym Sci A Polym Chem 38，2804-2814，2000，生物材料(Biomaterials) · 23，181-191，2002)、甲醛 (J. Polym. Sci. Part A Polym. Chem. 38,474,2000, Bull. Mater. Sci. ,29,233-238,2006)。 优选的交联分子是方酸的酯衍生物、双环氧化合物及丙烯酰胺的衍生物。更优选的是方酸二乙酯(3，4_ 二乙氧基-3-环丁烯-1，2-二酮)及其结构上密切相关的类似物。其它优选地交联剂是1，4_ 丁二醇缩水甘油醚、丙烯酰胺的衍生物及其结构上密切相关的类似物。
本发明的所述水凝胶的结构受壳聚糖浓度及交联试剂的量的影响。因此，具有较高粘度的水凝胶可以通过在所述水凝胶中使用较高浓度的壳聚糖产生，或通过增加交联键的的数量产生。一般而言，优选的是具有较高的壳聚糖浓度及较低浓度的交联剂以便实现所希望的性质的凝胶。优选的是减少所使用的交联剂的量，特别是用于药物应用，因为交联剂如果没有完全消耗可能导致免疫反应或毒副反应。
交联剂与壳聚糖的摩尔比以所述交联剂中官能团的数量及所述壳聚糖中可接近的氨基的数量计算优选地是O. 2 I或更小，更优选地是O. 16 I或更小并且最优选地是0.1 I或更小。所述摩尔比以可用于在所述交联剂及所述壳聚糖上交联的官能团的数量计算。对于所述交联剂，它将取决于官能度(双、三或四功能的等等)及所述壳聚糖对于所述氨基的可接近性(只有所述脱乙酰基化的氨基将是活性的)。显然，可用的氨基的数量将由所述壳聚糖的脱乙酰度所决定。
与本发明的所述交联水凝胶对比，已经提出了基于非交联壳聚糖的水包油型乳剂(参见 Mun 等人,胶体与界面科学杂志(Journal ofColloid and Interface Science), 2006, 296, 581-590 ;Laplante 等人，碳水化合物聚合物(Carbohydrate Polymers), 2005, 59,425-434 ；Laplante 等人，食品胶体(Food Hydrocolloids)，2005，19，721—729 ；以及 Helgason 等人,水生产品技术杂志(Journal of Aquatic Food Product Technology), 2008，17，3，216-233)。然而，这些文献披露了不同的方法。这些文献表明，为了提供有效稳定，所述壳聚糖应该吸附于表面活性剂稳定的液滴的表面上以便形成多层乳剂。然而，壳聚糖特性中的大的变异性(如分子量及脱乙酰度)使得以这种方式难以实现有效稳定。而且， 已经发现当与包含非交联壳聚糖的组合物相比时，本发明的所述组合物(包含分散于交联壳聚糖水凝胶中的液体)已经提高了稳定性。
所述壳聚糖优选地以占所述水凝胶中壳聚糖及水的总重量的3重量％的量存在于本发明的所述组合物中。更优选地是使用2重量％或更少的量。优选地壳聚糖的量占所述水凝胶中壳聚糖及水的总重量高于O. 3重量％，优选地O. 75重量％或更大。水可以以占所述水凝胶中壳聚糖及水的总重量高达99. 7重量％的量存在于所述水凝胶中。然而，在许多应用中可以取决所形成的乳剂体系的预期用途的性质使用水与一种或多种其它溶剂的组合。此类溶剂的实例是水混溶性溶剂，如乙醇(诸如，乙醇、丙三醇、乙二醇或丙二醇)、聚乙二醇或聚丙二醇、DMS0、丙酮、DMF> glycofuran、甲基卩比咯烧酮、Transcutol及其组合。
