专利名称：与鸡胚体及其小肠发育水平相关的三种基因的制作方法鸡在胚胎期的发育状况影响其出壳后的生长发育，发育状况好的鸡胚在出壳后容易获得更好的生产性能。一些生理指标由于与鸡胚发育有一定的正相关关系，被用于评价鸡胚发育的水平，但是随着养禽业的发展以及科学知识水平的提高，对鸡胚发育的认识越来越深入，在实践中逐渐发现一些传统的鸡胚发育标志物存在诸多的局限性，科学的、新的标志物有待开发。在此背景条件下，本发明借助分子生物学、发育生物学、统计学等知识和相关研究技术，开发鸡胚发育的标志基因，更加科学、有效地评价鸡胚的发育状况，为科学 研究和养禽生广提供参考。
本发明的目的在于根据现有技术中存在的上述不足，提供根据不同品种肉鸡胚胎发育轨迹及其小肠氨基酸转运载体和寡肽转运载体基因表达的特点，从而开发出科学有效的鸡胚发育标志基因。本发明上述目的通过以下技术方案以予实现 本发明通过孵化试验发现了不同品种鸡胚体的发育轨迹不同，不同器官的发育轨迹也不尽相同，小肠的发育轨迹与胚体最为接近。鸡胚的发育与其对营养物质的吸收密切相关，氨基酸和寡肽是合成蛋白质的主要原料，它们的吸收效率在鸡胚发育的过程中显得尤为重要，小肠中氨基酸转运载体和寡肽转运载体的表达是影响氨基酸和寡肽吸收效率的主要因素。本发明通过real-time RT-PCR的方法，发现不同品种鸡胚小肠中碱性氨基酸转运载体b°，+AT、酸性氨基酸转运载体EAAT3和寡肽转运载体PepTl的基因表达与胚体以及小肠的重量高度相关，进而建立b°，+AT、EAAT3和P印Tl基因表达与鸡胚重量和小肠重量的数学模型，通过检测以上三种基因的表达结合已经建立的数学模型来评价鸡胚发育。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果 (I)更科学综合运用分子生物学、发育生物学、生物信息学等知识及相关研究技术，根据研究对象的特点，逐层深入地研究其内在联系，最终发现鸡胚小肠中的b°，+AT、EAAT3和PepTl基因表达可作为鸡胚发育的标志基因，开发思路和方法科学可信。(2)更准确传统的一些用作鸡胚发育标志物的生理指标使用的检测方法较为简单，在一定程度上引起了检测结果与实际情况的偏差，real-time RT-PCR法检测基因表达因具有较高的准确性而被普遍接受和广泛使用。(3)更灵敏鸡胚发育的过程也是功能基因发挥功能的过程，功能基因的表达在时空上与鸡胚的发育密切相关，小肠中b°，+AT、EAAT3和PepTl基因的表达水平更灵敏地反映了鸡胚及其小肠的发育水平。 1.鸡胚孵化 选取产蛋日龄相同的温氏土鸡和白洛克鸡所产种蛋各96枚，温氏土鸡种蛋重量为44.17 土 0.30 g，白洛克鸡种蛋为58. 40 土 0.23 g，每个品种种蛋随机分为6组，每组16枚。用科裕MFP微电脑自动孵化机进行孵化，孵化条件为温度37. 9°C，湿度60% RH，翻蛋周期2 h，翻蛋时间180 S，换气周期2 h，换气时间30 S。
温氏土鸡和白洛克鸡胚重量与胚龄的相关系数分别为O. 992和O. 989，回归方程分别为 Y=-20. 11+2. 23Χ 和 Y=-25. 37+2. 75Χ。表I鸡胚重量与胚龄的数学关系


本发明公开了三种基因，其表达与鸡胚体及其小肠重量高度相关，这三种基因是鸡胚小肠中碱性氨基酸转运载体b0,+AT基因、酸性氨基酸转运载体EAAT3基因和寡肽转运载体PepT1基因。通过本发明三种基因可以准确灵敏地反映鸡胚及其小肠的发育水平。