专利名称：一种用于重组鸡干扰素α的补料培养基及其制备方法干扰素是一类在同种细胞上具有抗病毒活性的糖蛋白，通过抑制病毒DNA和RNA的复制达到预防和治疗效果，是脊椎动物抵抗病毒、细菌、寄生虫感染及肿瘤侵袭的重要组分。同时干扰素还具有神经、免疫、内分泌调节等多种生物学功能。1957年自Isaacs和Lindenmann发现干扰素以来，干扰素已经显示出了极强的抗病毒、免疫调节活性和广阔的应用前景。因而，干扰素的研究越来越受到人们的广泛关注。与传统的宠物保健治疗药物相比，干扰素在治疗效果及使用时机方面显示出了极大的优越性。目前，干扰素等蛋白类药物的工业生产中使用最多的工程菌为大肠杆菌，采用高密度培养技术来提高菌体的发酵密度，从而最终提高产物的比生产率。高密度发酵目的的实现，除了重组菌本身的表达性质之外，还必须有重组菌生长和产物表达的最适培养基组成等条件。目前生产重组鸡α干扰素的补料培养基中大多有葡萄糖为碳源，在培养前期过程中就极易产生乙酸，造成重组菌生长和表达的抑制效应。因此，选择合适的发酵培养基不仅可以减少培养体积，强化下游分离提取，而且可以缩短生产周期、减少设备投资从而降低生产成本，能极大地提高在市场上得竞争力。
本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于重组鸡干扰素α的补料培养基。本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基的制备方法。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是—种用于重组鸡干扰素α的补料培养基，主要由葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、MgSO4 WH2CKNaCl和H2O组成，其中每IL H2O中含有葡萄糖120 260g、蛋白胨30 60g、酵母粉 15 35g、MgSO4 · 7H20 2 6g、NaCl 3 7g。优选的，上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基，其中每IL H2O中含有葡萄糖130 220g、蛋白胨 45 60g、酵母粉 20 35g、MgS04 · 7Η20 3 6g、NaCl 3 5g。优选的，上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基，其中每IL H2O中含有葡萄糖200g、蛋白胨 60g、酵母粉 35g、MgSO4 · 7H20 6g、NaCl 3g。优选的，上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基，其中每IL H2O中含有葡萄糖220g、蛋白胨 60g、酵母粉 20g、MgSO4 · 7H20 3g、NaCl 4g。优选的，上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基，其中每IL H2O中含有葡萄糖260g、蛋白胨 30g、酵母粉 15g、MgSO4 · 7H20 6g、NaCl 7g。上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基的制备方法，具体制备步骤如下(I)按上述各组分的配比精确称取规定重量的组分；(2)在蒸馏水溶液中溶解；(3)用50%氨水溶液调节pH值至6. 8 7. 4 ;(4)装入补料瓶中在115°C，20分钟条件下灭菌，即得。本发明的有益效果是上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基，在重组大肠杆菌发酵过程中避免或减少了乙酸的生成，减轻了传统工艺发酵过程中对菌体生长及蛋白表达的抑制作用，实现了重组大肠杆菌的高密度生长，提高了重组鸡α干扰素蛋白的产率，从而有效降低了生产成本；其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。 (3)用50%氨水溶液调节pH值至7. O ;(4)装入补料瓶中在115°C，20分钟条件下灭菌，即得。实施例4一种用于重组鸡干扰素α的补料培养基，主要由葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、MgSO4 · 7H20、NaCl 和 H2O 组成，其中葡萄糖 130g、蛋白胨 45g、酵母粉 35g、MgSO4 · 7H20 6g、NaCl 5g、H20 1L。上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基的制备方法，具体制备步骤如下(I)按上述各组分的配比精确称取规定重量的组分；(2)在蒸馏水溶液中溶解； (3)用50%氨水溶液调节pH值至7. 2 ;(4)装入补料瓶中在115°C，20分钟条件下灭菌,即得。实施例5一种用于重组鸡干扰素α的补料培养基，主要由葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、MgSO4 · 7H20、NaCl 和 H2O 组成，其中葡萄糖 120g、蛋白胨 60g、酵母粉 35g、MgSO4 · 7H20 2g、NaCl 3g、H20 1L。上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基的制备方法，具体制备步骤如下(I)按上述各组分的配比精确称取规定重量的组分；(2)在蒸馏水溶液中溶解；(3)用50%氨水溶液调节pH值至6. 8 ;(4)装入补料瓶中在115°C，20分钟条件下灭菌,即得。实施例6—种用于重组鸡干扰素α的补料培养基，主要由葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、MgSO4 · 7H20、NaCl 和 H2O 组成，其中葡萄糖 260g、蛋白胨 30g、酵母粉 15g、MgSO4 · 7H20 6g、NaCl 7g、H20 1L。上述用于重组鸡干扰素α的补料培养基的制备方法，具体制备步骤如下(I)按上述各组分的配比精确称取规定重量的组分；(2)在蒸馏水溶液中溶解；(3)用50%氨水溶液调节pH值至7. 4 ;(4)装入补料瓶中在115°C，20分钟条件下灭菌,即得。将实施例1-6之一所述各组分用量按照相同比例增加或减少，所得各组分的用量配比关系均属于本发明的保护范围。对照试验例现有技术中用于重组鸡干扰素α的发酵培养基，主要由葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、KH2PO4, K2HPO4, Na2HPO4 · 12H20、NaCl、消泡剂和H2O组成，其中葡萄糖20g、蛋白胨10g、酵母粉 10g、KH2PO4 3g、K2HPO4 2g、Na2HPO4 · 12H203g、NaCl 5g、消泡剂 0. 2g、H2O IL0 具体制备步骤如下(I)按上述各组分的配比精确称取规定重量的组分；(2)在蒸馏水溶液中溶解；(3)用50%氨水溶液调节pH值至7. O ;(4)在发酵罐内，121 °C，20分钟条件下灭菌，即得。现有技术中用于重组鸡干扰素α的补料培养基，主要由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、MgSO4 · 7Η20 和 H2O 组成，其中葡萄糖 600g，酵母粉 50g，蛋白胨 25g，MgSO4 · 7H20 10g、H2OILo具体制备步骤如下(I)按上述各组分的配比精确称取规定重量的组分；(2)在蒸馏水溶液中溶解；(3)用50%氨水溶液调节pH值至7. O ;(4)装入补料瓶中在115°C，20分钟条件下灭菌,即得。试验方法在上述发酵罐中按10%接入重组大肠杆菌种子后进行培养，在溶解氧第一次反弹时补加补料培养基，控制溶氧不低于20%，待菌体进入对数生长期开始添加IPTG诱导，至发酵结束，获得含重组鸡α干扰素的菌体并检测菌体的目的蛋白(重组鸡α干扰素)表达量。其中实施例1-6与对照试验例采用相同的发酵培养基，实施例1-6与对照试验例采用各自所述补料培养基进行试验，结果见表I。表I

本发明提供了一种用于重组鸡干扰素α的补料培养基及其制备方法，所述补料培养基主要由葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、MgSO4·7H2O、NaCl和H2O组成，其中每1L H2O中含有葡萄糖120～260g、蛋白胨30～60g、酵母粉15～35g、MgSO4·7H2O 2～6g、NaCl 3～7g；所述用于重组鸡干扰素α的补料培养基在重组大肠杆菌发酵过程中避免或减少了乙酸的生成，减轻了传统工艺发酵过程中对菌体生长及蛋白表达的抑制作用，实现了重组大肠杆菌的高密度生长，提高了重组鸡α干扰素蛋白的产率，从而有效降低了生产成本；其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。