本发明的所述组合物可以任选地包括在所述水凝胶基质中可混溶的或可溶的材料，如防腐剂、无机盐(如氯化钠)和缓冲液。
本发明的所述组合物包含分散于所述水凝胶中的液体。在一个优选地实施方案中，本发明的所述组合物包含溶于所述水凝胶的水溶性活性剂。适合的活性剂包括水溶性药物、维生素和化妆品成分。存在的活性剂的量取决活性成分的类型及最终用途将不同，但是所述活性成分可以(例如)以占所述组合物的总重量的O. 005重量％至15重量％的量存在。
适合的液体与水不混溶并且包括能够在水包油型乳剂中形成所述分散相的任何液体。适合的液体的实例众所周知并且包括水不混溶性油、药物活性剂和赋形剂、化妆品成分、维生素、食品、农业化学活性剂和添加剂以及个人护理成分。
已经发现本发明的所述组合物能够包含占所述组合物的总重量的高达50重量％ 的分散液并且仍然保持稳定。交联壳聚糖的使用显著地提高了乳剂稳定性。这种稳定性的提高允许使用高比例的分散液。所述分散液优选地以占所述组合物的总重量的5重量％至 30重量％的量存在。
如果混合物分散于水中，所述分散液可以包括材料的所述混合物。例如，所述分散液可以包含两种或多种与水不混溶的液体的混合物，或水不混溶性液体与分散于所述水不混溶性液体中的固体颗粒的混合物。
在本发明的一个优选的实施方案中，一种或多种水不溶性活性成分被溶于所述分散液中。根据本发明的这一实施方案，水不溶性药物或维生素(例如)被溶于分散于所述水凝胶中的水不混溶性液体。许多水不溶性活性成分的实例对于本领域的技术人员是已知的并且包括驱虫剂；染料；药物，例如细胞抑制剂药物，如紫杉醇、消炎药(如布地奈德)和免疫抑制药物(如环孢菌素)；以及维生素(如维生素D和维生素A)。例如，当所述组合物包括药物时，所述分散液应该是药物学上可接受的与水不混溶的液体载体。实例包括脂类， 例如，磷脂、三酰甘油、丙三醇二烷基酯和单烷基酯以及脂肪酸，包括Ω-3脂肪酸(如二十碳五烯酸(EPA))和二十二碳六烯酸(DHA)。典型地此类油和脂类是芝麻油、葵花籽油、橄榄油、菜籽油、Miglyo_ 812 (辛酸/葵酸甘油三酯)、石蜡油和羊毛脂。
当本发明的所述组合物包含分散液时，一种乳化剂被提供以便稳定所述液滴。可以使用适合用于产生水包油型乳剂的任何乳化剂。所述乳化剂可以是阴离子的、阳离子的， 或非离子的，或其组合。适合的乳化剂对于本领域的技术人员来说是众所周知的并且包括烷基磺酸盐、烷基磺基琥珀酸酯、磷脂(例如卵磷脂)、蛋白质、聚乙烯乙二醇氢化蓖麻油、 环氧乙烷与环氧丙烷的共聚物(例如那些可用的商品名为Pjuronk,)、脂肪酸聚氧化乙烯酯(例如那些可用的商品名为Myrj )、脂肪醇聚氧化乙烯烷基醚(例如那些可用的商品为Brij )、山梨醇酐脂肪酸酯(例如那些可用的商品名为Span )、烷基酚聚氧乙烯醚(例如那些可用的商品名为Triton )以及聚氧化乙烯山梨醇酐脂肪酸酯(例如那些可用的商品名为Tween )。在一个优选的实施方案中，本发明的所述组合物进一步包含磷脂。所属磷脂可以有利的形成脂质体相，该脂质体相通过所述壳聚糖水凝胶稳定。
所述乳化剂以适合用于稳定水包油型乳剂的量存在并且可以容易地被本领域的技术人员测定。已经令人惊讶的发现本发明的所述组合物能够包括相对低的量的乳化剂并且仍然得到比相应的非交联乳剂稳定性更高的乳剂。虽然不希望受理论的约束，据信交联壳聚糖的使用显著地提高乳剂稳定性，从而允许使用低浓度的乳化剂。因此所述乳化剂可以以占所述分散液的重量的O. 2重量％至25重量％的量存在于本发明的所述组合物中，更优选地O. 2重量％至5. O重量％。
