专利名称:利用叶柄获得胭脂花体细胞再生植株的方法及其培养基的制作方法胭脂花(Primula maximowiczii),别名段报春,蒙名为套日格-哈布日西勒-其其格,属报春花科(Primulaceae)报春花属(Primula),为一种早春开花的多年生草本野生花卉。主要分布于我国东北、华北至西北的亚高山草甸及较高山林地下、林缘和潮湿腐殖质丰富的地方,其观赏价值高,是一种很有园林开发价值的野生花卉。胭脂花还是一种野生的蒙药药用植物,据《新华本草纲要》记载,全草可以入药,有止痛、祛风的功能,可用于治疗癫痫 头痛。由于胭脂花分布海拔较高,入药需求量较大,近年来已日益匮乏。目前,有关胭脂花的研究工作主要集中在种子萌发条件、不同条件对胭脂花生长发育的影响、染色体核型观察及化学成分等,有关胭脂花的离体培养研究很少。
本发明的一个目的是提供一种用于获得胭脂花(Primula maximowiczii)体细胞再生植株的成套培养基,含有独立包装的培养基A ;所述培养基A为由MS培养基、2,4- 二氯苯氧乙酸和噻苯隆制成的固体培养基;所述2,4-二氯苯氧乙酸在所述培养基A中的含量为I.Omg/L一2. Omg/L ;所述噻苯隆在所述培养基A中的含量为I. Omg/L一4. 0mg/L。在上述成套培养基中,所述2,4- 二氯苯氧乙酸在所述培养基A中的含量具体可为1.0mg/L 或 2. 0mg/Lo在上述成套培养基中,所述噻苯隆在所述培养基A中的含量具体可为I. 0mg/L、2.0mg/L 或 4. 0mg/Lo在上述成套培养基中,所述成套培养基还含有独立包装的培养基B ;所述培养基B为由MS培养基、2,4- 二氯苯氧乙酸和6-苄氨基腺嘌呤制成的固体培养基;所述2,4- 二氯苯氧乙酸在所述培养基B中的含量为4. 0mg/L,所述6-节氨基腺嘌呤在所述培养基B中的含量为2. 0mg/L。在上述成套培养基中,所述MS培养基为表I所不的培养基。本发明的另一个目的是提供一种获得胭脂花(Primula maximowiczii)体细胞再生植株的方法,包括将所述胭脂花的叶柄用所述培养基A培养获得所述胭脂花的不定芽,最后获得所述胭脂花的再生植株。在上述方法中,所述胭脂花的叶柄取自株高为2_3cm的所述胭脂花实生苗。在上述方法中,还包括将所述胭脂花不定芽用所述培养基B进行扩繁培养的步骤。在上述方法中,还包括将所述胭脂花不定芽用不含植物生长调节剂的MS培养基进行生根培养的步骤。在上述方法中,所述培养的光照和温度条件如下每天24小时中光照16小时,光照强度为1500-2000LUX,其余时间为黑暗,温度为25°C。实验证明,将胭脂花(Primula maximowiczii)叶柄外植体在含不同浓度植物生长调节剂2,4-D (I. 0-2. Omg/L)和TDZ (I. 0-4. Omg/L)组合的MS培养基中进行诱导,不定芽诱导率在19. 0%—52. 4%之间,明显高于含单一的植物生长调节剂2,4-D (I. 0-4. Omg/L)或TDZ (I. 0-4. Omg/L)的MS培养基的不定芽诱导率2. 4% —19. 0%。在含2,4-D 4. 0mg/L和6-BA 2. 0mg/L的MS培养基中进行不定芽扩繁培养,扩增系数可达9. 2。本发明以胭脂花叶柄为外植体,建立了完整稳定的胭脂花体细胞再生体系,对有效保护和利用野生胭脂花资源具有重要价值。
图I为本发明使用的胭脂花(Primula maximowiczii)无菌实生苗。图2为胭脂花叶柄外植体在不定芽诱导培养基上培养14天产生的不定芽。图3为胭脂花不定芽经扩繁培养14天产生的丛生不定芽。图4为胭脂花不定芽经生根培养获得的再生苗。图5为移栽成活的胭脂花再生植株。
本发明公开了一种利用叶柄获得胭脂花体细胞再生植株的方法及其培养基。将胭脂花(Primula maximowiczii)叶柄外植体在含不同浓度植物生长调节剂2,4-D(1.0-2.0mg/L)和TDZ(1.0-4.0mg/L)组合的MS培养基中进行诱导的不定芽诱导率在19.0%—52.4%之间,明显高于含不同单一的植物生长调节剂2,4-D(1.0-4.0mg/L)或TDZ(1.0-4.0mg/L)的MS培养基的不定芽诱导率2.4%—19.0%。在含2,4-D 4.0mg/L和6-BA 2.0mg/L的MS培养基中进行不定芽扩繁培养,扩增系数可达9.2。本发明以胭脂花叶柄为外植体,建立了完整稳定的胭脂花体细胞再生体系,对有效保护和利用野生胭脂花资源具有重要价值。
利用叶柄获得胭脂花体细胞再生植株的方法及其培养基制作方法
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