专利名称:何首乌药材的指纹图谱、其建立方法和应用的制作方法何首乌为蓼科植物Polygonum, multiflorum. Thynb.的干燥块根,多为野生品,广 东德庆栽培的何首乌为地道药材。临床多制用,主要为补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨药。 由于中药的复杂性,目前仍是采用传统的药材鉴别方式,而这种依靠经验监控药材质量的 方法具有很大的局限性。中药指纹图谱是指某种中药材及其制剂中所共有的、具有特征性的某类或数类成 分的色谱或光谱的图谱。在现阶段,中药的有效成分绝大多数没有得到明确,指纹图谱的建 立对于有效控制中药材及其制剂的质量具有十分重要的意义。对于何首乌药材,由于其成 分复杂,以各个单一成分为指标的研究较多,但具体某一成分都不能真正反映药材的质量, 而综合研究其指纹图谱以控制质量的还未有统一标准。因此,目前存在对于能够全面表征何首乌药材的成分特征的指纹图谱的需求,何 首乌药材的质量控制方法和质量控制标准也有待于进一步完善。
为了解决上述技术问题,本发明的一个目的是提供一种何首乌药材的指纹图谱。本发明的另一个目的是所述指纹图谱的建立方法。本发明又一个目的是提供所述指纹图谱在监控何首乌药材和含有何首乌药材的 药物制剂的质量中的应用。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。一方面,本发明提供一种何首乌药材的指纹图谱,其中,所述指纹图谱为将何首乌 药材通过高效液相色谱分析得到的HPLC指纹图谱。在上述指纹图谱中优选包括11个特征峰,以4号峰二苯乙烯苷峰为参照峰,具体 操作见实施例3,各特征峰的相对保留时间和相对标准偏差为1号峰相对保留时间0.3421 士 0.0008,相对标准偏差0.1047%2号峰相对保留时间0.4183士0.0050,相对标准偏差0.9714%3号峰相对保留时间0.6848 + 0.0007,相对标准偏差0.0528%4号峰相对保留时间1.0000 ;5号峰相对保留时间1.0824 士 0.0009,相对标准偏差0.0512%6号峰相对保留时间1.9242 士 0.0079,相对标准偏差0.2999%
7号峰相对保留时间2.1200士0.0084,相对标准偏差0.2753%
8号峰相对保留时间2.1909士0.0100,相对标准偏差0.3293%
9号峰相对保留时间2.4416士0.0110,相对标准偏差0.3186%
10号峰相对保留时间2. 8972士0. 0150,相对标准偏差0. 3142% ;11号峰相对保留时间3. 0627士0. 0161,相对标准偏差0. 3161%。优选地,所述何首乌药材产自广东德庆。另一方面,本发明提供上述指纹图谱的建立方法,该方法包括(1)制备何首乌药材溶液和对照品溶液;(2)将步骤(1)中制备的何首乌药材溶液和对照品溶液分别进行高效液相色谱分 析,得到何首乌药材和对照品的HPLC图谱;(3)通过比较不同何首乌药材的HPLC图谱确定何首乌药材的共有的特征峰。优选地,所述步骤(1)中,制备何首乌药材溶液包括将何首乌药材溶于甲醇,水 浴回流,滤过,滤液蒸干,将残渣溶解于甲醇,过微孔滤膜;制备对照品溶液包括精密称取二苯乙烯苷适量,溶于甲醇,配制成0. 2mg/ml的 溶液。优选地,所述步骤(2)中,高效液相色谱分析的分析条件包括采用反相填料色谱 柱;检测波长200 400nm,流速0. 1 5ml/min,柱温0 60°C,进样量1 100 μ 1,流 动相为乙腈-磷酸水溶液;进一步优选地,所述高效液相色谱分析的分析条件包括采用 Phenomenx-C18色谱柱;检测波长280nm,流速1. Oml/min,柱温25°C,分析时间65min,进样 量10 μ 1,流动相为乙腈-0. 4% V/V磷酸水溶液。优选地,所述步骤(2)中采用梯度洗脱液进行洗脱,洗脱条件包括O 15min 乙腈体积比为 15% 18%,15 50min 为 18% 40%,50 60min 为 40 % 100 %,60 67min 保持 100 %。优选地,所述步骤(3)中,通过采用药典委员会规定的指纹图谱计算软件A版比较 不同何首乌药材的HPLC图谱,从而确定何首乌药材的共有的特征峰;进一步优选地,所述步骤(3)还包括将步骤(2)得到的对照品的色谱峰在何首乌 药材的HPLC图谱中所对应的色谱峰作为参照峰,计算各特征峰的相对保留时间和相对标 准偏差;进一步优选地,所述步骤(3)还包括根据参照峰计算各特征峰的相对峰面积和相 对标准偏差。又一方面,本发明提供上述指纹图谱在监控何首乌药材和包含何首乌药材的相关 药物制剂的质量中的应用;优选地,所述何首乌药材为产自广东德庆的何首乌药材。再一方面,本发明提供何首乌药材的质量检测方法,所述方法包括将待测何首乌 药材的HPLC图谱和本发明提供的上述指纹图谱进行比较。与现有技术相比,本发明具有的有益效果在于本发明通过全面,系统的研究,依据国家药品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹 图谱研究的技术要求(暂行)》和国家药典委员会印发的《中药注射剂指纹图谱实验研究技 术指南(试行)》,对广东德庆道地的何首乌药材进行了液相指纹图谱测定,建立的指纹图 谱具有稳定,重现性好的特点,该研究有助于德庆何首乌药材的标准化种植和质量控制,同 时可将何首乌指纹图谱与二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚的含量测定结合起来全面控制 德庆何首乌药材的质量,从而为科学合理的控制德庆何首乌药材的质量奠定坚实的基础。 此外,该指纹图谱的建立方法可操作性强,重现性好,为更好地控制道地何首乌药材质量提 供了科学依据。
以下,结合附图来详细说明本发明的实施例,其中图1为二苯乙烯苷对照品图谱。图2为大黄素对照品图谱。图3为大黄素甲醚对照品图谱。图4为10批何首乌药材HPLC色谱分离叠加图,其中从下到上依次为第1_第10 批。图5为何首乌HPLC指纹图谱,其中4号峰为二苯乙烯苷,10号峰为大黄素,11号 峰为大黄素甲醚。
批号特征指纹峰相关 系数1234(s)5678910110402090.34290.42230.68521.00001.08191.92042.11612.18612.43602.89053.05551.00000403200.34230.42150.68461.00001.08151.91892.11472.18432.43462.88893.05401.00000404260.34230.42160.68461.00001.08201.91962.11532.18502.43532.88983.05481.00000405060.34210.42130.68471.00001.08171.91892.11472.18422.43442.88903.05401.00000405120.34200.42130.68441.00001.08231.91732.11282.18282.43262.88733.05241.00000407050.34190.42040.68431.00001.08271.92502.12132.19182.44272.89993.06581.00000407290. 34200. 41390. 68511. 00001. 08291.93032. 12592. 19862. 44982.90653. 07250. 99990408090. 34220. 41380. 68551. 00001. 08311.93212. 12832. 20092. 45262. 91223. 07880. 9999
本发明公开了一种何首乌药材的质量控制方法,所述指纹图谱为将何首乌药材通过高效液相色谱分析得到的HPLC指纹图谱。该指纹图谱可用于全面监控原料何首乌的质量,以确保何首乌和包含何首乌的相关药物制剂的质量稳定、均一。本发明还公开了所述何首乌药材的指纹图谱的建立方法及其应用。
何首乌药材的指纹图谱、其建立方法和应用制作方法
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