在本发明的优选的实施方案中，已经发现提供稳定性优越的组合物至相应的包含非交联壳聚糖的乳剂中(其中乳化剂的浓度是五倍多高)可以大体上减少乳化剂的量。此外，在包括通常认为更苛刻的条件下(例如在生理盐浓度中)可以制成非常高脂质含量 50 %的稳定组合物。
如上所述，所述组合物通过以下步骤产生提供包含壳聚糖及水的可交联壳聚糖； 分散液体于所述可交联壳聚糖组合物中；并且用交联剂交联所述壳聚糖以便形成水凝胶。 据认为提供于所述水凝胶中的所述交联壳聚糖在分散液滴周围产生笼式结构，这有助于防止所述分散材料的聚集或聚结。在用于产生所述水凝胶的过程中，至少某些所述交联因此应该在所述液体分散于所述可交联壳聚糖组合物之后发生。
将要进行分散的液体被加入所述可交联壳聚糖组合物中并且搅拌所述混合物。可以使用适合用于制备乳剂和胶态悬浮液的高速混合机并且这些高速混合机是众所周知的。 高压下的均化也通常用于这一目的。
所述交联剂可以在所述将要进行分散的液体之前、同时或之后被加入所述可交联壳聚糖组合物中。优选地所述交联剂在所述液体分散于所述壳聚糖组合物之前被加入所述可交联壳聚糖组合物中。这意味着，所述交联剂反应在所述液体分散于所述组合物之前开始。然而，所述液体应该在所述交联反应完成之前分散于所述壳聚糖组合物中。根据这一优选的实施方案，液体可以仅仅通过在室温下使用磁力搅拌器搅拌容易地分散于所述可交联壳聚糖组合物中不需要高速搅拌机。
所述可交联壳聚糖在所述交联反应发生时必须保持溶于所述水介质中。如上所述，可以调整pH以便保证所述壳聚糖保持可溶性。因此，对于许多市售的壳聚糖，所述交联反应将在酸性pH下发生，典型地在4至5的pH下。然而，本发明的优选的实施方案的所述低脱乙酰基化的壳聚糖可以在较高的PH下进行交联，典型地6至10的pH，优选地6至8
当本发明的所述组合物包含可混溶于或可溶于所述水凝胶基质中的材料(如活性剂、防腐剂、无机盐及缓冲液)时，这些材料可以在所述液体分散于所述组合物之前以及交联发生之前方便的被加入所述可交联壳聚糖组合物中。
当本发明的所述组合物包含一种或两种溶于所述分散液中的水不溶性活性材料时，所述水不溶性材料在所述液体分散于所述可交联壳聚糖组合物之前被溶于所述液体中。
根据本发明的所述水凝胶作为嵌段获得，所述嵌段可以不需要进一步处理而分离。所述水凝胶可以使用本领域已知的常规方法进行加工以便提供较小嵌段或片段。这样产生的“碎凝胶”可以取决所述碎凝胶的最终用途被制成不同的嵌段/片段。当所述嵌段被制成小的嵌段时，它们成为可通过细针注射的。
在本发明的一个实施方案中，物质可以在所述组合物已经加工成碎凝胶之后被加入所述组合物中。
所述溶液的粘度可以使用流变仪(如Bohlin Gemini VOR仪器)来测量，用于在 25°C测量直径40mm和锥角4°的细胞锥板几何体。
本发明现在将参照以下实施例进行描述，所述实施例并不旨在被限制。实施例
主要遵循以下文献中概述的原则制备低N-脱乙酰度及具有随机脱乙酰基模式的壳聚糖Sannan T, Kurita K, Iwakura Y.,甲壳素研究 I (Studies on Chitin, I.)。高分子化学(Die MakromolekulareChemie) 1975, 0,1191-5 ；Sannan T, Kurita K, Iwakura Y., 甲壳素研究 2(Studies on Chitin, 2.) Makromol. Chem. 177，3589-3600，1976 ;Guo X， Kikuch, Matahira Y, Sakai K, Ogawa K.，低脱乙酸度的水溶性甲壳素(Water-soluble chitin of low degree of deacetylation),碳水化合物化学杂志(Journal of Carbohydrate Chemistry) 2002, 21,149-61 ;以及 W003/011912。
材料
壳聚糖，脱乙酰度48%，粘度354mPas (壳聚糖DD 48% )
壳聚糖，脱乙酰度63%，粘度230mPas (壳聚糖DD 63% )
壳聚糖，脱乙酰度49%，粘度69mPas (壳聚糖DD 49% )
壳聚糖，脱乙酰度44%，粘度450mPas (壳聚糖DD 44% )
PBS——磷酸盐缓冲液
菜籽油、花生油、蓖麻油、Miglyol 812 (辛酸/葵酸甘油三酯)——/K -不混溶性液体
聚山梨醇酯60 (Polysorbate 60)、Tween 20、Brij 52、Triton X-100、Phosal 53MCT——乳化剂
3，4_ 二乙氧基-3-环丁烯-1，2-二酮(方酸二乙酯)——交联剂
丙二醇、PEG400、乙醇-水混溶性、无毒性溶剂
维生素D3、埃索美拉唑钠、紫杉醇、布地奈德——水溶性差的活性剂
4-羟基苯甲酸甲酯、4-羟基苯甲酸丙酯——水溶性活性剂
A.在PBS、壳聚糖及交联壳聚糖中形成的乳剂的比较
制备I. 25% w/v的壳聚糖溶液(IOOmL)
壳聚糖DD 48% (I. 25g)被加入配备有搅拌棒的烧杯中。水(大约80mL)被加入并且通过在连续搅拌下逐滴添加盐酸(2M(aq))调节pH。当所述壳聚糖溶解时调节所述pH至6.6并且调整体积至lOOmL。
制备O. 625% w/v的壳聚糖溶液(IOOmL)
相同体积的水被加入上面所述壳聚糖(50mL)中并且所述溶液进行充分地混合。
制备菜籽油-聚山梨醇酯储备液
储备液A
在室温下在菜籽油(25g)中搅拌聚山梨醇酯60(2g)直到形成均匀地和稍微不透明的溶液。
储备液B
在室温下在菜籽油(25g)中搅拌聚山梨醇酯60(380mg)直到形成透明溶液。
在乙醇中制备方酸二乙酯储备液
(3，4-二乙氧基-3-环丁烯-I，2-二酮)(50 μ L)被溶于乙醇(950 μ L)中。
用3，4-二乙氧基-3-环丁烯-I，2-二酮激活壳聚糖溶液
方酸二乙酯储备液(315 μ L)被加入上述所述壳聚糖储备液(50mL)中。在用于所述乳剂的制备中之前，在室温下搅拌所述溶液至少15分钟，以便确保有效的混合。
制备乳剂，通用过程
在磁力搅拌器上通过磁力搅拌棒剧烈地搅拌包含PBS、壳聚糖或壳聚糖和交联剂的水相。然后菜籽油/聚山梨醇酯60被缓慢地加入所述水相中。容易地形成白色乳剂并且搅拌所述乳剂大约I分钟。为了进一步确保良好混合，所述乳剂在巴斯德吸管中被来回吸入(大约5次)。
制备具有表I中示出的所述组合物的实施例3、4、7、8和10以及对比实施例1、2、5、6 和 9。
表I


本发明提供一种组合物，其包含(i)壳聚糖水凝胶，其包含交联壳聚糖及水；以及(ii)分散于所述水凝胶中的液体。